Name: clonogenic assay: adherent cells
Uploaded: 2011-03-13T11:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Clonogenic Assay: Adherent Cells at JoVE.com

Avustralya Nükleer Bilimi ve Mühendisliği Enstitüsü destek kabul edilmektedir. TCK AINSE ödül layık görüldü. Epigenomic Tıp Laboratuarı, Ulusal Sağlık ve Tıbbi Araştırma Konseyi (566.559) Avustralya tarafından desteklenmektedir. İK, Avustralya, mezuniyet sonrası ve BakerIDI parlak kıvılcım ödül tarafından desteklenmektedir. Bu çalışma, Biyomedikal Görüntüleme Geliştirme Ltd (CRC-BID), kurulan ve Avustralya Hükümeti Ortak Araştırma Merkezleri programı kapsamında desteklenen CRC tarafından finanse edilmektedir. CO Avustralyalı bir mezuniyet sonrası ödül ve CRC-BID ek burs almıştır.

1. Hücre Kültürü ve Deneysel Set-up <ol><li> İnsan keratinositler keratinosit-SFM 15 mL (K-SFM) içeren 75 cm 2 doku kültürü şişeleri mono tabakaları olarak korunur, L-glutamin (2 mM), epidermal büyüme faktörü (5 ng ile desteklenmiş orta (Gibco, serum serbest orta ) / ml), sığır hipofiz ekstresi (40 mg / ml) ve 20 mg / ml gentamisin. Hücreler 37 ° C nemlendirilmiş bir% 5 CO 2 ortamında yetiştirilen </li><li> Hücreler, 5 ml K-SFM orta içeren 12 x 25 cm 2 doku k...

<ol>
	<li>Puck, T. T., Marcus, P. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Action+of+x-rays+on+mammalian+cells.">Action of x-rays on mammalian cells.</a> J Exp Med. 103, 653-666 (1956).</li><li>Hurlin, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+human+papillomavirus+type+18-immortalized+human+keratinocytes+to+a+malignant+phenotype.">Progression of human papillomavirus type 18-immortalized human keratinocytes to a malignant phenotype.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 88, 570-574 (1991).</li></ol>

Bu örnekte, 100 mcg / ml CPF insan FEP-1811 keratinositler çeşitli konsantrasyonlarda ile tedavi edildi; veriler 37 1 saat için 20 mg / ml CPF ° C için gösterilen Ardından tedavi hücreleri 137 Cs kaynak (Nordion Uluslararası, ON, Kanada; 1.6 Gy / dk Gammacell 1000 Elite ışınlama) kullanılarak 4 Gy ışınlanmış. Tedavi edilmemiş ve ilaç tedavileri 100 hücre kontrolü için her bir petri kaplama ve çanak başına 1000 hücreleri ışınlanmış örnekler için kaplanmıştır. Yukarıdaki t...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Keratinocyte-serum free medium</td>
<td>Growth medium</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17005042</td>
<td>Supplemented with 2mM L-glutamine, 20&#x03BC;g/ml gentamicin, epidermal growth factor, bovine pituitary extract.
</td>
</tr>
<tr>
<td>Trypsin-EDTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>15400-054</td>
<td>0.05% trypsin / EDTA to detach adherent cells; 10 x stock diluted in PBS w/o Ca2+/Mg2+.</td>
</tr>
<tr>
<td>Dulbecco&#x2019;s modified essential medium</td>
<td>Growth medium</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>11885-084</td>
<td>Supplemented with 10% FBS and 20&mu;g/ml gentamicin; used to neutralise trypsin/EDTA.</td>
</tr>
<tr>
<td>0.09% Saline</td>
<td>Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td> Used to wash colonies.</td>
</tr>
<tr>
<td>10% Neutral buffered formalin solution</td>
<td>Solution</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>HT501128</td>
<td>~4% formaldehyde; used to fix colonies.</td>
</tr>
<tr>
<td>Crystal violet</td>
<td>Powder</td>
<td>SPI-Chem</td>
<td>02577-MB</td>
<td>0.01% crystal violet solution, prepared in dH2O, used to stain colonies.</td>
</tr>
<tr>
<td>Gammacell 1000 elite irradiator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Nordion International Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Petri dishes</td>
<td>60 x 15 mm</td>
<td>Falcon</td>
<td>353002</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Haemocytometer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hawksley; Medical and Laboratory Equipment</td>
<td>AC1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cloning box</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Plastic box with holes punched at opposite sides of lid; for storing petri dishes during prolonged incubation for colony formation.</td>
</tr>
<tr>
<td>Stereomicroscope</td>
<td>Type 102</td>
<td>Nikon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Used to count colonies consisting of &gt;50 cells.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

