Name: focussed ion beam milling and scanning electron microscopy of brain tissue
Uploaded: 2011-07-06T13:00:00
Duration: 8 min 57 s
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	<li>Knott, G., Marchman, H., Wall, D., Lich, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serial+section+scanning+electron+microscopy+of+adult+brain+tissue+using+focused+ion+beam+milling.">Serial section scanning electron microscopy of adult brain tissue using focused ion beam milling.</a> J Neurosci. 28, 2959-2964 (2008).</li><li>Hekking, L. H., Lebbink, M. N., De Winter, D. A., Schneijdenberg, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focused+ion+beam-scanning+electron+microscope:+exploring+large+volumes+of+atherosclerotic+tissue.">Focused ion beam-scanning electron microscope: exploring large volumes of atherosclerotic tissue.</a> J Microsc. 235, 336-347 (2009).</li><li>Armer, H. E., Mariggi, G., Png, K. M., Genoud, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+transient+blood+vessel+fusion+events+in+zebrafish+by+correlative+volume+electron+microscopy.">Imaging transient blood vessel fusion events in zebrafish by correlative volume electron microscopy.</a> PLoS One. 4, e7716-e7716 (2009).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

FIB / SEM की तकनीक बेहतर काम करता है जब ब्याज के क्षेत्र बहुत बड़ा नहीं है. एक imaged मात्रा के लिए ऊपरी सीमा आयन बीम और क्षेत्र पर निर्भर करता है कि यह कई घंटे से अधिक लगातार बार - बार मिल सकते हैं. अब तक यह करीब 60 x 60 microns के क्षेत्रों के साथ किया गया है, तथापि, इमेजिंग इस पूरे क्षेत्र को एक उपयुक्त छवि संकल्प के साथ संभव नहीं है, मुख्य रूप से इतनी बड़ी छवि एकत्र करने में समय कारक के कारण. एक उदाहरण के रूप में, एक पिक्सेल के साथ एक 4 kx 4 कश्मीर की छवि पर ध्यान केन्द्रित करना 10 microseconds के लिए समय 2 मिनट और 40 सेकंड के लिए अधिग्रहण ले, और 60 microns के दृश्य के एक क्षेत्र के लिए यह केवल 15 एनएम के एक पिक्सेल आकार देना होगा. आमतौर पर 4 और 10 एनएम / पिक्सेल के बीच, कोशिकाओं और ऊतकों के ultrastructure इमेजिंग के लिए, एक छोटे पिक्सेल आकार और अधिक उपयुक्त है. छवि 60 x 60 microns के एक क्षेत्र के लिए 10 घंटों में प्राप्त होगा, भले ही खुर्दबीन इस क्षमता थी. इन कारणों के लिए, माइक्रोस्कोप 10 x 10 x 10 microns, या पूरे कोशिकाओं के महत्वपूर्ण क्षेत्रों के क्रम में एक छवि संस्करणों के लिए एक आदर्श उपकरण है. यह आसानी से नमूने कर रहे हैं कि इस प्रक्रिया के साथ अच्छी तरह से विपरीत है पर एक 48 घंटे की अवधि के भीतर किया जा सकता है है. अब तक प्रोटोकॉल मस्तिष्क के ऊतकों के रूप में के रूप में अच्छी तरह से सभ्य स्तनधारी coverslips के लिए पालन कोशिकाओं के विभिन्न प्रकार के साथ किया गया है मुख्य रूप से प्रयोग किया जाता है. हालांकि, निर्धारण और धुंधला हो जाना प्रक्रिया जैविक सामग्री के कई अन्य प्रकार के संयंत्र के लिए समान रूप से अच्छी तरह से विपरीत छवि के ढेर का उत्पादन सामग्री सहित, के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है. इसलिए इस तकनीक का मुख्य लाभ isotropic voxels के साथ अपनी छवि मात्रा क्षमता है. इस प्रकार की छवि के ढेर के ढेर में किसी भी विमान में लिया छवियों का उपयोग 3 डी की मात्रा के विश्लेषण के लिए अनुमति देते हैं. इस के लाभ के लिए किसी भी दिशा से छवि श्रृंखला में और एक बड़ा छवि विस्तार (चित्रा 3) प्रदान छवि सुविधाओं के लिए पर्यवेक्षक की अनुमति है.

