Name: detection of post-translational modifications on native intact nucleosomes by elisa
Uploaded: 2011-04-26T14:00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of Post-translational Modifications on Native Intact Nucleosomes by ELISA at JoVE.com

परमाणु - एलिसा विधि का विकास NIH अनुदान RO1AG023687 द्वारा समर्थित किया गया.

<ol>
	<li>Luger, K., Mader, A. W., Richmond, R. K., Sargent, D. F., Richmond, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+the+nucleosome+core+particle+at+2.8+A+resolution.">Crystal structure of the nucleosome core particle at 2.8 A resolution.</a> Nature. 389, 251-260 (1997).</li><li>Jenuwein, T., Allis, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translating+the+histone+code.">Translating the histone code.</a> Science. 293, 1074-1080 (2001).</li><li>Turner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histone+acetylation+and+an+epigenetic+code.">Histone acetylation and an epigenetic code.</a> Bioessays. 22, 836-845 (2000).</li><li>Dai, B., Rasmussen, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+epiproteomic+signatures+distinguish+embryonic+stem+cells+from+differentiated+cells.">Global epiproteomic signatures distinguish embryonic stem cells from differentiated cells.</a> Stem Cells. 25, 2567-2574 (2007).</li><li>Tanasijevic, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+accumulation+of+epigen+etic+heterogeneity+during+human+ES+cell+culture.">Progressive accumulation of epigen etic heterogeneity during human ES cell culture.</a> Epigenetics. 4, 330-338 (2009).</li><li>Thomas, J. O., Gould, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+fractionation+of+chromatin+and+linker+histones.">Isolation and fractionation of chromatin and linker histones.</a> Chromatin: a practical approach. , 12-14 (1998).</li><li>Thorne, A. W., Cary, P. D., Crane-Robinson, C., Gould, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extraction+and+separation+of+core+histones+and+non-histone+chromosomal+proteins.">Extraction and separation of core histones and non-histone chromosomal proteins.</a> Chromatin: a practical approach. , 38-39 (1998).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

परमाणु - एलिसा nucleosome एक विशेष सेल प्रकार के भीतर मौजूद PTMs की वैश्विक स्थिति का पता लगाने के लिए एक तरीका प्रदान करता है. परमाणु - एलिसा अध्ययन से पता चला है कि वैश्विक nucleosome संशोधन राज्यों मुक़्तलिफ़ सेल 4 प्रकार की तुलना में अलग हैं. इसके अलावा, परमाणु एलिसा PTM प्रोफाइल बदल जब कोशिकाओं जैसे epigenetic modulatory एजेंट को उजागर कर रहे हैं trichostatin - एक या जब माउस embyronic स्टेम कोशिकाओं 4 भेदभाव कर रहे हैं. विधि को भी सफलतापूर्वक लागू किया गया है है मानव ES 5 कोशिकाओं के chromatin अध्ययन . यह महत्वपूर्ण है ध्यान दें करने के लिए परमाणु एलिसा, अपने वर्तमान स्वरूप में, केवल सेलुलर epigenome की कुल राशि के भीतर मौजूद PTMs के संयुक्त हस्ताक्षर का पता लगा सकते हैं. इस जीनोम चौड़ा chromatin immunoprecipitation, जो विशिष्ट आनुवंशिक loci भर में एक विशिष्ट PTM का वितरण निर्धारित कर सकते हैं से स्पष्ट रूप से अलग है. परमाणु - एलिसा प्रक्रियाओं के प्रारंभिक चरणों पिछले तरीकों से अनुकूलित कर रहे हैं स्तनधारी 6,7 नाभिक से mononucleosomes अलग. इन अनुकूलित तरीकों एक समीचीन स्तनधारी कोशिकाओं से उच्च गुणवत्ता बरकरार mononucleosomes प्राप्त करने का तरीका प्रदान करते हैं, और जिसके परिणामस्वरूप भिन्न उनके chromatin सामग्री में व्यापक हैं, लेकिन अतिरिक्त परमाणु सामग्री की एक महान सौदे होते हैं. चूंकि विशिष्ट Abs का उपयोग किया जाता है, गैर nucleosomal सामग्री contaminating NU - एलिसा परख में अच्छी तरह से सहन किया है जन कल्पना दृष्टिकोण है कि अधिक से अधिक शुद्धता की आवश्यकता के विपरीत,. हालांकि, परमाणु - एलिसा पश्चिमी सोख्ता 4, इस प्रकार westerns और nucleosomal PTMs का पता लगाने के लिए बड़े पैमाने पर कल्पना के लिए अच्छा विकल्प प्रदान करने की तुलना में अधिक संवेदनशील और मात्रात्मक है.

