Name: dissection of a mouse eye for a whole mount of the retinal pigment epithelium
Uploaded: 2011-02-27T16:00:00
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इस काम पर्यावरणीय स्वास्थ्य विज्ञान के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा समर्थित किया गया था [K22ES012264 AJRB] और अमेरिकन कैंसर सोसायटी InstitutionalResearch अनुदान [ACS-IRG-00-173-04] पायलट projectaward [AJRB] हम भी क्या करना है नहीं के उदाहरण के लिए बिशप प्रयोगशाला के सदस्यों, पांडुलिपि और और विशेष रूप से वीडियो एडम ब्राउन पर टिप्पणी की आलोचना पढ़ने के लिए धन्यवाद. हम Greehey बच्चों के कैंसर रिसर्च इंस्टीट्यूट के डॉ. डोनाल्ड McEwen हमें विच्छेदन वीडियो के फिल्मांकन के लिए अपने विदारक गुंजाइश / वीडियो कैमरा सेट अप का उपयोग की अनुमति के लिए धन्यवाद. हम Corte उपकरण sharpening और हमारे microdissection उपकरणों की मरम्मत के लिए Daron ब्राउन धन्यवाद.

1. आंख के बाहर से असंबद्ध ऊतक निकालें <ol><li> एक 35 मिमी डिश के ढक्कन में 1X पीबीएस डालो. बस ढक्कन के होंठ के नीचे स्तर होना चाहिए. </li><li> भंडारण ट्यूब से सीधे संदंश, स्थानांतरण आंख (ओं) को 35 मिमी पकवान का उपयोग. : 1 आंखे...

<ol>
	<li>Bishop, A. J., Kosaras, B., Sidman, R. L., Scheistl, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benzo(a)pyrene+andX-rays+induce+reversions+of+the+pink-eyed+unstable+mutation+in+the+retinal+pigmentepithelium+of+mice.">Benzo(a)pyrene andX-rays induce reversions of the pink-eyed unstable mutation in the retinal pigmentepithelium of mice.</a> Mutat. Res.. 457, 31-31 (2000).</li><li>Reliene, R. H. l. a. v. a. c. o. v. e., Mahadevan, A., Baird, B., M, W., Schiestl, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diesel+exhaust+particles+cause+increased+levels+of+DNA+deletions+after+transplacental+exposure+in+mice.">Diesel exhaust particles cause increased levels of DNA deletions after transplacental exposure in mice.</a> Mutat. Res. 570, 245-2452 (2005).</li><li>Bishop, A. J., Barlow, C., Wynshaw-Boris, A. J., Scheistl, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atm+deficiency+causes+increased+frequency+of+intrachromosomal+homologous+recombination+in+mice.">Atm deficiency causes increased frequency of intrachromosomal homologous recombination in mice.</a> Cancer Res. 60, 395-399 (2000).</li><li>Brown, A. D., Claybon, A. B., Bishop, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+WRN+helicase+domain+is+not+required+for+spontaneous+homologous+recombination-mediated+DNA+deletion.">Mouse WRN helicase domain is not required for spontaneous homologous recombination-mediated DNA deletion.</a> J. Nucleic Acids. , (2010).</li><li>Claybon, A., Karia, B., Bruce, C., Bishop, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PARP1+suppresses+homologous+recombination+events+in+mice+in+vivo.">PARP1 suppresses homologous recombination events in mice in vivo.</a> Nucleic Acids Res. , (2010).</li><li>Bishop, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=p53-,+and+Gadd45a-deficient+mice+show+an+increased+frequency+ofhomologous+recombination+at+different+stages+during+development.">p53-, and Gadd45a-deficient mice show an increased frequency ofhomologous recombination at different stages during development.</a> Cancer Res. 63, 5335-5343 (2003).</li><li>Bodenstein, L., Sidman, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+and+development+of+the+mouse+retinalpigment+epithelium.+Part+I.+Cell+and+tissue+morphometrics+and+topography+of+mitoticactivity.">Growth and development of the mouse retinalpigment epithelium. Part I. Cell and tissue morphometrics and topography of mitoticactivity.</a> Dev Biol. 121, 192-204 (1987).</li><li>Burke, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+phenotype+and+the+RPE:+is+the+answer+blowing+in+the+Wnt?.">Epithelial phenotype and the RPE: is the answer blowing in the Wnt?.</a> Prog Retin. Eye Res. 27, 579-595 (2008).</li></ol>

RPE पी संयुक्त राष्ट्र परख के स्थल अनुरूपता निर्देशित की मरम्मत के vivo परख में एक है. पी संयुक्त राष्ट्र परख अलग डीएनए नुकसान के प्रभाव 1,2 और अनुरूपता निर्देशित की मरम्मत की आवृत्?...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
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		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>straight forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-4903</td>
<td>tip: .08 x .04 mm material: INOX</td>
</tr>
<tr>
<td>45&deg; forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5005</td>
<td>tip: .05 x.01 mm material: INOX</td>
</tr>
<tr>
<td>15&deg; "up" forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5045A</td>
<td>tip: .1 x.06 mm material: INOX</td>
</tr>
<tr>
<td>spring scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5604</td>
<td>comb. tip width 0.3mm cutting edge length 3mm material: stainless steel</td>
</tr>
<tr>
<td>binocular dissecting microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ziess</td>
<td>Discovery V.8</td>
<td>use reflected light source</td>
</tr>
<tr>
<td>phalloidin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A22283</td>
<td>Alexa Fluor 546</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