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th></tr><tr><td> Cyanoacrylate गोंद </td><td></td><td></td></tr><tr><td> विदारक माइक्रोस्कोप: Leica MZ8 </td><td> Leica माइक्रोसिस्टम्स, जर्मनी </td><td></td></tr><tr><td> Durcupan राल </td><td> सिग्मा Aldrich Chemie GmbH, स्विट्जरलैंड </td><td></td></tr><tr><td> FIB / SEM खुर्दबीन (Zeiss NVision 40) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ग्लास ऊतक विज्ञान स्लाइड </td><td> मेंजेल-Glaser, जर्मनी </td><td> AA00008032E </td></tr><tr><td> ग्लास चाकू निर्माता: Leica EM KMR2 </td><td> Leica माइक्रोसिस्टम्स, जर्मनी </td><td></td></tr><tr><td> ग्लास जगमगाहट शीशियों (20ml) </td><td> ईएमएस, संयुक्त राज्य अमरीका </td><td> 72634 </td></tr><tr><td> Glutaraldehyde </td><td> ईएमएस, संयुक्त राज्य अमरीका </td><td> 16222 </td></tr><tr><td> जौहरी देखा </td><td> ईएमएस, संयुक्त राज्य अमरीका </td><td> 72010 </td></tr><tr><td> ढालना अलग एजेंट </td><td> Glorex, स्विटज़रलैंड </td><td> 62407445 </td></tr><tr><td> आज़मियम tetroxide </td><td> ईएमएस, संयुक्त राज्य अमरीका </td><td> 19110 </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> ईएमएस, संयुक्त राज्य अमरीका </td><td> 19208 आरटी </td></tr><tr><td> फॉस्फेट बफर के लिए फास्फेट लवण </td><td> सिग्मा Aldrich Chemie GmbH, स्विट्जरलैंड </td><td> 71642 और 71496 </td></tr><tr><td> सोडियम cacodylate </td><td> सिग्मा Aldrich Chemie GmbH, स्विट्जरलैंड </td><td> 20840 </td></tr><tr><td> सोने के लक्ष्य के साथ coater धूम </td><td> Cressington, संयुक्त राज्य अमरीका </td><td></td></tr><tr><td> Tris आधार (टीबीएस) </td><td> सिग्मा Aldrich Chemie GmbH, स्विट्जरलैंड </td><td> T1378 </td></tr><tr><td> UCT Ultramicrotome: Leica </td><td> Leica माइक्रोसिस्टम्स, जर्मनी </td><td></td></tr><tr><td> Uranyl एसीटेट </td><td> ईएमएस, संयुक्त राज्य अमरीका </td><td> 22451 आरटी </td></tr></tbody></table>

focussed ion beam milling and scanning electron microscopy of brain tissue

इस प्रोटोकॉल का वर्णन है जैविक कैसे नमूने, मस्तिष्क के ऊतकों की तरह, ध्यान केंद्रित आयन इलेक्ट्रॉन / खुर्दबीन स्कैनिंग बीम (FIB / SEM) का उपयोग कर तीन आयामों में imaged किया जा सकता है. नमूने aldehydes, भारी धातु आज़मियम tetroxide और uranyl एसीटेट का उपयोग दाग के साथ तय कर रहे हैं. वे तो शराब के साथ निर्जलित हैं और राल, जो कठोर तो है साथ घुसपैठ की. एक रोशनी खुर्दबीन और कांच के चाकू के साथ ultramicrotome का उपयोग, एक छोटे से क्षेत्र की सतह के करीब ब्याज युक्त ब्लॉक किया जाता है. ब्लॉक तो FIB / SEM के अंदर रखा है, और आयन बीम को मोटे तौर पर एक ऊर्ध्वाधर चेहरा मिल ब्लॉक के एक पक्ष के साथ करने के लिए इस्तेमाल किया, इस क्षेत्र के लिए करीब है. Backscattered इलेक्ट्रॉनों का उपयोग अंतर्निहित संरचनाओं छवि के लिए, एक छोटे चेहरा तो एक बेहतर आयन बीम के साथ milled है और सतह के और अधिक बारीकी से से छानबीन करने के लिए चेहरे की सटीक क्षेत्र imaged और milled निर्धारित है. माइक्रोस्कोप के मापदंडों तो सेट कर रहे हैं ताकि चेहरा बार - बार और milled है imaged इतना है कि सीरियल छवियों ब्लॉक के एक मात्रा के माध्यम से एकत्र कर रहे हैं. छवि ढेर आम तौर पर छोटे प्रत्येक दिशा में एक 4 एनएम के रूप में आयामों के साथ isotropic voxels शामिल होंगे. किसी भी इमेजिंग विमान में यह छवि गुणवत्ता छवि ढेर के भीतर किसी भी कोण को देखने में सेल ultrastructure का विश्लेषण करने के लिए उपयोगकर्ता सक्षम बनाता है.

