Name: derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice
Uploaded: 2011-04-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice at JoVE.com

The authors wish to thank Dr. Boris Reizis from the Department of Microbiology and Immunology at Columbia University for helpful discussions. We also wish to thank Dr. Margaret Bynoe, Dr. Rodman Getchell and Deequa Mahamed from the Department of Microbiology and Immunology at the College of Veterinary Medicine, Cornell University for technical assistance with flow cytometry and Lu Huang for assistance with video editing. The authors also wish to thank the members of Duhamel and Weiss laboratories for their critical review of the manuscript and video production, and Stephanie Yazinski from the Weiss laboratory for breeding and genotyping p53-/- mice. Experiments on animals were performed in accordance with the guidelines and regulations set forth by Cornell University Institutional Animal Care and Use Committee. This research was supported in part by funds provided by the US Department of Agriculture, Cooperative State Research, Education, and Extension Service, Animal Health and Disease Research Program (to G.E.D. and R.S.W.) and NIH grants R03 HD058220 and R01CA108773 (to R.S.W). The video was produced using in-house facilities by the personnel from the Duhamel &amp; Weiss laboratories.

1. Препарирование опухоли <ol><li> Для опухоли вскрытия, чистым бумажным полотенцем или одноразовой хирургической драпировка делается на вскрытие блокнот и опрыскивают 70% этанола. </li><li> Мыши для этого протокола обычно усыпляют с CO 2. Место эвтаназии мыши на вскрытии площадку и брызг ...

<ol>
	<li>Barlow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atm-deficient+mice:+a+paradigm+of+ataxia+telangiectasia.">Atm-deficient mice: a paradigm of ataxia telangiectasia.</a> Cell. 86, 159-171 (1996).</li><li>Elson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotropic+defects+in+ataxia-telangiectasia+protein-deficient+mice.">Pleiotropic defects in ataxia-telangiectasia protein-deficient mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 13084-13089 (1996).</li><li>Kuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Atm-/-+thymic+lymphoma+cell+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+by+dexamethasone.">Control of Atm-/- thymic lymphoma cell proliferation in vitro and in vivo by dexamethasone.</a> Cancer Chemother Pharmacol. 55, 203-212 (2005).</li><li>Browne, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+with+a+catalytic+antioxidant+corrects+the+neurobehavioral+defect+in+ataxia-telangiectasia+mice.">Treatment with a catalytic antioxidant corrects the neurobehavioral defect in ataxia-telangiectasia mice.</a> Free Radic Biol Med. 36, 938-942 (2004).</li><li>Jacks, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+spectrum+analysis+in+p53-mutant+mice.">Tumor spectrum analysis in p53-mutant mice.</a> Curr Biol. 4, 1-7 (1994).</li><li>Chervinsky, D. S., Lam, D. H., Zhao, X. F., Melman, M. P., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+T+cell+leukemia+cell+lines+established+from+SCL/LMO1+double+transgenic+mice.">Development and characterization of T cell leukemia cell lines established from SCL/LMO1 double transgenic mice.</a> Leukemia. 15, 141-147 (2001).</li><li>Sharma, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch1+contributes+to+mouse+T-cell+leukemia+by+directly+inducing+the+expression+of+c-myc.">Notch1 contributes to mouse T-cell leukemia by directly inducing the expression of c-myc.</a> Mol Cell Biol. 26, 8022-8031 (2006).</li><li>Maser, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomally+unstable+mouse+tumours+have+genomic+alterations+similar+to+diverse+human+cancers.">Chromosomally unstable mouse tumours have genomic alterations similar to diverse human cancers.</a> Nature. 447, 966-971 (2007).</li></ol>

В этом протоколе, мы предоставляем подробные процедуры создания мышиные Т-клеточных линий от двух разных генотипов мыши; атм - / - [FVB/N- Атм tm1Led / J] и р53 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] . Используя этот протокол, в общей сложности 6 (из 7 попыток) атм - / - ?...

