Name: derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice
Uploaded: 2011-04-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice at JoVE.com

The authors wish to thank Dr. Boris Reizis from the Department of Microbiology and Immunology at Columbia University for helpful discussions. We also wish to thank Dr. Margaret Bynoe, Dr. Rodman Getchell and Deequa Mahamed from the Department of Microbiology and Immunology at the College of Veterinary Medicine, Cornell University for technical assistance with flow cytometry and Lu Huang for assistance with video editing. The authors also wish to thank the members of Duhamel and Weiss laboratories for their critical review of the manuscript and video production, and Stephanie Yazinski from the Weiss laboratory for breeding and genotyping p53-/- mice. Experiments on animals were performed in accordance with the guidelines and regulations set forth by Cornell University Institutional Animal Care and Use Committee. This research was supported in part by funds provided by the US Department of Agriculture, Cooperative State Research, Education, and Extension Service, Animal Health and Disease Research Program (to G.E.D. and R.S.W.) and NIH grants R03 HD058220 and R01CA108773 (to R.S.W). The video was produced using in-house facilities by the personnel from the Duhamel &amp; Weiss laboratories.

1. ट्यूमर के विच्छेदन <ol><li> ट्यूमर विच्छेदन के लिए, एक साफ कागज तौलिया या डिस्पोजेबल सर्जिकल कपड़ा विच्छेदन पैड पर रखा गया है और 70% इथेनॉल के साथ छिड़काव. </li><li> इस प्रोटोकॉल के लिए चूहे को नियमित सीओ 2 के स...

<ol>
	<li>Barlow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atm-deficient+mice:+a+paradigm+of+ataxia+telangiectasia.">Atm-deficient mice: a paradigm of ataxia telangiectasia.</a> Cell. 86, 159-171 (1996).</li><li>Elson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotropic+defects+in+ataxia-telangiectasia+protein-deficient+mice.">Pleiotropic defects in ataxia-telangiectasia protein-deficient mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 13084-13089 (1996).</li><li>Kuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Atm-/-+thymic+lymphoma+cell+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+by+dexamethasone.">Control of Atm-/- thymic lymphoma cell proliferation in vitro and in vivo by dexamethasone.</a> Cancer Chemother Pharmacol. 55, 203-212 (2005).</li><li>Browne, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+with+a+catalytic+antioxidant+corrects+the+neurobehavioral+defect+in+ataxia-telangiectasia+mice.">Treatment with a catalytic antioxidant corrects the neurobehavioral defect in ataxia-telangiectasia mice.</a> Free Radic Biol Med. 36, 938-942 (2004).</li><li>Jacks, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+spectrum+analysis+in+p53-mutant+mice.">Tumor spectrum analysis in p53-mutant mice.</a> Curr Biol. 4, 1-7 (1994).</li><li>Chervinsky, D. S., Lam, D. H., Zhao, X. F., Melman, M. P., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+T+cell+leukemia+cell+lines+established+from+SCL/LMO1+double+transgenic+mice.">Development and characterization of T cell leukemia cell lines established from SCL/LMO1 double transgenic mice.</a> Leukemia. 15, 141-147 (2001).</li><li>Sharma, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch1+contributes+to+mouse+T-cell+leukemia+by+directly+inducing+the+expression+of+c-myc.">Notch1 contributes to mouse T-cell leukemia by directly inducing the expression of c-myc.</a> Mol Cell Biol. 26, 8022-8031 (2006).</li><li>Maser, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomally+unstable+mouse+tumours+have+genomic+alterations+similar+to+diverse+human+cancers.">Chromosomally unstable mouse tumours have genomic alterations similar to diverse human cancers.</a> Nature. 447, 966-971 (2007).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल में, हम दो अलग माउस जीनोटाइप से murine टी सेल लाइनों की स्थापना, एटीएम / - [FVB/N- एटीएम tm1Led / जम्मू] और p53 - / के लिए विस्तृत प्रक्रियाओं प्रदान करते हैं - [129/S6- Trp53 / tm1Tyj जम्?...

