Name: neural-colony forming cell assay: an assay to discriminate bona fide neural stem cells from neural progenitor cells
Uploaded: 2011-03-06T14:00:00
Duration: 6 min 31 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells at JoVE.com

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	<li>Azari, H., Rahaman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahaman, M., Ansari, S., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay.">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J Vis Exp. , (2011).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707-1710 (1992).</li><li>Reynolds, B. A., Rietze, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+neurospheres--re-evaluating+the+relationship.">Neural stem cells and neurospheres--re-evaluating the relationship.</a> Nat Methods. 2, 333-336 (2005).</li><li>Louis, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enumeration+of+Neural+Stem+and+Progenitor+Cells+in+the+Neural+Colony+Forming+Cell+Assay.">Enumeration of Neural Stem and Progenitor Cells in the Neural Colony Forming Cell Assay.</a> Stem Cells. , (2008).</li><li>Golmohammadi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+the+frequency+and+distribution+of+stem+and+progenitor+cells+in+the+adult+mouse+brain.">Comparative analysis of the frequency and distribution of stem and progenitor cells in the adult mouse brain.</a> Stem Cells. 26, 979-987 (2008).</li><li>Louis, S. A., Reynolds, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosphere+and+Neural+Colony-Forming+Cell+Assays.">Neurosphere and Neural Colony-Forming Cell Assays.</a> Protocols for Neural Cell Culture. 10, 1-28 (2010).</li></ol>

लेखकों की एक शेरोन ए लुइस, StemCell टेक्नोलॉजीज इंक, कुछ इस अध्ययन में इस्तेमाल अभिकर्मकों के एक निर्माता के साथ संबद्ध है.

हालांकि neurosphere 3,1,2 परख सबसे आम विधि को अलग और वयस्क और भ्रूण ऊतक सीएनएस की तरह स्रोतों की एक किस्म से तंत्रिका स्टेम सेल का विस्तार है, यह सही तंत्रिका अग्रदूत साबित कोशिकाओं के एक मिश्रित आबादी में एनएससी आवृत्ति उपाय नहीं कर सकते हैं ( स्टेम और progenitors) के रूप में वहाँ neurospheres की संख्या और सदाशयी स्टेम 4 कोशिकाओं की संख्या के बीच एक से एक रिश्ता नहीं है . इस सीमा का पता करने के लिए, मूल एनएसए इतनी अनुकूलित किया गया है के रूप में तंत्रिका स्टेम और progenitors तीन 5-7 हफ्तों के लिए अपनी पूरी प्रसार क्षमता को विकसित करने के लिए अनुमति देने के लिए. तरल एनएसए के विपरीत, एन CFCA कालोनियों वास्तव clonally प्राप्त कर रहे हैं, के रूप में अर्द्ध ठोस कोलेजन मैट्रिक्स एकल चढ़ाया और कोशिकाओं कालोनियों के एकत्रीकरण के प्रवास रोकता है. हम इस परख के साथ संगत परिणामों के लिए सिफारिश: <ol><li> मूल सेल निलंबन में एक एकल कक्ष निलंबन सुनिश्चित करें. 40 सुक्ष्ममापी आकार एक जाल फिल्टर के माध्यम से अपने एकल कक्ष निलंबन तो दर्रा के रूप में गैर - अलग clumps को हटाने के लिए. </li><li> कोलेजन समाधान बर्फ पर या 4 ° सी फ्रिज में रखें. कोलेजन आखरी सेल निलंबन के मिश्रण करने के लिए जोड़ा जा के रूप में यह तापमान में वृद्धि से congeals आइटम है. </li><li> हर हफ्ते संस्कृति फ़ीड करने के लिए मत भूलना. पुनःपूर्ति वृद्धि कारक (ओं) को एक बार हर 7 दिनों युक्त मध्यम जोड़ना कोशिकाओं में फैला संस्कृति अवधि पैदा जारी रखने की अनुमति देगा. </li><li> अंतिम सेल चढ़ाना घनत्व या तो प्राथमिक या सुसंस्कृत तंत्रिका कोशिकाओं से व्युत्पन्न कोशिकाओं के लिए अनुकूलित किया गया है ताकि संस्कृति के 21 दिनों बाद पता चला कालोनियों की कुल संख्या NCFC कम से कम 50 की सीमा के भीतर है - 200 कालोनियों. इस रेंज के नमूने में व्यास में दुर्लभ एनएससी व्युत्पन्न 2mm&gt; कालोनियों का पता लगाने की अनुमति देता है, जबकि सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए कालोनियों के लिए पर्याप्त संख्या उपलब्ध कराने. शुरू सेल स्रोत पर निर्भर करता है, काफी कम (&lt;50 और कालोनियों की उच्च संख्या) (&gt; 250) कभी कभी प्राप्त कर रहे हैं. बहुत कुछ कालोनियों कालोनियों&gt; 2mm में पता लगाने के स्तर से नीचे जा रहा व्यास में परिणाम है, जबकि भी कई कालोनियों मध्यम विकास एक गलत कॉलोनी गिनती में जिसके परिणामस्वरूप घटकों के भीड़भाड़ anddepletion में परिणाम होगा. इसलिए सेल चढ़ाना घनत्व तदनुसार समायोजित करने की आवश्यकता (यानी बढ़ती या कोशिकाओं मढ़वाया की कुल संख्या घटते) </li></ol>

