Name: derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice
Uploaded: 2011-04-03T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice at JoVE.com

Yazarlar, Columbia Üniversitesi Mikrobiyoloji ve İmmünoloji Anabilim Dalı Dr. Boris Reizis yararlı tartışmalar için teşekkür etmek istiyorum. Ayrıca, akım sitometri ve video düzenleme ile ilgili yardım için Lu Huang ile teknik yardım için, Cornell Üniversitesi Veteriner Fakültesi Mikrobiyoloji ve İmmünoloji Anabilim Dalı Dr Margaret Bynoe, Dr. Rodman Getchell ve Deequa Mahamed teşekkür etmek istiyoruz. / - Fareler Yazarlar ayrıca p53 ıslahı ve genotipleme için kritik gözden geçirilmesi, el yazması ve video prodüksiyon ve Stephanie Yazinski Weiss laboratuvar Duhamel ve Weiss laboratuarlar üyelerine teşekkür etmek istiyorum. Cornell Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak hayvanlar üzerinde deneyler yapıldı. Bu araştırma, ABD Tarım Departmanı, Kooperatif Devlet Araştırma, Eğitim, ve Yayım Hizmetleri, Hayvan Sağlığı ve Hastalıkları Araştırma Programı (GED ve RSW) ve NIH hibe R03 HD058220 ve R01CA108773 (RSW) tarafından sağlanan fonları tarafından kısmen desteklenmiştir. Video Duhamel &amp; Weiss laboratuvarların personeli tarafından in-house imkanlarını kullanarak imal edilmiştir.

1. Tümör diseksiyonu <ol><li> Tümör diseksiyonu için, temiz bir kağıt havlu ya da tek kullanımlık cerrahi örtü diseksiyon pad üzerinde yerleştirilir ve% 70 etanol ile püskürtülür. </li><li> Fareler, bu protokol için rutin olarak CO 2 ile ötenazi ötenazi fare diseksiyon yastık yerleştirin ve etanol ile hayvanın her iki tarafta sprey . Bacakları içeri sokulur ve% 70 etanol ile iyice püskürtülür dört veya daha fazla itme pimleri kullanarak fare diseksiyonu ped üzerine bir yerde t...

<ol>
	<li>Barlow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atm-deficient+mice:+a+paradigm+of+ataxia+telangiectasia.">Atm-deficient mice: a paradigm of ataxia telangiectasia.</a> Cell. 86, 159-171 (1996).</li><li>Elson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotropic+defects+in+ataxia-telangiectasia+protein-deficient+mice.">Pleiotropic defects in ataxia-telangiectasia protein-deficient mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 13084-13089 (1996).</li><li>Kuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Atm-/-+thymic+lymphoma+cell+proliferation+in+vitro+and+in+vivo+by+dexamethasone.">Control of Atm-/- thymic lymphoma cell proliferation in vitro and in vivo by dexamethasone.</a> Cancer Chemother Pharmacol. 55, 203-212 (2005).</li><li>Browne, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+with+a+catalytic+antioxidant+corrects+the+neurobehavioral+defect+in+ataxia-telangiectasia+mice.">Treatment with a catalytic antioxidant corrects the neurobehavioral defect in ataxia-telangiectasia mice.</a> Free Radic Biol Med. 36, 938-942 (2004).</li><li>Jacks, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+spectrum+analysis+in+p53-mutant+mice.">Tumor spectrum analysis in p53-mutant mice.</a> Curr Biol. 4, 1-7 (1994).</li><li>Chervinsky, D. S., Lam, D. H., Zhao, X. F., Melman, M. P., Aplan, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+T+cell+leukemia+cell+lines+established+from+SCL/LMO1+double+transgenic+mice.">Development and characterization of T cell leukemia cell lines established from SCL/LMO1 double transgenic mice.</a> Leukemia. 15, 141-147 (2001).</li><li>Sharma, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Notch1+contributes+to+mouse+T-cell+leukemia+by+directly+inducing+the+expression+of+c-myc.">Notch1 contributes to mouse T-cell leukemia by directly inducing the expression of c-myc.</a> Mol Cell Biol. 26, 8022-8031 (2006).</li><li>Maser, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromosomally+unstable+mouse+tumours+have+genomic+alterations+similar+to+diverse+human+cancers.">Chromosomally unstable mouse tumours have genomic alterations similar to diverse human cancers.</a> Nature. 447, 966-971 (2007).</li></ol>

