Name: isolation and culture of adult epithelial stem cells from human skin
Uploaded: 2011-03-31T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin at JoVE.com

Detta arbete finansieras av NIH / NCI bevilja R01CA-118.916

1. Utdrag Epithelial stamceller från mänskliga Skin <ol><li> Innan du börjar proceduren att isolera epitelceller stamceller måste man förbereda respektive medier och reagenser (se tabell 1). </li><li> Färska vuxen människa hårbotten hud från ansiktslyftning förfaranden eller stansbiopsi samlas, sedan inkubera i DMEM / 10% FBS / Dispase (4 mg / ml) över natten vid 4 ° C. Inkubation för 2-4 tim vid 37 ° C är också effektivt. Hud bitar bör en maximal bredd på 1 cm för att möjliggöra enzym att penetre...

<ol>
	<li>Jones, P. H., Watt, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+human+epidermal+stem+cells+from+transit+amplifying+cells+on+the+basis+of+differences+in+integrin+function+and+expression.">Separation of human epidermal stem cells from transit amplifying cells on the basis of differences in integrin function and expression.</a> Cell. 73, 713-724 (1993).</li><li>Lyle, S., Christofidou-Solomidou, M., Liu, Y., Elder, D. E., Albelda, S., Cotsarelis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C8/144B+monoclonal+antibody+recognizes+cytokeratin+15+and+defines+the+location+of+human+hair+follicle+stem+cells.">The C8/144B monoclonal antibody recognizes cytokeratin 15 and defines the location of human hair follicle stem cells.</a> J. Cell. Sci. 111, 3179-3188 (1998).</li><li>Bac, S. P., Reneha, A. G., Potte, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells:+the+intestinal+stem+cell+as+a+paradigm.">Stem cells: the intestinal stem cell as a paradigm.</a> Carcinogenesis. 21, 469-476 (2000).</li><li>Slac, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+in+epithelial+tissues.">Stem cells in epithelial tissues.</a> Science. 287, 1431-1433 (2000).</li><li>It, M., Li, Y., Yan, Z., Nguye, J., Lian, F., Morri, R. J., Cotsarelis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+in+the+hair+follicle+bulge+contribute+to+wound+repair+but+not+to+homeostasis+of+the+epidermis.">Stem cells in the hair follicle bulge contribute to wound repair but not to homeostasis of the epidermis.</a> Nat Med. 11, 1351-134 (2005).</li><li>Spradlin, A., Drummond-Barbos, D., Kai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+find+their+niche.">Stem cells find their niche.</a> Nature. 414, 98-104 (2001).</li><li>Taylo, G., Lehre, M. S., Jense, P. J., Su, T. T., Lavke, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Involvement+of+follicular+stem+cells+in+forming+not+only+the+follicle+but+also+the+epidermis.">Involvement of follicular stem cells in forming not only the follicle but also the epidermis.</a> Cell. 102, 451-461 (2000).</li><li>Oshim, H., Rocha, A., Kedzi, C., Kobayash, K., Barrandon, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphogenesis+and+renewal+of+hair+follicles+from+adult+multipotent+stem+cells.">Morphogenesis and renewal of hair follicles from adult multipotent stem cells.</a> Cell. 104, 233-245 (2001).</li><li>Morri, R. J., Li, Y., Marle, L., Yan, Z., Trempu, C., L, S., Li, J. S., Sawick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cotsarelis+G+Capturing+and+profiling+adult+hair+follicle+stem+cells.">Cotsarelis G Capturing and profiling adult hair follicle stem cells.</a> Nat. Biotechnol. 22, 411-417 (2004).</li><li>Ro, C., Roch, M., Gu, Z., Photopoulo, C., Ta, Q., Lyle, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-potentiality+of+a+new+immortalized+epithelial+stem+cell+line+derived+from+human+hair+follicles.">Multi-potentiality of a new immortalized epithelial stem cell line derived from human hair follicles.</a> In vitro Cell. &#38; Dev. Biol. 44, 236-244 (2008).</li><li>Ohyama, M., Vogel, J. C. G. e. n. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=delivery+to+the+hair+follicle.">delivery to the hair follicle.</a> J Investig Dermatol Symp Proc. 8, 204-206 (2003).</li><li>Sugiyama-Nakagiri, Y., Akiyama, M., Shimizu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hair+follicle+stem+cell-targeted+gene+transfer+and+reconstitution+system.">Hair follicle stem cell-targeted gene transfer and reconstitution system.