<ul><li> Ведерко со льдом </li><li> 70% этанола </li><li> Препарирование площадку, состоящую из пеноблока покрыта алюминиевой фольгой и булавки </li><li> Два набора небольших стерильные ножницы и пинцет </li><li> Стерильные 150 мм 2 чашки Петри (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA;. Кошка # 08-757-13) </li><li> Стерильные 18 калибр иглы </li><li> 50 мл конические пробирки (Corning Inc, Corning штат Нью-Йорк; кошка # 430829) </li><li> 10% буферный формалин </li><li> Колбы культуры ткани <ul><li> Т-25 (ТЭС, Trasadingen, Швейцария; кошка # 90025) </li><li> Т-75 (ТЭС, Trasadingen, Швейцария; кошка # 90075) </li></ul></li><li> 6-луночных планшетах (Corning Inc, Corning штат Нью-Йорк; кошка # 3506) </li><li> Стерильные фосфатным буферным солевым раствором рН 7,2 (PBS) </li><li> Культура среда <ul><li> RPMI 1640 с 25 мМ HEPES, 200 мМ L-глутамина (Lonza, Уолкерсвилл, MD; кошка # 12-115F) с добавлением следующее: <ul><li> 10% тепла инактивированной (56 ° C, 30 мин) эмбриональной телячьей сыворотки (FBS; Hyclone, Логан, Юта, кошка # SH30088.03) </li><li> 1% пенициллина и стрептомицина (Mediatech, Манассас, Вирджиния, кошка № 30-002-CI) </li><li> 1% заменимые аминокислоты (Mediatech; кошка № 25-025-CI) </li><li> 55 мм 2β-меркаптоэтанол (Sigma, St Louis, Миссури; кошка # M752) </li></ul></li></ul></li><li> Диметилсульфоксид (ДМСО; Calbiochem, Ла-Хойя, Калифорния; кошка # 317275) </li><li> Антитела (eBioScience, Сан-Диего, Калифорния) <ul><li> анти-CD3-FITC (кат. # 11-0031-85) </li><li> анти-CD4-APC (кат. # 17-0041-83) </li><li> анти-CD8-PE (кат. # 12-081-85) </li></ul></li><li> Бычьего сывороточного альбумина (БСА; Life Technologies, Гранд-Айленд, Нью-Йорк;. Кошка # 11018-017) </li><li> Конканавалин (Sigma кошка # C5275) </li><li> 1,8 мл флаконах замораживания (Nunc, Roskilde, Дания; кошка # 368632) </li></ul>

derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice

Основанная клеточных линий являются одним из важнейших инструментов исследования, которые могут уменьшить использование лабораторных животных в научных исследованиях. Некоторые штаммы генетически модифицированных мышей, таких как ATM - / - и р53 - / - последовательно развивать вилочковой железы лимфомы в раннем возрасте 1,2, и, таким образом, может служить надежным источником для вывода мышиные Т-клеточных линиях. Здесь мы представляем подробный протокол для развития создан мышиной лимфомы тимуса Т-клеточных линий без необходимости добавлять интерлейкины, как описано в предыдущих протоколах 1,3. Опухоли были собраны от мышей в возрасте от трех до шести месяцев, при первой указанием видимых опухолей основана на наблюдении выгибание спины, затрудненное дыхание, плохой уход и тратить в 1,4 восприимчивы напряжения. Мы успешно создано несколько Т-клеточных линий с использованием этого протокола, и инбредных линий банкоматов - / - [FVB/N- Атм tm1Led / J] 2 и p53 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] 5 мышей. Кроме того, мы показали, что более 90% от установленной Т-клеточной популяции выражает CD3, CD4 и CD8. В соответствии со стабильно установленных линий клеток, Т-клеток, созданный с помощью данного протокола были пассировать в течение года.

Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice at JoVE.com

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

В этом видео мы продемонстрируем протокол установить мышь тимуса клеточных линиях лимфомы. Следуя этому протоколу, мы успешно создано несколько Т-клеточных линий из банкоматов-/ - и p53-/ - мышей с лимфомой тимуса.

Вывод тимуса лимфомы Т-клеточных линий из Atm - / -</sup И Р53 - / -</sup Мыши

Established cell lines are a critical research tool that can reduce the use of laboratory animals in research. Certain strains of genetically modified ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Мыши с Предустановленные Т Особенности клеточного рецептора Против Toxoplasma гондий, Полученные через SCNT

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Ретровирусные трансдукция Т-клеточных рецепторов в мышь Т-клеток

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

Экспертиза тимуса позитивной и негативной селекции с помощью проточной цитометрии

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Трансплантация кожи хвоста изучать Аллогенная лимфоцитов CD4 ответов у мышей

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Вывод Т-клеток<em&gt; In Vitro</em&gt; От эмбриональных стволовых клеток мыши

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Мышь наивного CD4<sup&gt; +</sup&gt; Т-клеток Выделение и<em&gt; В пробирке</em&gt; Дифференциация в Т-клеточных подмножеств

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Retroviral Transduction of Bone Marrow Progenitor Cells to Generate T-cell Receptor Retrogenic Mice

Ретровирусное Трансдукция костного мозга клеток-предшественников для генерации Т-клеточного рецептора Retrogenic Мыши

T cell receptor (TCR) signaling is essential in the development and differentiation of T cells in the thymus and periphery, respectively.  The vast array ...

Preparation and Applications of Organotypic Thymic Slice Cultures

Приготовление и применение Органотипической тимуса срез культуры

Thymic selection proceeds in a unique and highly organized thymic microenvironment resulting in the generation of a functional, self-tolerant T cell ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Измерение Т-клетки с помощью визуализации аллореактивности проточной цитометрии

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection

Эффективной и простой метод для установления линии Т-клеток у больных с хроническим активный вирус Эпштейна - Барр инфекции и НК

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed ...

Вывод тимуса лимфомы Т-клеточных линий из Atm - / - И Р53 - / - Мыши

Вывод тимуса лимфомы Т-клеточных линий из Atm^{- / - И Р53^{- / - Мыши}}