clonogenic assay: adherent cells

Clonogenic (ya da koloni oluşturan) testinin, 50 yılı aşkın kurulmuştur; 1956 1 tekniğini anlatan orijinal kağıt yayımlandı. Yöntemini belgeleyen dışında, ilk dönüm noktası çalışma kültürü 1 X-ray ışınlanmış memeli (HeLa) hücreleri için ilk radyasyon doz yanıt eğrisi oluşturulur. Kontrolü tedavi edilmezse hücreleri ve bu tür maruz kalma gibi değişik işlemlerden geçirilmiş hücreleri arasında; Temelde, clonogenic testi üreme canlılığı farklılıkları (50 veya daha fazla hücre bir koloni oluşturmak için tek bir hücre yani döl hücreleri kapasitesi) bir değerlendirme sağlar radyasyon iyonize, çeşitli kimyasal bileşikler (örneğin sitotoksik ilaçlar) ya da diğer durumlarda genetik manipülasyon. Tahlil radyasyon biyolojisi en yaygın kabul gören bir tekniği haline gelmiştir ve farklı hücre hatları radyasyon duyarlılığı değerlendirmek için yaygın olarak kullanılır olmuştur. Ayrıca, clonogenic testi yaygın radyasyon değiştirerek bileşiklerin etkinliğinin izlenmesi ve koloni oluşturan farklı hücre hatları yeteneği, sitotoksik ajanlar ve diğer anti-kanser tedavileri etkileri belirlemek için kullanılır. Yapışık hücrelere hatları ile tipik bir clonogenic hayatta kalma deney koloniler tespit ve boyama üç farklı bileşenleri, 1), doku kültürü şişeler, hücre monolayer tedavisi, 2) tek bir hücre süspansiyonlarının hazırlanması ve uygun bir hücre sayısı petri kaplarına ve 3 kaplama) içerir. ilgili bir kuluçka dönemi sonrası, hangi hücre hattı bağlı olarak, 1-3 hafta arasında olabilir. İşte biz, bir ölümsüzleştirdi insan keratinosit hücre hattı kullanımı (FEP-1811) 2 ile yapışık hücre hatları ile clonogenic tahlil yapmak için genel prosedürü göstermektedir . Ayrıca, bizim hedeflerimize hücreleri radyasyona maruz kaldıktan sonra kaplama verimliliği ve hayatta kalma fraksiyonları hesaplama da dahil olmak üzere clonogenic testlerinin ortak özelliklerini tanımlamak ve doğal bir antioksidan formülasyonu kullanımı ile radyasyon cevap modifikasyonu örneklemek için.

Watch this Scientific Journal Video about Clonogenic Assay: Adherent Cells at JoVE.com

Clonogenic Assay: Adherent Cells (Video) | JoVE

50 yıldan fazla üreme canlılığını değerlendirmek için clonogenic testin uygulanabilirliği için kurulmuştur. Burada yapışık hücrelere clonogenic tahlil yapmak için genel prosedür göstermektedir.

Clonogenic Testi: yapışkan Hücreler

The clonogenic (or colony forming) assay has been established for more than 50 years; the original paper describing the technique was published in 19561. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Clonogenic Assay: Adherent Cells

Fabrication and Operation of an Oxygen Insert for Adherent Cellular Cultures 

Fabrication and Operation of an Oxygen Insert for Adherent Cellular Cultures (Video) | JoVE

İmalat ve Operasyon yapışkan Hücresel Kültürler Oksijen Ekle

Oxygen is a key modulator of many cellular pathways, but current devices permitting in vitro oxygen modulation fail to meet the needs of biomedical ...