</a> Gene Ther. 13, 732-737 (2006).</li><li>Stenn, K. S., Cotsarelis, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioengineering+the+hair+follicle:+fringe+benefits+of+stem+cell+technology.">Bioengineering the hair follicle: fringe benefits of stem cell technology.</a> Curr Opin Biotechnol. 16, 493-497 (2005).</li><li>Hoeller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+and+rapid+method+to+construct+skin+equivalents+from+human+hair+follicles+and+fibroblasts.+Exp+Dermatol+10.">An improved and rapid method to construct skin equivalents from human hair follicles and fibroblasts. Exp Dermatol 10.</a> , 264-271 (2001).</li><li>Navsaria, H. A., Ojeh, N. O., Moiemen, N., Griffiths, M. A., Frame, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reepithelialization+of+a+full-thickness+burn+from+stem+cells+of+hair+follicles+micrografted+into+a+tissue-engineered+dermal+template+(Integra).">Reepithelialization of a full-thickness burn from stem cells of hair follicles micrografted into a tissue-engineered dermal template (Integra).</a> Plast Reconstr Surg. 113, 978-981 (2004).</li><li>Werni, M., Meissne, A., Forema, R., Brambrin, T., K, M., Hochedlinge, K., Bernstei, B. E., Jaenisch, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+reprogramming+of+fibroblasts+into+a+pluripotent+ES-cell-like+state.">In vitro reprogramming of fibroblasts into a pluripotent ES-cell-like state.</a> Nature. 448, 318-324 (2007).</li><li>Par, I. H., Zha, R., Wes, J. A., Yabuuch, A., Hu, H., Inc, T. A., Lero, P. H., Lensc, M. W., Dale, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reprogramming+of+human+somatic+cells+to+pluripotency+with+defined+factors.">Reprogramming of human somatic cells to pluripotency with defined factors.</a> Nature. 451, 141-146 (2008).</li><li>Kazantsev, A., Goltso, A., Zinchenk, R., Grigorenk, A. P., Abrukov, A. V., Moliak, Y. K., Kirillo, A. G., Gu, Z., Lyl, S., Ginte, E. K., Rogae, E. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hair+growth+deficiency+is+linked+to+a+genetic+defect+in+the+phospholipase+gene+LIPH.">Human hair growth deficiency is linked to a genetic defect in the phospholipase gene LIPH.</a> Science. 314, 982-985 (2006).</li><li>Tola, J., Ishida-Yamamot, A., Riddl, M., McElmurr, R. T., Osbor, M., Xi, L., Lun, T., Slatter, C., Uitt, J., Christian, A. M., Wagne, J. E., Blaza, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amelioration+of+epidermolysis+bullosa+by+transfer+of+wild-type+bone+marrow+cells.">Amelioration of epidermolysis bullosa by transfer of wild-type bone marrow cells.</a> Blood. 113, 1167-1174 (2009).</li><li>Wagne, J. E., Ishida-Yamamot, A., McGrat, J. A., Hordinsk, M., Keen, D. R., Riddl, M. J., Osbor, M. J., Lun, T., Dola, M., Blaza, B. R., Tolar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow+transplantation+for+recessive+dystrophic+epidermolysis+bullosa.">Bone marrow transplantation for recessive dystrophic epidermolysis bullosa.</a> N Engl J Med. 363, 629-639 (2010).</li><li>Muraue, E. M., Gach, Y., Grat, I. K., Klausegge, A., Mus, W., Grube, C., Meneguzz, G., Hintne, H., Baue, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Correction+of+Type+VII+Collagen+Expression+in+Dystrophic+Epidermolysis+Bullosa.">Functional Correction of Type VII Collagen Expression in Dystrophic Epidermolysis Bullosa.</a> J Invest Dermatol. , (2010).</li><li>Y, H., Kuma, S. M., Kossenko, A. V., Show, L., X, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+with+neural+crest+characteristics+derived+from+the+bulge+region+of+cultured+human+hair+follicles.">Stem cells with neural crest characteristics derived from the bulge region of cultured human hair follicles.</a> J Invest Dermatol. 130, 1227-1236 (2010).</li><li>Nishimur, E. K., Grante, S. R., Fishe, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+hair+graying:+incomplete+melanocyte+stem+cell+maintenance+in+the+niche.">Mechanisms of hair graying: incomplete melanocyte stem cell maintenance in the niche.</a> Science. 307, 720-724 (2005).</li></ol>