<ul><li> बर्फ बाल्टी </li><li> 70% इथेनॉल </li><li> विच्छेदन पैड एल्यूमीनियम पन्नी और पिन के साथ कवर फोम ब्लॉक के निर्वाचकगण </li><li> छोटे बाँझ कैंची और संदंश के दो सेट </li><li> बाँझ 150 मिमी 2 पेट्री डिश (थर्मो फिशर साइंटिफिक वॉल्थम, एमए, बिल्ली 08-757-13 #) </li><li> बाँझ 18 गेज सुई </li><li> 50 एमएल चोटीदार ट्यूबों (Corning इंक, Corning NY, 430829 # बिल्ली) </li><li> 10% formalin buffered </li><li> ऊतक संस्कृति बोतल <ul><li> टी 25 (TPP, Trasadingen, स्विट्जरलैंड, 90025 # बिल्ली) </li><li> टी 75 (TPP, Trasadingen, स्विट्जरलैंड, 90075 # बिल्ली) </li></ul></li><li> 6 अच्छी तरह प्लेटें (Corning इंक, Corning NY, बिल्ली 3506 #) </li><li> बाँझ फॉस्फेट खारा 7.2 पीएच (पीबीएस) buffered </li><li> संस्कृति के माध्यम <ul><li> 1640 RPMI 25 मिमी HEPES, 200 मिमी एल glutamine (Lonza, Walkersville, एमडी, बिल्ली # 12-115F) के साथ निम्नलिखित के साथ पूरक: <ul><li> 10% निष्क्रिय गर्मी (56 डिग्री सेल्सियस, 30 मिनट) भ्रूण गोजातीय सीरम (FBS, Hyclone, लोगान, केन्द्र शासित प्रदेशों, SH30088.03 # बिल्ली) </li><li> % 1 पेनिसिलिन और स्ट्रेप्टोमाइसिन (Mediatech, Manassas, VA, 30-002-CI # बिल्ली) </li><li> 1% nonessential अमीनो एसिड (Mediatech, 25-025-CI # बिल्ली) </li><li> 55 मिमी 2β - mercaptoethanol (सिग्मा, सेंट लुइस, MO, बिल्ली # M752) </li></ul></li></ul></li><li> डाइमिथाइल sulfoxide (DMSO; Calbiochem, ला Jolla, CA, 317275 # बिल्ली) </li><li> एंटीबॉडी (eBioScience, सैन डिएगो, CA) <ul><li> विरोधी CD3-FITC (# cat. 11-0031-85) </li><li> विरोधी सीडी 4 - APC (# cat. 17-0041-83) </li><li> विरोधी CD8-पीई (# cat. 12-081-85) </li></ul></li><li> गोजातीय albumin सीरम (BSA, जीवन टेक्नोलॉजीज, ग्रांड द्वीप, NY, बिल्ली # 11018-017) </li><li> Concanavalin (सिग्मा बिल्ली # C5275) </li><li> 1.8 एमएल ठंड शीशियों (Nunc, रॉसकिले, डेनमार्क, 368632 # बिल्ली) </li></ul>

derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice

स्थापित सेल लाइनों एक महत्वपूर्ण अनुसंधान उपकरण है कि अनुसंधान में प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग को कम कर सकते हैं. , जैसे एटीएम आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों के कुछ उपभेदों - / - और p53 - / - लगातार thymic लिंफोमा 1,2 जीवन में जल्दी विकसित करने, और इस प्रकार, murine टी सेल लाइनों की व्युत्पत्ति के लिए एक विश्वसनीय स्रोत के रूप में सेवा कर सकते हैं. यहाँ हम के रूप में पिछले 1,3 प्रोटोकॉल में वर्णित interleukins जोड़ने की जरूरत के बिना में स्थापित murine thymic लिंफोमा टी सेल लाइनों के विकास के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल उपस्थित थे. ट्यूमर तीन से छह महीने के आयु वर्ग के चूहों से काटा गया, hunched मुद्रा के अवलोकन के आधार पर दिखाई ट्यूमर के जल्द से जल्द संकेत पर, श्वास, गरीब संवारने और एक अतिसंवेदनशील तनाव 1,4 में बर्बाद कर अस्वाभाविक. / - - [FVB/N- एटीएम tm1Led / जम्मू] 2 और p53 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / जम्मू] 5 चूहों हम सफलतापूर्वक इस प्रोटोकॉल का उपयोग कर कई टी सेल लाइनों और एटीएम की जन्मजात उपभेदों की स्थापना की है. हम आगे दिखाना है कि टी सेल स्थापित जनसंख्या के 90% से अधिक CD3 सीडी 4, और CD8 व्यक्त. लगातार stably स्थापित सेल लाइनों के साथ, वर्तमान प्रोटोकॉल का उपयोग करके उत्पन्न टी कोशिकाओं को एक वर्ष से अधिक के लिए किया गया passaged है.

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Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

इस वीडियो में हम एक प्रोटोकॉल के लिए माउस thymic लिंफोमा सेल लाइनों की स्थापना प्रदर्शित करता है. और p53 / - thymic लिंफोमा के साथ चूहों इस प्रोटोकॉल का अनुसरण करके, हम सफलतापूर्वक एटीएम / से कई टी सेल लाइनों की स्थापना की है.

Thymic लिंफोमा से टी सेल लाइन्स की व्युत्पत्ति एटीएम<sup-> / -</sup और P53<sup-> / -</sup चूहे

Established cell lines are a critical research tool that can reduce the use of laboratory animals in research. Certain strains of genetically modified ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear चूहे के खिलाफ पूर्व परिभाषित टी सेल रिसेप्टर specificities के साथ Toxoplasma gondii SCNT के माध्यम से प्राप्त

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

माउस टी कोशिकाओं में टी सेल रिसेप्टर्स की रेट्रोवायरल transduction

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

फ्लो Thymic सकारात्मक और नकारात्मक चयन परीक्षा

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

चूहे में allogeneic सीडी 4 टी सेल प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए तेल त्वचा का प्रत्यारोपण

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

टी कोशिकाओं की व्युत्पत्ति<em&gt; इन विट्रो</em&gt; माउस भ्रूणीय स्टेम कोशिकाओं से

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

माउस भोले सीडी 4<sup&gt; +</sup&gt; टी सेल अलगाव और<em&gt; इन विट्रो</em&gt; टी सेल सबसेट में भेदभाव

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Retroviral Transduction of Bone Marrow Progenitor Cells to Generate T-cell Receptor Retrogenic Mice

अस्थि मज्जा पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं का रेट्रोवायरल transduction टी सेल रिसेप्टर Retrogenic चूहे उत्पन्न करने के लिए

T cell receptor (TCR) signaling is essential in the development and differentiation of T cells in the thymus and periphery, respectively.  The vast array ...

Preparation and Applications of Organotypic Thymic Slice Cultures

तैयारी और Organotypic Thymic टुकड़ा संस्कृतियों के आवेदन

Thymic selection proceeds in a unique and highly organized thymic microenvironment resulting in the generation of a functional, self-tolerant T cell ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

टी सेल Alloreactivity का मापन इमेजिंग फ्लो का उपयोग करना

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection

जीर्ण सक्रिय Epstein-बर्र वायरस संक्रमण के साथ रोगियों से NK और टी सेल लाइनों की स्थापना करने के लिए एक कुशल और सरल तरीका

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed ...

Thymic लिंफोमा से टी सेल लाइन्स की व्युत्पत्ति एटीएम / - और P53 / - चूहे