Name: derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice
Uploaded: 2011-04-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice at JoVE.com

המחברים מבקשים להודות לד&quot;ר בוריס Reizis מהמחלקה למיקרוביולוגיה ואימונולוגיה באוניברסיטת קולומביה לדיונים מועילים. כמו כן, אנו מבקשים להודות ד&quot;ר מרגרט Bynoe, ד&quot;ר רודמן Getchell ו Deequa Mahamed מהמחלקה למיקרוביולוגיה ולאימונולוגיה במכללה לרפואה וטרינרית באוניברסיטת קורנל לקבלת סיוע טכני עם cytometry זרימה הואנג לו סיוע עם עריכת וידאו. המחברים גם רוצה להודות לחברי דוהמל ו וייס מעבדות לבדיקה ביקורתית הייצור שלהם כתב היד הוידאו, וסטפני Yazinski מן המעבדה וייס הרבייה genotyping p53 - / - עכברים. ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי טיפול בבעלי חיים באוניברסיטת קורנל מוסדיים ועדת שימוש. מחקר זה מומן בחלקו על ידי קרנות הניתנים על ידי משרד החקלאות האמריקני, מחקר שיתופית המדינה, החינוך, שירות ההדרכה והמקצוע, בריאות בעלי חיים ועל תוכנית המחקר מחלות (עד GED ו RSW) ו-NIH מענקים R03 HD058220 ו R01CA108773 (עד RSW). הסרטון הופק באמצעות in-house מתקני ידי אנשי ממעבדות דוהמל &amp; וייס.

1. Dissection של גידול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עבור לנתיחה הגידול, מגבת נייר נקייה או לעטוף כירורגית הפנויה מונחת על כרית לנתיחה וריסס עם אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עכברים עבור פרוטוקול זה מורדמים שגרתי עם CO 2. מניחים את העכבר מורדמי...

<ol>
	<li>Barlow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atm-deficient+mice:+a+paradigm+of+ataxia+telangiectasia.">Atm-deficient mice: a paradigm of ataxia telangiectasia.</a> Cell. 86, 159-171 (1996).</li><li>Elson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotropic+defects+in+ataxia-telangiectasia+protein-deficient+mice.">Pleiotropic defects in ataxia-telangiectasia protein-deficient mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 13084-13089 (1996).</li><li>Kuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Atm-/-+thymic+lymphoma+cell+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+by+dexamethasone.">Control of Atm-/- thymic lymphoma cell proliferation in vitro and in vivo by dexamethasone.</a> Cancer Chemother Pharmacol. 55, 203-212 (2005).</li><li>Browne, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+with+a+catalytic+antioxidant+corrects+the+neurobehavioral+defect+in+ataxia-telangiectasia+mice.">Treatment with a catalytic antioxidant corrects the neurobehavioral defect in ataxia-telangiectasia mice.</a> Free Radic Biol Med. 36, 938-942 (2004).</li><li>Jacks, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+spectrum+analysis+in+p53-mutant+mice.">Tumor spectrum analysis in p53-mutant mice.</a> Curr Biol. 4, 1-7 (1994).</li><li>Chervinsky, D. S., Lam, D. H., Zhao, X. F., Melman, M. P., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+T+cell+leukemia+cell+lines+established+from+SCL/LMO1+double+transgenic+mice.">Development and characterization of T cell leukemia cell lines established from SCL/LMO1 double transgenic mice.</a> Leukemia. 15, 141-147 (2001).</li><li>Sharma, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch1+contributes+to+mouse+T-cell+leukemia+by+directly+inducing+the+expression+of+c-myc.">Notch1 contributes to mouse T-cell leukemia by directly inducing the expression of c-myc.</a> Mol Cell Biol. 26, 8022-8031 (2006).</li><li>Maser, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomally+unstable+mouse+tumours+have+genomic+alterations+similar+to+diverse+human+cancers.">Chromosomally unstable mouse tumours have genomic alterations similar to diverse human cancers.</a> Nature. 447, 966-971 (2007).</li></ol>

בפרוטוקול זה, אנו מספקים נהלים מפורט להקמת Murine T-cell הקווים משני גנוטיפים עכבר שונים; כספומט - / - [FVB/N- כספומט tm1Led / J] ו - p53 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] . באמצעות פרוטוקול זה, סך של 6 (מתוך 7 ניסיונות) כספומט - / - ושלושה (מתוך 5 ניסיונ?...

<ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דלי קרח </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 70% אתנול </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Dissection משטח המורכב של גוש קצף מכוסה בנייר אלומיניום וסיכות </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שני זוגות מספריים סטרילית מלקחיים קטנים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סטרילי 150 2 מ&quot;מ צלחת פטרי (תרמו פישר סיינטיפיק, Waltham, MA,. חתול # 08-757-13) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סטרילי 18 מד מחטים </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 50 מ&quot;ל חרוטי צינורות (קורנינג בע&quot;מ, קורנינג NY: חתול # 430829) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 10% שנאגרו פורמלין </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות רקמות צלוחיות <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> T-25 (TPP, Trasadingen, שוויץ, חתול # 90025) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> T-75 (TPP, Trasadingen, שוויץ, חתול # 90075) </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 6 גם צלחות (קורנינג בע&quot;מ, קורנינג NY: חתול # 3506) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פוספט סטרילי שנאגרו מלוחים pH 7.2 (PBS) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות בינוני <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> RPMI 1640 עם 25 HEPES מ&quot;מ, 200 מ&quot;מ L-גלוטמין (Lonza, Walkersville, MD, חתול # 12-115F) בתוספת הבאות: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חום 10% מומת (56 ° C, 30 דקות) בסרום שור העובר (FBS; Hyclone, לוגן, יוטה; חתול # SH30088.03) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1% פניצילין וסטרפטומיצין (Mediatech, Manassas, VA; חתול # 30-002-CI) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1% חומצות אמינו חיוניות (Mediatech; חתול # 25-025-CI) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 55 מ&quot;מ 2β-mercaptoethanol (Sigma, סנט לואיס, מיזורי, חתול # M752) </li></ul></li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> דימתיל sulfoxide (DMSO; Calbiochem, La Jolla, CA, חתול # 317275) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> נוגדנים (eBioScience, סן דייגו, קליפורניה) <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנטי CD3-FITC (קט # 11-0031-85) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנטי CD4-APC (קט # 17-0041-83) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> אנטי CD8-PE (קט # 12-081-85) </li></ul></li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שור בסרום אלבומין (BSA, החיים טכנולוגיות, גרנד איילנד, ניו יורק;. חתול # 11018-017) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Concanavalin (חתול Sigma # C5275) </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 1.8 הקפאת צלוחיות מ&quot;ל (Nunc, רוסקילדה, דנמרק, חתול # 368632) </li></ul>

derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice

שורות תאים הוקמה הם כלי מחקר ביקורתי זה יכול להפחית את השימוש בחיות מעבדה במחקר. זנים מסוימים של עכברים מהונדסים גנטית, כמו כספומט - / - ו-p53 - / - בעקביות לפתח לימפומה הרתי מוקדם בחיים 1,2, וכך, יכול לשמש מקור אמין עבור הגזירה של T-cell קווי Murine. כאן אנו מציגים פרוטוקול מפורט לפיתוח הוקמה Murine T-cell קווי הרתי לימפומה ללא צורך להוסיף אינטרלויקינים כפי שמתואר בפרוטוקולים הקודמים 1,3. גידולים נבצרו מעכברים בגילאי שלושה עד שישה חודשים, על פי סימן מוקדם של גידולים גלוי מבוססת על התצפית של יציבה כפופה, עמל, נשימה הטיפוח עני מבזבז ב 1,4 זן רגיש. הקמנו בהצלחה מספר T-cell קווי באמצעות פרוטוקול זנים טהורים של ATM - / - [FVB/N- כספומט tm1Led / J] 2 ו - p53 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] 5 עכברים. בנוסף, אנו מראים כי יותר מ -90% מהאוכלוסייה T-cell הוקמה מבטא CD3, CD4 ו - CD8. בהתאם שורות תאים הוקמה ביציבות, ה-T לתאים שנוצר באמצעות פרוטוקול הנוכחי כבר passaged במשך למעלה משנה.

Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice at JoVE.com

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

בסרטון הזה אנחנו מדגימים את פרוטוקול להקים הרתי עכבר לימפומה שורות תאים. על ידי ביצוע בפרוטוקול זה, הקמנו בהצלחה מספר T-cell קווי ATM-/ - ו-p53-/ - עכברים עם לימפומה הרתי.

גזירת הרתי T-cell לימפומה קווים מ כספומט - / -</sup ו P53 - / -</sup עכברים

Established cell lines are a critical research tool that can reduce the use of laboratory animals in research. Certain strains of genetically modified ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

עכברים Transnuclear עם מוגדרים מראש תא קולטן T ספציפיות נגד Toxoplasma gondii לקבל ע&quot;י SCNT

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

התמרה retroviral של T-cell קולטנים עכבר מתאי T

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

בחינה של בחירה חיובית ושלילית הרתי ידי זרימת cytometry

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

השתלה של עור זנב לחקר תגובות תא Allogeneic T מסוג CD4 בעכברים

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

גזירה של תאי T<em&gt; במבחנה</em&gt; מתאי עכבר גזע העובריים

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

העכבר נאיבי CD4<sup&gt; +</supו&gt; בידוד תא T<em&gt; במבחנה</em&gt; בידול לתוך תת תא T

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Retroviral Transduction of Bone Marrow Progenitor Cells to Generate T-cell Receptor Retrogenic Mice

Retroviral התמרה של ובתאים מח עצם כדי ליצור תאי T קולטן Retrogenic עכברים

T cell receptor (TCR) signaling is essential in the development and differentiation of T cells in the thymus and periphery, respectively.  The vast array ...

Preparation and Applications of Organotypic Thymic Slice Cultures

הכנה ויישומים של תרבויות Organotypic הרתי Slice

Thymic selection proceeds in a unique and highly organized thymic microenvironment resulting in the generation of a functional, self-tolerant T cell ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

מדידת T Cell Alloreactivity שימוש cytometry זרימה הדמיה

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection

שיטה פשוטה ויעילה להקים NK וקווים תא T של חולים עם דלקת כרונית פעילה וירוס אפשטיין בר

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed ...

גזירת הרתי T-cell לימפומה קווים מ כספומט - / - ו P53 - / - עכברים

גזירת הרתי T-cell לימפומה קווים מ כספומט^{- / - ו P53^{- / - עכברים}}