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th><th> टिप्पणियाँ </th></tr><tr><td> Micrococcal Nucleae </td><td> सिग्मा </td><td> N3755 </td><td> 2 U/10μl बफर के aliquots, -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत करें </td></tr><tr><td> Nunc MaxiSorp microtiter प्लेट्स </td><td> मछुआ </td><td> 12-565-135 </td><td> चिपकने वाला प्लेट कवर भी फिशर के माध्यम से आदेश दिया जा सकता है </td></tr><tr><td> स्वचालित प्लेट वॉशर </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 1 कदम सब्सट्रेट TMB - एलिसा </td><td> बींधना </td><td> 34028 </td><td> 4 में स्टोर ° सी उपयोग करने से पहले आरटी के लिए पूर्व गर्म या के रूप में विनिर्देश शीट पर निर्देशित </td></tr><tr><td> Microtiter प्लेट रीडर </td><td> जैव रेड microplate रीडर (मॉडल: 680) </td><td></td><td> हाल वर्णमिति प्लेट पाठक मॉडल उपयुक्त हैं </td></tr></tbody></table>

detection of post-translational modifications on native intact nucleosomes by elisa

eukaryotes के जीनोम chromatin के रूप में मौजूद है जो दोनों के डीएनए और प्रोटीन होते हैं. chromatin की मौलिक इकाई nucleosome है, जो 146 डीएनए के आधार जोड़े दो H2A, H2B, H3, और H4 1 histones में से प्रत्येक के साथ जुड़े होते है. Histones के एन टर्मिनल पूंछ lysine और arginine में धनी होते हैं और एसिटिलीकरण, मेथिलिकरण, और अन्य बाद translational संशोधनों (PTMs) के बाद transcriptionally संशोधित. Nucleosomes के PTM विन्यास जुड़े डीएनए के transcriptional गतिविधि को प्रभावित करते हैं, इस प्रकार जीन विनियमन की एक विधा है कि 2,3 प्रकृति में epigenetic है प्रदान कर सकते हैं. हम एक nucleosome एलिसा (NU एलिसा) मात्रात्मक कोशिकाओं से निकाले nucleosomes की वैश्विक PTM हस्ताक्षर निर्धारित करने के लिए बुलाया विधि विकसित की है. परमाणु - एलिसा और अधिक संवेदनशील और सोख्ता पश्चिमी मात्रात्मक है, और विशिष्ट प्रकार की कोशिकाओं के epiproteomic राज्य पूछताछ के लिए उपयोगी है. यह वीडियो पत्रिका आलेख विस्तृत प्रक्रियाओं का पता चलता है कि परमाणु - एलिसा विश्लेषण करने के लिए.

Watch this Scientific Journal Video about Detection of Post-translational Modifications on Native Intact Nucleosomes by ELISA at JoVE.com

Detection of Post-translational Modifications on Native Intact Nucleosomes by ELISA

Nucleosome एलिसा (NU एलिसा) एक संवेदनशील और मात्रात्मक देशी, अक्षत nucleosomes की तैयारी में बाद translational संशोधनों के वैश्विक पैटर्न का पता लगाने की विधि है. इन संशोधनों methylations, acetylations, और विशिष्ट histone अमीनो एसिड के अवशेष पर phosphorylations शामिल हैं, और इसलिए परमाणु एलिसा विशिष्ट प्रकार की कोशिकाओं के समग्र chromatin संशोधन राज्यों के एक वैश्विक प्रोटिओमिक परख प्रदान करता है.