Bu protokolde, iki farklı fare genotipleri fare T-hücre hatları kurmak için ayrıntılı yordamlar sağlar; - / - [FVB/N- Atm tm1Led / J] ve p53 - / - Atm [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] . / - Ve üç (5 girişimleri), p53 - / - Bu protokol, 6 olmak üzere toplam (7 girişimleri) Atm kullanarak fare T-hücre laboratuvarda kurulmuştur. / - Bu hücre hattı DWJ-Atm-1, bir <em...

<ul><li> Buz kovası </li><li> % 70 etanol </li><li> Alüminyum folyo ve pimler ile kaplı köpük blok oluşan Diseksiyon ped </li><li> İki takım küçük steril makas ve forseps </li><li> Steril 150 mm 2 Petri kabı (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, kedi # 08-757-13) </li><li> Steril 18 insülin iğnesi </li><li> 50 ml konik tüpler (Corning Inc Corning, NY, kedi # 430.829) </li><li> % 10 formalin solüsyonu </li><li> Doku kültürü matara <ul><li> T-25 (DYP, Trasadingen, İsviçre; kedi # 90025.) </li><li> T-75 (DYP, Trasadingen, İsviçre; kedi # 90.075) </li></ul></li><li> 6-kuyucuğu (Corning Inc, Corning, NY, kedi # 3506) </li><li> Steril fosfat tuzlu pH 7,2 (PBS) tamponlu </li><li> Kültür ortamı <ul><li> L-glutamin (Lonza, Walkersville, MD; kedi # 12-115F) 200 mM, 25 mM HEPES RPMI 1640 aşağıdaki ile desteklenebilir: <ul><li> Inaktive% 10 ısı (56 ° C, 30 dakika) fetal sığır serumu (FBS; Hyclone Logan, UT, kedi # SH30088.03) </li><li> % 1 penisilin ve streptomisin (Mediatech, Manassas, VA, kedi # 30-002-CI) </li><li> % 1 aminoasitlerin (Mediatech; kedi # 25-025-CI) </li><li> 55 mM 2β merkaptoetanol (Sigma, St Louis, MO, kedi # M752) </li></ul></li></ul></li><li> Dimetil sülfoksit (DMSO; Calbiochem, La Jolla, CA, kedi # 317.275) </li><li> Antikorlar (eBioScience, San Diego, CA) <ul><li> anti-CD3-FITC (kat. no 11-0031-85) </li><li> anti-CD4-APC (kat. no 17-0041-83) </li><li> anti-CD8-PE (kat. # 12-081-85) </li></ul></li><li> Sığır serum albumin (BSA; Yaşam Teknolojileri, Grand Island, NY, kedi # 11.018-017) </li><li> Concanavalin A (Sigma kedi # C5275) </li><li> 1.8 mL dondurma şişeleri (Nunc, Roskilde, Danimarka, kedi # 368.632) </li></ul>

