Name: derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice
Uploaded: 2011-04-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice at JoVE.com

Los autores desean agradecer al Dr. Boris Reizis del Departamento de Microbiología e Inmunología en la Universidad de Columbia útil para los debates. También queremos agradecer a la Dra. Margaret Bynoe, Dr. Rodman Getchell y Mahamed Deequa del Departamento de Microbiología e Inmunología de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad de Cornell para la asistencia técnica con la citometría de flujo y Lu Huang para obtener ayuda con la edición de vídeo. Los autores también desean agradecer a los miembros de Duhamel y los laboratorios de Weiss para su revisión crítica de la producción de manuscritos y de vídeo, y Yazinski Stephanie Weiss en el laboratorio de reproducción y genotipo p53 - / - ratones. Los experimentos con animales se realizaron de acuerdo con las directrices y normas establecidas por Cornell Cuidado de Animales Institucional de la Universidad y el empleo. Esta investigación fue financiada en parte con fondos proporcionados por el Departamento de Agricultura de EE.UU., Estado de Investigación Cooperativa, Educación y Servicio de Extensión, Salud Animal y el Programa de Investigación de Enfermedades (para el GED y AMR) y las subvenciones del NIH R03 HD058220 y R01CA108773 (a RSW). El video fue producido utilizando en instalaciones de la casa por el personal de los laboratorios de Duhamel &amp; Weiss.

1. La disección del tumor <ol><li> Para la disección del tumor, una toalla de papel o paño quirúrgico desechable se coloca en la plataforma de la disección y rociado con etanol al 70%. </li><li> Los ratones de este protocolo son habitualmente sacrificados con CO 2. Coloque el ratón sacrificados en la plataforma de la disección y el spray ambos lados del animal con etanol. El ratón se mantiene en su lugar en la almohadilla de la disección a través de cuatro o más alfileres inserta a través de las...

<ol>
	<li>Barlow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atm-deficient+mice:+a+paradigm+of+ataxia+telangiectasia.">Atm-deficient mice: a paradigm of ataxia telangiectasia.</a> Cell. 86, 159-171 (1996).</li><li>Elson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotropic+defects+in+ataxia-telangiectasia+protein-deficient+mice.">Pleiotropic defects in ataxia-telangiectasia protein-deficient mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 13084-13089 (1996).</li><li>Kuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Atm-/-+thymic+lymphoma+cell+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+by+dexamethasone.">Control of Atm-/- thymic lymphoma cell proliferation in vitro and in vivo by dexamethasone.</a> Cancer Chemother Pharmacol. 55, 203-212 (2005).</li><li>Browne, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+with+a+catalytic+antioxidant+corrects+the+neurobehavioral+defect+in+ataxia-telangiectasia+mice.">Treatment with a catalytic antioxidant corrects the neurobehavioral defect in ataxia-telangiectasia mice.</a> Free Radic Biol Med. 36, 938-942 (2004).</li><li>Jacks, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+spectrum+analysis+in+p53-mutant+mice.">Tumor spectrum analysis in p53-mutant mice.</a> Curr Biol. 4, 1-7 (1994).</li><li>Chervinsky, D. S., Lam, D. H., Zhao, X. F., Melman, M. P., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+T+cell+leukemia+cell+lines+established+from+SCL/LMO1+double+transgenic+mice.">Development and characterization of T cell leukemia cell lines established from SCL/LMO1 double transgenic mice.</a> Leukemia. 15, 141-147 (2001).</li><li>Sharma, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch1+contributes+to+mouse+T-cell+leukemia+by+directly+inducing+the+expression+of+c-myc.">Notch1 contributes to mouse T-cell leukemia by directly inducing the expression of c-myc.</a> Mol Cell Biol. 26, 8022-8031 (2006).</li><li>Maser, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomally+unstable+mouse+tumours+have+genomic+alterations+similar+to+diverse+human+cancers.">Chromosomally unstable mouse tumours have genomic alterations similar to diverse human cancers.</a> Nature. 447, 966-971 (2007).</li></ol>

En este protocolo, se proporcionan procedimientos detallados para establecer murino líneas de células T a partir de dos genotipos diferentes del ratón, ATM - / - [FVB/N- Atm tm1Led / J] y p53 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] . Mediante el uso de este protocolo, un total de 6 (de 7 intentos) ATM - / - y tres (de 5 intentos) p53 - / - murino líneas de células T se han establecido en nuestro laborato...

