Name: clonogenic assay: adherent cells
Uploaded: 2011-03-13T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Clonogenic Assay: Adherent Cells at JoVE.com

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> ومن المسلم به بدعم من المعهد الأسترالي للعلوم والهندسة النووية. وكان TCK المستلم من الجوائز AINSE. يتم اعتماد مختبر الطب التي Epigenomic الوطني للصحة ومجلس البحوث الطبية في استراليا (566559). HR معتمد من قبل الاسترالي بعد التخرج والجوائز BakerIDI شرارة مشرق. ويتم تمويل هذا العمل من قبل لجنة حقوق الطفل للتنمية الطبية المحدودة التصوير (CRC - BID) ، التي أنشئت بموجب ودعمت الحكومة الأسترالية مراكز البحوث التعاونية البرنامج. ثاني أكسيد الكربون هو المستفيد استرالي بعد التخرج الجائزة وعلى منحة تكميلية CRC - BID. </p>

<p class="jove_title" style=";text-align:right;direction:rtl"> 1. الثقافة الخلية وتعيين ما يصل التجريبي </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تمسك الكيراتينية monolayers الإنسان كما في 75 سم <sup>2</sup> القوارير زراعة الأنسجة التي تحتوي على 15 مل من SFM - خلية كيراتينية (K - SFM) المتوسط ​​(GIBCO والمصل خالية متوسطة) تستكمل مع الجلوتامي?...

<ol>
	<li>Puck, T. T., Marcus, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+of+x-rays+on+mammalian+cells.">Action of x-rays on mammalian cells.</a> <em style='font-style: italic'>J Exp Med</em>. <b>103</b>, 653-666 (1956).</li><li>Hurlin, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+human+papillomavirus+type+18-immortalized+human+keratinocytes+to+a+malignant+phenotype.">Progression of human papillomavirus type 18-immortalized human keratinocytes to a malignant phenotype.</a> <em style='font-style: italic'>Proc Natl Acad Sci U S A</em>. <b>88</b>, 570-574 (1991).</li></ol>

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> في هذا المثال تم علاج الإنسان FEP - 1811 الكيراتينية بتركيزات مختلفة تصل الى 100 ميكروغرام / مل CPF ؛ تظهر البيانات لمدة 20 ميكروغرام / مل CPF لمدة 1 ساعة عند 37 درجة مئوية. وكانت الخلايا المشع بعد العلاج مع 4 غراي باستخدام مصدر سيزيوم <sup>137</sup> (1000 Gammacell irradiator النخبة ؛ Nordion الدولية ، O...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Keratinocyte-serum free medium</td>
<td>Growth medium</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17005042</td>
<td>Supplemented with 2mM L-glutamine, 20&#x03BC;g/ml gentamicin, epidermal growth factor, bovine pituitary extract.
</td>
</tr>
<tr>
<td>Trypsin-EDTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15400-054</td>
<td>0.05% trypsin / EDTA to detach adherent cells; 10 x stock diluted in PBS w/o Ca<sup>2+</sup>/Mg<sup>2+</sup>.</td>
</tr>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s modified essential medium</td>
<td>Growth medium</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11885-084</td>
<td>Supplemented with 10% FBS and 20&mu;g/ml gentamicin; used to neutralise trypsin/EDTA.</td>
</tr>
<tr>
<td>0.09% Saline</td>
<td>Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td> Used to wash colonies.</td>
</tr>
<tr>
<td>10% Neutral buffered formalin solution</td>
<td>Solution</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>HT501128</td>
<td>~4% formaldehyde; used to fix colonies.</td>
</tr>
<tr>
<td>Crystal violet</td>
<td>Powder</td>
<td>SPI-Chem</td>
<td>02577-MB</td>
<td>0.01% crystal violet solution, prepared in dH<sub>2</sub>O, used to stain colonies.</td>
</tr>
<tr>
<td>Gammacell 1000 elite irradiator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nordion International Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petri dishes</td>
<td>60 x 15 mm</td>
<td>Falcon</td>
<td>353002</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Haemocytometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hawksley; Medical and Laboratory Equipment</td>
<td>AC1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cloning box</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Plastic box with holes punched at opposite sides of lid; for storing petri dishes during prolonged incubation for colony formation.</td>
</tr>
<tr>
<td>Stereomicroscope</td>
<td>Type 102</td>
<td>Nikon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Used to count colonies consisting of &gt;50 cells.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