पोस्ट translational संशोधन की एलिसा द्वारा मूल निवासी बरकरार Nucleosomes पर जांच

The genome of eukaryotes exists as chromatin which contains both DNA and proteins. The fundamental unit of chromatin is the nucleosome, which contains 146 ...

Research

JoVE Journal

Biology

Detection of Functional Matrix Metalloproteinases by Zymography

कार्यात्मक मैट्रिक्स Metalloproteinases के Zymography द्वारा जांच

Matrix metalloproteinases (MMPs) are zinc-containing endopeptidases. They degrade proteins by cleavage of peptide bonds. More than twenty MMPs have been ...

Analyzing the Function of Small GTPases by Microinjection of Plasmids into Polarized Epithelial Cells

प्लास्मिड के Microinjection द्वारा Polarized उपकला कोशिकाओं में छोटे GTPases के फंक्शन का विश्लेषण

Epithelial cells polarize their plasma membrane into biochemically and functionally distinct apical and basolateral domains where the apical domain faces ...

Detection of Histone Modifications in Plant Leaves

संयंत्र पत्तियां में histone संशोधन की जांच

Chromatin structure is important for the regulation of gene expression in eukaryotes. In this process, chromatin remodeling, DNA methylation, and covalent ...

Budding Yeast Protein Extraction and Purification for the Study of Function, Interactions, and Post-translational Modifications

समारोह का अध्ययन है, सहभागिता, और बाद translational संशोधनों के लिए नवोदित खमीर प्रोटीन निष्कर्षण और शोधन

Homogenization by bead beating is a fast and efficient way to release DNA, RNA, proteins, and metabolites from budding yeast cells, which are notoriously ...

Identification of Post-translational Modifications of Plant Protein Complexes

संयंत्र प्रोटीन परिसरों के बाद translational संशोधनों की पहचान

Plants adapt quickly to changing environments due to elaborate perception and signaling systems. During pathogen attack, plants rapidly respond to ...

Isolation of Specific Genomic Regions and Identification of Associated Molecules by enChIP

विशिष्ट जीनोमिक क्षेत्र और enChIP द्वारा एसोसिएटेड अणु की पहचान का अलगाव

The identification of molecules associated with specific genomic regions of interest is required to understand the mechanisms of regulation of the ...

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

En Face Detection of Nitric Oxide and Superoxide in Endothelial Layer of Intact Arteries

बरकरार धमनियों की endothelial परत में नाइट्रिक ऑक्साइड और Superoxide के एन चेहरा पहचान

Endothelium-derived nitric oxide (NO) produced from endothelial NO-synthase (eNOS) is one of the most important vasoprotective molecules in cardiovascular ...

High-throughput CRISPR Vector Construction and Characterization of DNA Modifications by Generation of Tomato Hairy Roots

उच्च throughput CRISPR वेक्टर निर्माण और डीएनए संशोधनों की विशेषता टमाटर रोंआर जड़ें की पीढ़ी द्वारा

Targeted DNA mutations generated by vectors with clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)/Cas9 technology have proven useful for ...

Complete Workflow for Analysis of Histone Post-translational Modifications Using Bottom-up Mass Spectrometry: From Histone Extraction to Data Analysis

Histone बाद translational संशोधनों के विश्लेषण के लिए पूरा कार्यप्रवाह नीचे अप मास स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग: Histone निकासी से डेटा विश्लेषण करने के लिए

Nucleosomes are the smallest structural unit of chromatin, composed of 147 base pairs of DNA wrapped around an octamer of histone proteins. Histone ...

Comparison of Tobacco Host Cell Protein Removal Methods by Blanching Intact Plants or by Heat Treatment of Extracts

बरकरार पौधों blanching द्वारा या अर्क की गर्मी उपचार द्वारा तंबाकू मेजबान कोशिका प्रोटीन को हटाने के तरीकों की तुलना

Plants not only provide food, feed and raw materials for humans, but have also been developed as an economical production system for biopharmaceutical ...