dissection of a mouse eye for a whole mount of the retinal pigment epithelium

रेटिना वर्णक उपकला (RPE) स्तनधारी आँख के पीछे सिर्फ तंत्रिका रेटिना, जिसमें photoreceptors (छड़ और शंकु) के तहत निहित है. RPE pigmented cuboidal को यह बस के ऊपर तंत्रिका रेटिना के साथ मिलकर कोशिकाओं और सहयोगियों की एक monolayer है. इस संघ रेटिना रोगों के अध्ययन के शोधकर्ताओं के लिए महान ब्याज की RPE बनाता है. RPE भी अनुरूपता निर्देश डीएनए की मरम्मत, पी संयुक्त राष्ट्र परख के vivo परख में एक साइट है. अपने छोटे आकार की वजह से काटना (लगभग 3.5mm व्यास में) और उसके गोलाकार आकार माउस आँख विशेष रूप से कठिन है. इस लेख में विस्तार से RPE की एक पूरी माउंट परिणामस्वरूप आँख के विच्छेदन के लिए एक प्रक्रिया को दर्शाता है. इस प्रक्रिया में, हम बताते हैं कैसे के खिलाफ है, आंख की गोलाकार संरचना के साथ, बजाय काम करने के लिए. संक्षेप में, संयोजी ऊतक, मांसपेशियों, और ऑप्टिक तंत्रिका आँख के पीछे से हटा रहे हैं. फिर, कॉर्निया और लेंस को हटा रहे हैं. अगला, रणनीतिक कटौती शेष ऊतक के महत्वपूर्ण सपाट में है कि परिणाम बना रहे हैं. अंत में, तंत्रिका रेटिना धीरे बंद उठाया है, एक अक्षुण्ण RPE, जो अभी भी अंतर्निहित रंजित और श्वेतपटल से जुड़ा हुआ है खुलासा. यह पूरी माउंट पी संयुक्त राष्ट्र या RPE ऊतक के immunohistochemistry या immunofluorescent मूल्यांकन के लिए परख करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

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Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium

एक माउस आँख के विच्छेदन के एक औपचारिक प्रदर्शन, रेटिना वर्णक उपकला की एक पूरी माउंट में जिसके परिणामस्वरूप.

एक माउस आँखों के रेटिना वर्णक उपकला के एक पूरे पर्वत के लिए विच्छेदन

The retinal pigment epithelium (RPE) lies at the back of the mammalian eye, just under the neural retina, which contains the photoreceptors (rods and ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Experimental Models for Study of Retinal Pigment Epithelial Physiology and Pathophysiology

रेटिना वर्णक उपकला फिजियोलॉजी और pathophysiology के अध्ययन प्रायोगिक मॉडल

We have developed a cell culture procedure that can produce large quantities of confluent monolayers of primary human fetal retinal pigment epithelium ...

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

वयस्क के पूरा पर्वत तैयार ड्रोसोफिला Ventral तंत्रिका गर्भनाल विशालकाय फाइबर डाई के इंजेक्शन के लिए

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य माउस sciatic तंत्रिका और पूरे पर्वत स्नायु विश्लेषण द्वारा पुनर्जनन के बाद आकलन क्रश

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

विच्छेदन, संस्कृति, और विश्लेषण<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; भ्रूण ऊतक रेटिना

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

पूरे माउंट न्यूरोमस्कुलर जंक्शन विश्लेषण के लिए ट्रांस बनाम एब्डोमिनिस मांसपेशी का विच्छेदन

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Limbal Approach-Subretinal Injection of Viral Vectors for Gene Therapy in Mice Retinal Pigment Epithelium

चूहे रेटिना वर्णक उपकला में जीन थेरेपी के लिए वायरल वाहक के Limbal दृष्टिकोण subretinal इंजेक्शन

The eye is a small and enclosed organ which makes it an ideal target for gene therapy. Recently various strategies have been applied to gene therapy in ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

पूरा पर्वत विच्छेदन और वयस्क माउस कोक्लीअ के immunofluorescence

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

एक साधारण एक कदम प्रौढ़ की साबुत माउंट तैयारी के लिए विच्छेदन प्रोटोकॉल<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; दिमाग

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Preparation of Mouse Retinal Cryo-sections for Immunohistochemistry

इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के लिए माउस रेटिना लयाओ-अनुभागों की तैयारी

Preparation of high-quality mouse eye sections for immunohistochemistry (IHC) is critical for assessing the retinal structure and function and for ...

Long-Term, Serum-Free Cultivation of Organotypic Mouse Retina Explants with Intact Retinal Pigment Epithelium

बरकरार रेटिना पिगमेंट एपिथेलियम के साथ ऑर्गैयपिक माउस रेटिना एक्सप्लांट की लंबी अवधि, सीरम-मुक्त खेती

In ophthalmic research, there is a strong need for in vitro models of the neuroretina. Here, we present a detailed protocol for organotypic culturing of ...