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Focussed Ion Beam Milling and Scanning Electron Microscopy of Brain Tissue

इस प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे राल एम्बेडेड मस्तिष्क के ऊतकों और तैयार किया जा सकता है ध्यान केंद्रित आयन बीम में तीन आयामों में imaged, स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप.

ध्यान केंद्रित आयन बीम मिलिंग और मस्तिष्क के ऊतकों के इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी स्कैनिंग

This protocol describes how biological samples, like brain tissue, can be imaged in three dimensions using the focussed ion beam/scanning electron ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

माउस मस्तिष्क के ऊतकों के Immunoelectron माइक्रोस्कोपी के लिए तैयार

Transmission electron microscopy (TEM) is extremely useful for visualizing microglial, oligodendrocytic, astrocytic, and neuronal subcellular compartments ...

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

Genetic Manipulation of Cerebellar Granule Neurons In Vitro and In Vivo to Study Neuronal Morphology and Migration

अनुमस्तिष्क ग्रेन्युल न्यूरॉन्स की आनुवंशिक हेरफेर<em&gt; इन विट्रो</em&gt; और<em&gt; में Vivo</em&gt; Neuronal आकृति विज्ञान और प्रवास का अध्ययन करने के लिए

Developmental events in the brain including neuronal morphogenesis and migration are highly orchestrated processes. In vitro and in vivo analyses allow ...

The Olfactory System as a Model to Study Axonal Growth Patterns and Morphology In Vivo

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एक मॉडल के रूप घ्राण प्रणाली axonal विकास पैटर्न और आकृति विज्ञान का अध्ययन करने के लिए<em&gt; Vivo</em

The olfactory system has the unusual capacity to generate new neurons throughout the lifetime of an organism. Olfactory stem cells in the basal portion of ...

Double-barreled and Concentric Microelectrodes for Measurement of Extracellular Ion Signals in Brain Tissue

मस्तिष्क के ऊतकों में मापन कोशिकी आयन के संकेतों के लिए डबल बैरल और गाढ़ा Microelectrodes

Electrical activity in the brain is accompanied by significant ion fluxes across membranes, resulting in complex changes in the extracellular ...

Characterizing Multiscale Mechanical Properties of Brain Tissue Using Atomic Force Microscopy, Impact Indentation, and Rheometry

निस्र्पक मस्तिष्क के ऊतकों की Multiscale यांत्रिक गुण परमाणु शक्ति माइक्रोस्कोपी, प्रभाव खरोज, और rheometry का प्रयोग

To design and engineer materials inspired by the properties of the brain, whether for mechanical simulants or for tissue regeneration studies, the brain ...

Analysis of Brain Mitochondria Using Serial Block-Face Scanning Electron Microscopy

ब्रेन माइटोकॉन्ड्रिया के विश्लेषण सीरियल ब्लॉक-फेस स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग

Human brain is a high energy consuming organ that mainly relies on glucose as a fuel source. Glucose is catabolized by brain mitochondria via glycolysis, ...

Preparation of Non-human Primate Brain Tissue for Pre-embedding Immunohistochemistry and Electron Microscopy

पूर्व embedding Immunohistochemistry और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी के लिए गैर मानव प्राइमेट मस्तिष्क के ऊतकों की तैयारी

Despite all the technological advances at the light microscopy&#160;level, electron microscopy remains the only tool in neuroscience to examine and ...

Making, Testing, and Using Potassium Ion Selective Microelectrodes in Tissue Slices of Adult Brain

बनाने, परीक्षण, और वयस्क मस्तिष्क के ऊतक स्लाइस में पोटेशियम आयन चयनात्मक Microelectrodes का उपयोग

Potassium ions significantly contribute to the resting membrane potential of cells and, therefore, extracellular K+ concentration is a crucial regulator ...

Delivery of Antibodies into the Brain Using Focused Scanning Ultrasound

केंद्रित स्कैनिंग अल्ट्रासाउंड का उपयोग कर मस्तिष्क में एंटीबॉडी का वितरण

Only a small fraction of therapeutic antibodies targeting brain diseases are taken up by the brain. Focused ultrasound offers a possibility to increase ...

Horizontal Hippocampal Slices of the Mouse Brain

माउस मस्तिष्क के क्षैतिज हिप्पोकैम्पल स्लाइस

The hippocampus is a highly organized structure in the brain that is a part of the limbic system and is involved in memory formation and consolidation as ...