clonogenic assay: adherent cells

<p class="jove_content" style=";text-align:right;direction:rtl"> تم تأسيس (أو تشكيل مستعمرة) مولد الرمع مقايسة لأكثر من 50 عاما ، وقد نشرت الورقة الأصلية التي تصف هذه التقنية في عام 1956 <sup>1.</sup> وبصرف النظر عن توثيق الأسلوب ، ولدت في دراسة المعالم الأولية أول منحنى الاستجابة للجرعة الاشعاع بالأشعة السينية المشع خلايا (هيلا) الثدييات في الثقافة <sup>1.</sup> في الأساس ، وفحص مولد الرمع تمكن من إجراء تقييم للاختلافات في البقاء الإنجابية (قدرة الخلايا على إنتاج ذرية ، أي خلية واحدة لتشكيل مستعمرة من 50 أو أكثر من الخلايا) بين الخلايا والخلايا غير المعالجة السيطرة التي خضعت العلاجات المختلفة مثل التعرض والإشعاع المؤين ، والمركبات الكيميائية المختلفة (وكلاء السامة للخلايا ، مثلا) أو في الحالات الأخرى التلاعب الجيني. أصبح مقايسة التقنية الأكثر قبولا في البيولوجيا الإشعاعية واستخدمت على نطاق واسع لتقييم مدى حساسية الإشعاع من خطوط مختلفة من الخلايا. كذلك ، يستخدم عادة لفحص مولد الرمع لرصد فعالية مركبات تعديل والإشعاع لتحديد تأثيرات العوامل السامة للخلايا وغيرها من العلاجات المضادة للسرطان على قدرة تشكيل مستعمرة ، في خطوط مختلفة من الخلايا. وبقاء مولد الرمع نموذجية التجربة باستخدام الخلايا الملتصقة خطوط ينطوي على ثلاثة عناصر متميزة ، 1) معالجة المونولاير خلية في قوارير زراعة الأنسجة ، 2) إعداد تعليق خلية واحدة والطلاء عدد مناسب من الخلايا في أطباق بتري و 3) تحديد وتلطيخ المستعمرات بعد فترة حضانة ذات الصلة ، والتي يمكن أن تتراوح بين 1-3 أسابيع ، اعتمادا على خط الخلية. نحن هنا لشرح اجراءات عامة لأداء مولد الرمع مقايسة مع خطوط الخلايا الملتصقة مع استخدام لخلد الإنسان خط خلية خلية كيراتينية (FEP - 1811) <sup>2.</sup> أيضا ، ويهدف لدينا هي لوصف الخصائص المشتركة للالمقايسات مولد الرمع بما في ذلك حساب الكفاءة والطلاء والكسور البقاء بعد التعرض للإشعاع من الخلايا ، ومثالا على التعديل استجابة للإشعاع مع استخدام صيغة الطبيعية المضادة للأكسدة. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Clonogenic Assay: Adherent Cells at JoVE.com

Clonogenic Assay: Adherent Cells

<p class="jove_content">وقد أنشئت انطباق مقايسة لتقييم جدوى مولد الرمع الإنجابية لأكثر من 50 عاما. نحن هنا لشرح اجراءات عامة لأداء مولد الرمع مقايسة مع خلايا ملتصقة.</p>

مولد الرمع الفحص : خلايا منتسب

The clonogenic (or colony forming) assay has been established for more than 50 years; the original paper describing the technique was published in 19561. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fabrication and Operation of an Oxygen Insert for Adherent Cellular Cultures 

تصنيع وتشغيل إدخال الأوكسجين للثقافات الخلوية منتسب

Oxygen is a key modulator of many cellular pathways, but current devices permitting in vitro oxygen modulation fail to meet the needs of biomedical ...

<em>In situ</em> Subcellular Fractionation of Adherent and Non-adherent Mammalian Cells

In situ Subcellular Fractionation of Adherent and Non-adherent Mammalian Cells

<em>في</em> تقطير التحت خلوية <em>الموقع</em> من خلايا الثدييات وغير ملتصقة منتسب -

Protein function is intimately coupled to protein localization. Although some proteins are restricted to a specific location or subcellular compartment, ...

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

عزل خلايا الأرومة الغاذية الابتدائية ماوس والأرومة الغاذية الفحص الغزو

The placenta is responsible for the transport of nutrients, gasses and growth factors to the fetus, as well as the elimination of wastes.  
Thus, defects ...

Identifying Targets of Human microRNAs with the LightSwitch Luciferase Assay System using 3'UTR-reporter Constructs and a microRNA Mimic in Adherent Cells

تحديد الأهداف من microRNAs الإنسان مع نظام الفحص LightSwitch Luciferase به مراسل 3&#39;UTR - a يبني وmicroRNA مقلد في خلايا منتسب

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression and play a role in many biological processes.  More than 700 human miRNAs have been ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

الاستقراء وتحليل الظهارية الوسيطة الانتقالية ل

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

A Functional Assay for Gap Junctional Examination; Electroporation of Adherent Cells on Indium-Tin Oxide

مقايسة الوظيفية للفجوة صلي فحص. Electroporation للمن الخلايا الملتصقة على الإنديوم أكسيد القصدير

In this technique, cells are cultured on a glass slide that is partly coated with indium-tin oxide (ITO), a transparent, electrically conductive material. ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

سم كلوي حقن مكروي في الزرد لنموذج قصور كلوي حاد

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

واجهة المستخدم الرسومية لتتبع بمساعدة برنامج تركيز البروتين في النتوءات الخلوية الديناميكية

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...

Lens-free Video Microscopy for the Dynamic and Quantitative Analysis of Adherent Cell Culture

الفيديو خالية من عدسة مجهرية للدينامية والتحليل الكمي للثقافة الخلية ملتصقة

Here, we demonstrate that lens-free video microscopy enables us to simultaneously capture the kinetics of thousands of cells directly inside the incubator ...

Co-immunoprecipitation Assay Using Endogenous Nuclear Proteins from Cells Cultured Under Hypoxic Conditions

استخدام البروتينات النووية الذاتية من الخلايا المزروعة تحت ظروف التاكسج بالانزيم Co-إيمونوبريسيبيتيشن

Low oxygen levels (hypoxia) trigger a variety of adaptive responses with the Hypoxia-inducible factor 1 (HIF-1) complex acting as a master regulator. ...