<ul><li> Ramo de hielo </li><li> 70% de etanol </li><li> Disección de plataforma que consta de bloques de espuma cubierta con papel de aluminio y pasadores </li><li> Dos conjuntos de pequeñas tijeras y pinzas estériles </li><li> Estéril de 150 mm 2 placa de Petri (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA;. Cat # 08-757-13) </li><li> Estéril 18 agujas de calibre </li><li> 50 ml tubos cónicos (Corning Inc., Corning NY, cat # 430829) </li><li> 10% de formol </li><li> Frascos de cultivo de tejidos <ul><li> T-25 (TPP, Trasadingen, Suiza, cat # 90025) </li><li> T-75 (TPP, Trasadingen, Suiza, cat # 90075) </li></ul></li><li> Placas de 6 pocillos (Corning Inc., Corning NY, cat # 3506) </li><li> Estéril tamponada con fosfato salino pH 7.2 (PBS) </li><li> Medio de cultivo <ul><li> RPMI 1640 con HEPES 25 mM, 200 mM L-glutamina (Lonza, Walkersville, MD, cat # 12-115F), complementado con lo siguiente: <ul><li> 10% inactivado por calor (56 ° C, 30 min) de suero fetal bovino (SFB; Hyclone, Logan, UT, cat # SH30088.03) </li><li> 1% de penicilina y estreptomicina (Mediatech, Manassas, VA; gato # 30-002-CI) </li><li> 1% aminoácidos no esenciales (Mediatech, cat # 25-025-CI) </li><li> 55 mM 2β-mercaptoetanol (Sigma, St Louis, MO, cat # M752) </li></ul></li></ul></li><li> Dimetilsulfóxido (DMSO; Calbiochem, La Jolla, CA, cat # 317275) </li><li> Anticuerpos (eBioscience, San Diego, CA) <ul><li> anti-CD3-FITC (cat. # 11-0031-85) </li><li> anti-CD4-APC (cat. # 17-0041-83) </li><li> anti-CD8-PE (cat. # 12-081-85) </li></ul></li><li> Albúmina sérica bovina (BSA, Life Technologies, Grand Island, NY;. Cat # 11018-017) </li><li> Concanavalina A (Sigma cat # C5275) </li><li> 1,8 mL viales de congelación (Nunc, Roskilde, Dinamarca, cat # 368632) </li></ul>

derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice

Las líneas celulares establecidas son una herramienta de investigación fundamental que puede reducir el uso de animales de laboratorio en la investigación. Ciertas cepas de ratones genéticamente modificados, tales como ATM - / - y p53 - / - consistentemente desarrollar linfoma del timo primeros años de vida 1,2, y por lo tanto, puede servir como una fuente confiable para la derivación de murino líneas de células T. Aquí presentamos un protocolo detallado para el desarrollo de linfomas tímicos murinos establecido líneas de células T, sin necesidad de añadir las interleucinas como se describe en los protocolos anteriores 1,3. Los tumores se cosecharon de los ratones de tres a seis meses, en la primera indicación de tumores visibles sobre la base de la observación de la postura encorvada, dificultad para respirar, la preparación pobre y perder en un 1,4 cepa susceptible. Hemos establecido con éxito varias líneas de células T que utilizan este protocolo y cepas puras de ATM - / - [FVB/N- Atm tm1Led / J] 2 y p53 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] 5 ratones. Además, demuestran que más del 90% de lo establecido población de células T expresa CD3, CD4 y CD8. De acuerdo con las líneas celulares establecidas de forma estable, las células T generados por el uso del presente Protocolo se han pases para más de un año.

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Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

En este video se demuestra un protocolo para establecer ratón timo líneas celulares de linfoma. Siguiendo este protocolo, hemos establecido con éxito varias líneas de células T de la ATM-/ - y p53-/ - ratones con linfoma del timo.

Derivación de linfoma tímico líneas de células T de Atm - / -</sup Y P53 - / -</sup Ratones

Established cell lines are a critical research tool that can reduce the use of laboratory animals in research. Certain strains of genetically modified ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Los ratones con Transnuclear predefinidos Especificidades receptor de células T contra la Toxoplasma gondii Obtenidos a través de la SCNT

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Investigación

Inmunología e Infección

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Transducción retroviral de receptores de células T en ratones las células T

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

El examen de selección tímica positivo y negativo por citometría de flujo

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

El trasplante de la cola de la piel para el Estudio alogénico de células T CD4 respuestas en ratones

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivación de células T<em&gt; In Vitro</em&gt; De células madre embrionarias de ratón

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Ratón Naïve CD4<sup&gt; +</sup&gt; Aislamiento de células T y<em&gt; In vitro</em&gt; Diferenciación en subconjuntos de células T

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Retroviral Transduction of Bone Marrow Progenitor Cells to Generate T-cell Receptor Retrogenic Mice

Retroviral transducción de células progenitoras de médula ósea para generar las células T del receptor Retrogenic ratones

T cell receptor (TCR) signaling is essential in the development and differentiation of T cells in the thymus and periphery, respectively.  The vast array ...

Preparation and Applications of Organotypic Thymic Slice Cultures

Preparación y aplicaciones de Organotípicos tímico Slice culturas

Thymic selection proceeds in a unique and highly organized thymic microenvironment resulting in the generation of a functional, self-tolerant T cell ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

La medición de células T Alorreactividad recurriendo a imágenes de Citometría de Flujo

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection

Un método eficiente y Simple para establecer líneas de células T de pacientes con infección crónica activa Virus Epstein - Barr y NK

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed ...

Derivación de linfoma tímico líneas de células T de Atm - / - Y P53 - / - Ratones

Derivación de linfoma tímico líneas de células T de Atm^{- / - Y P53^{- / - Ratones}}