In situ Subcellular Fractionation of Adherent and Non-adherent Mammalian Cells

In situ Subcellular Fractionation of Adherent and Non-adherent Mammalian Cells (Video) | JoVE

Yapışkan ve Sigara yapışık Memeli Hücre yerinde Subselüler Fraksiyonu

Protein function is intimately coupled to protein localization. Although some proteins are restricted to a specific location or subcellular compartment, ...

Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) to Assay Dynamic Histone Modification in Activated Gene Expression in Human Cells

Chromatin Immunoprecipitation ChIP to Assay Dynamic Histone Modification in Activated Gene Expression in Human Cells (Video) | JoVE

Kromatin Immunoprecipitation İnsan Hücrelerinde Aktif Gen İfadesi Testi Dinamik Histon Modifikasyon (ChIP)

In response to a variety of extracellular ligands, the STAT (signal transducer and activator of transcription) transcription factors are rapidly recruited ...

A Matrigel-Based Tube Formation Assay to Assess the Vasculogenic Activity of Tumor Cells

A Matrigel-Based Tube Formation Assay to Assess the Vasculogenic Activity of Tumor Cells (Video) | JoVE

Tümör Hücrelerinin vaskülojenik Faaliyet değerlendirin bir Matrigel Tabanlı Tüp Oluşumu Testi

Over the past several decades, a tube formation assay using growth factor-reduced Matrigel has been typically employed to demonstrate the angiogenic ...

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay (Video) | JoVE

Birincil Fare trofoblast hücreleri ve trofoblast invazyonu Assay İzolasyonu

The placenta is responsible for the transport of nutrients, gasses and growth factors to the fetus, as well as the elimination of wastes.  
Thus, defects ...

Identifying Targets of Human microRNAs with the LightSwitch Luciferase Assay System using 3'UTR-reporter Constructs and a microRNA Mimic in Adherent Cells

Identifying Targets of Human microRNAs with the LightSwitch Luciferase Assay System using 3'UTR-reporter Constructs and a microRNA Mimic in Adherent Cells (Video) | JoVE

3&#39;UTR muhabiri oluşturur ve bir microRNA kullanarak LightSwitch Lusiferaz Test Sistemi ile İnsan microRNA belirlenmesi Hedefler yapışık hücrelere Mimik

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression and play a role in many biological processes.  More than 700 human miRNAs have been ...

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition

Induction and Analysis of Epithelial to Mesenchymal Transition (Video) | JoVE

Mezenkimal Geçiş indüksiyon ve Epitel Analizi

Epithelial  to mesenchymal transition (EMT) is essential for proper morphogenesis during  development. Misregulation of this  process has been implicated ...

A Functional Assay for Gap Junctional Examination; Electroporation of Adherent Cells on Indium-Tin Oxide

A Functional Assay for Gap Junctional Examination; Electroporation of Adherent Cells on Indium-Tin Oxide (Video) | JoVE

Gap Kavşak Sınavı Fonksiyonel Testi; İndiyum-Kalay Oksit Yapışık hücrelerin elektroporasyonu

In this technique, cells are cultured on a glass slide that is partly coated with indium-tin oxide (ITO), a transparent, electrically conductive material. ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury (Video) | JoVE

Zebra balığı Nephrotoxin Mikroenjeksiyon Akut Böbrek Yaralanması Model

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions

A Graphical User Interface for Software-assisted Tracking of Protein Concentration in Dynamic Cellular Protrusions (Video) | JoVE

Dinamik Hücresel Protrüzyonlarda Protein Konsantrasyonunun Yazılım Destekli Takibi için Grafiksel Bir Kullanıcı Arayüzü

Filopodia are dynamic, finger-like cellular protrusions associated with migration and cell-cell communication. In order to better understand the complex ...