derivation of thymic lymphoma t-cell lines from atm-/- and p53-/- mice

Kurulan hücre hatları araştırma laboratuvar hayvanları kullanımını azaltmak kritik bir araştırma aracı. ATM gibi genetiği değiştirilmiş farelerde Bazı suşları / - ve p53 - / - sürekli erken ömrü 1,2 timik lenfoma geliştirmek, ve böylece, fare T-hücre hatları türetilmesi için güvenilir bir kaynak olarak hizmet verebilir. Burada gerek kalmadan önceki protokoller 1,3 açıklandığı gibi interlökinler eklemek için kurulan fare timik lenfoma T-hücre gelişimi için ayrıntılı bir protokol mevcut. Tümörler, hunched duruş gözlem dayalı görünür tümörlerin erken göstergesi, üç ila altı ay arası farelerden alınan hasat nefes alma, yetersiz bakım ve duyarlı bir gerginlik 1,4 de israf yorucu. / - [FVB/N- Atm tm1Led / J] 2 ve p53 - / - [129/S6- Trp53 tm1Tyj / J] 5 fareler Biz bu protokolü kullanarak çeşitli T-hücre hatları ve Atm kendilenmiş suşları başarıyla kurduk. Daha kurulan T-hücre nüfusunun% 90&#39;dan daha fazla CD3, CD4 ve CD8 ifade ettiğini göstermektedir. Stably kurulan hücre hatları ile tutarlı, mevcut protokolü kullanılarak üretilen T-hücrelerinin, bir yılı aşkın bir süredir geçişli olmuştur.

Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice at JoVE.com

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Bu video, fare timik lenfoma hücre hatları kurmak için bir protokol göstermektedir. Ve p53-/ - farelerde timus lenfoma ile bu protokolü takip ederek, başarıyla birkaç Atm / T-hücre hatları kurduk.

Timik Lenfoma T-hücre Hatları türetilmesi Atm - / -</sup Ve P53 - / -</sup Fare

Established cell lines are a critical research tool that can reduce the use of laboratory animals in research. Certain strains of genetically modified ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Transnuclear Mice with Pre-defined T Cell Receptor Specificities Against Toxoplasma gondii Obtained Via SCNT

Karşı Önceden tanımlanmış T Hücre Reseptör özgüllükleri Transnuclear Fare Toxoplasma gondii SCNT ile Elde Edilen

Lymphocytes, such as T cells, undergo genetic V(D)J recombination, to generate a receptor with a certain specificity1. Mice transgenic for a rearranged ...

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Fare T-hücrelerinin, T-hücre reseptörleri retroviral İletimi

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Examination of Thymic Positive and Negative Selection by Flow Cytometry

Akım Sitometri tarafından Timik Pozitif ve Negatif Seçim incelenmesi

A healthy immune system requires that T cells respond to foreign  antigens while remaining tolerant to self-antigens. Random rearrangement of the  T cell ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

Farelerde allojenik CD4 + T hücre Cevapları Eğitim için Kuyruk Cilt Nakli

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

T hücrelerinin türetilmesi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Fare Embriyonik Kök Hücreleri

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Fare Naif CD4<sup&gt; +</sup&gt; T Hücre İzolasyonu ve<em&gt; In vitro</em&gt; T hücre alt içine Farklılaşma

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Retroviral Transduction of Bone Marrow Progenitor Cells to Generate T-cell Receptor Retrogenic Mice

Kemik iliği projenitör hücrelerinin retroviral İletimi T-hücre reseptör Retrogenic fareler üretmek için

T cell receptor (TCR) signaling is essential in the development and differentiation of T cells in the thymus and periphery, respectively.  The vast array ...

Preparation and Applications of Organotypic Thymic Slice Cultures

Hazırlık ve Organotipik Timik Dilim Kültürler Uygulamaları

Thymic selection proceeds in a unique and highly organized thymic microenvironment resulting in the generation of a functional, self-tolerant T cell ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

Görüntüleme Akım Sitometri Kullanımı T Hücresi alloreaktivitesini Ölçümü

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection

NK ve kronik aktif Epstein - Barr virüsü enfeksiyonu olan hastalarda T hücre satırlarından kurmak için etkili ve basit bir yöntem

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed ...

Timik Lenfoma T-hücre Hatları türetilmesi Atm - / - Ve P53 - / - Fare

Timik Lenfoma T-hücre Hatları türetilmesi Atm^{- / - Ve P53^{- / - Fare}}