Cellen utvinning och kultur beskrivna metoderna är förvånansvärt lättvindigt och reproducerbara. Vi har genererat epitelceller kulturer stamceller från dussintals av individer inom ett brett åldersintervall, inklusive patienter med ärftlig skalet 18. Det är bäst att starta processen på dagen för vävnaden skörd, men cellerna förblir livskraftiga i media på is i flera dagar, underlätta natten frakt om det behövs. Kasserade ansiktslyftning hud skördar hundratals livskraftiga äggblåsor för c...

Keratinocyte media (KCM) [DMEM och Ham s F12 (GIBCO, 3:1), adenin (Sigma, 180 mm), 10% fetalt bovint serum (GIBCO), kolera toxin (ICN, 0,1 nM), penicillin / streptomycin (GIBCO, 100 U / ml och 100 mg / ml), hydrokortison (Sigma, 0,4 mg / ml, 1,1 mm), T/T3 (transferrin, GIBCO, 5 mikrogram / ml, 649 nm, och triiodo-l-thyronine, Sigma, 2 nm) , insulin (Sigma, 5 mg / ml, 862 nM) och fonden (Sigma, 10 ng / ml, 1,6 nM), pH 7,2]

isolation and culture of adult epithelial stem cells from human skin

Den homeostas av alla själv förnya vävnader är beroende av vuxna stamceller. Som odifferentierade stamceller genomgå asymmetrisk divisioner, genererar de dottern celler som behåller fenotyp stamceller och transit-förstärkning celler (TA celler) att migrera från stamceller nisch, genomgår en snabb spridning och obotligt differentiera att återbefolka vävnaden. Epitelceller stamceller har identifierats i epidermis, hårsäckar och tarmar som celler med hög in vitro-proliferativ potential och som långsamt cykla etiketten behålla celler in vivo 1-3. Vuxen, vävnads-specifika stamceller ansvarar för regenerering av vävnader där de bor under normala fysiologiska såväl omsättning som under tider av stress 4-5. Dessutom är stamceller i allmänhet vara flera potent, som har förmågan att ge upphov till flera celltyper i vävnaden 6. Till exempel kan gnagare hårsäcken stamceller generera överhuden, talgkörtlar och hårsäckar 7-9. Vi har visat att stamceller från mänskliga hårsäcken bula regionen uppvisar flera potentialitet 10. Stamceller har blivit ett värdefullt verktyg inom biomedicinsk forskning, på grund av deras nytta som ett in vitro-system för att studera utvecklingsbiologi, differentiering, Tumörgenesens och för deras eventuella terapeutiska nyttan. Det är troligt att vuxna epitelceller stamceller kommer att vara användbart vid behandling av sjukdomar som ektodermal dysplasier, monilethrix, Nethertons syndrom, Menkes sjukdom, ärftlig epidermolysis bullosa och alopeci 11-13. Dessutom kommer andra hudproblem såsom brännskador, kroniska sår nytta stamcellsrelalerad terapier 14,15. Med tanke på den potential för omprogrammering av vuxna celler till en pluripotenta tillstånd (iPS-celler) 16,17, får lättillgänglig och utbyggbart vuxna stamceller i huden hos människa ger en värdefull källa av celler för induktion och nedströms terapi för en mängd sjukdomar, inklusive diabetes och Parkinsons sjukdom.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin at JoVE.com

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

En snabb, robust sätt att isolera livskraftiga vuxna epitelceller stamceller från mänsklig hud beskrivs. Metoden utnyttjar enzymatisk nedbrytning av hudens kollagen matrix, följt av plockning av hårsäckarna och isolering av enstaka cellsuspensioner eller fragment vävnad för cellodling.

Isolering och odling av vuxna Epithelial stamceller från mänskliga Skin

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells

Isolering och storskalig expansion av vuxen människa Endothelial kolonibildande progenitorceller

This paper introduces a novel recovery strategy for endothelial colony forming progenitor cells (ECFCs) from heparinized but otherwise unmanipulated adult ...

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Adulta och embryonala skelettmuskler Microexplant Kultur och Isolering av skelettet muskelceller Stem

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Isolation of Stem Cells from Human Pancreatic Cancer Xenografts

Isolering av stamceller från mänskliga xenografter Pankreascancer

Cancer stem cells (CSCs) have been identified in a growing number of malignancies and are functionally defined by their ability to undergo self-renewal ...

Isolation of Mammary Epithelial Cells from Three-dimensional Mixed-cell Spheroid Co-culture

Isolering av bröstepitelialceller celler från tre-dimensionell Mixed-cell sfäroid Co-kultur

While enormous efforts have gone into identifying signaling pathways and molecules involved in normal and malignant cell behaviors1-2, much of this work ...

Isolation and Culture of Individual Myofibers and their Satellite Cells from Adult Skeletal Muscle

Isolering och odling av individuella Myofibers och deras satellit celler från vuxna skelettmuskulatur

Muscle  regeneration in the adult is performed by resident stem cells called satellite  cells. Satellite cells are defined by  their position between the ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Naiv Vuxna stamceller Isolering från primära humana fibroblastkulturer

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induktion och Analys av Epithelial till mesenkymala övergång

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

Manual Isolation of Adipose-derived Stem Cells from Human Lipoaspirates

Manuell Isolering av Fett-härledda stamceller från mänskliga Lipoaspirates

In 2001, researchers at the University of  California, Los Angeles, described the isolation of a new population of adult  stem cells from liposuctioned ...

Isolation, Culture, and Transplantation of Muscle Satellite Cells

Isolering, kultur, och transplantation av muskelsatellitceller

Muscle satellite cells are a stem cell population required for postnatal skeletal muscle development and regeneration, accounting for 2-5% of sublaminal ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolering och kultur av Dental epitelceller stamceller från vuxen mus Incisor

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...