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>NeuroCult NSC Basal Medium</td>
<td>Medium</td>
<td>STEMCELL</td>
<td>05700</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NeuroCult NSC Proliferation Supplements</td>
<td>Medium supplement</td>
<td>STEMCELL</td>
<td>05701</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NeuroCult NCFC medium</td>
<td>Medium</td>
<td>STEMCELL</td>
<td>05720</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.05% 	trypsin-EDTA</td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>25300-062</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Soybean trypsin inhibitor </td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>T6522</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cell strainer </td>
<td>Sieve</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352340</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pen/Strep </td>
<td>Reagent</td>
<td>Gibco</td>
<td>15140-122</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T25 flask</td>
<td>Culture ware</td>
<td>Nalge Nunc international</td>
<td>136196</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>T80 flask</td>
<td>Culture ware</td>
<td>Nalge Nunc international</td>
<td>178905</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagen</td>
<td>Reagent </td>
<td>STEMCELL</td>
<td>04902</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EGF</td>
<td>Growth factor</td>
<td>R&amp;D</td>
<td>2028-EG</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>b-FGF</td>
<td>Growth factor</td>
<td>R&amp;D</td>
<td>3139-FB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heparin</td>
<td>Growth factor</td>
<td>Sigma</td>
<td>H4784</td>
<td>Reconstituted in PBS</td>
</tr>
<tr>
<td>15 ml tubes</td>
<td>Culture ware</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352096</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>50 ml tubes</td>
<td>Culture ware</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352070</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>35 mm culture dishes</td>
<td>Culture ware</td>
<td>STEMCELL</td>
<td>27100</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gridded scoring dishes</td>
<td>Culture ware</td>
<td>STEMCELL</td>
<td>27500</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

neural-colony forming cell assay: an assay to discriminate bona fide neural stem cells from neural progenitor cells

neurosphere परख (एनएसए) सबसे अक्सर इस्तेमाल किया तरीकों को अलग करने, विस्तार और भी तंत्रिका स्टेम सेल (एनएससी) की आवृत्ति की गणना की है. इसके अलावा, इस सीरम मुक्त संस्कृति प्रणाली भी करने के लिए स्टेम सेल का विस्तार करने के लिए और ट्यूमर और सामान्य ऊतकों की एक किस्म से अपने आवृत्ति निर्धारित नियोजित किया गया. यह हाल ही में दिखाया गया है कि एक रिश्ता एक एक neurosphere गठन और एनएससी के बीच मौजूद नहीं है. यह पता चलता है कि एनएसए के रूप में वर्तमान में लागू है, दोनों भ्रूण और वयस्क स्तनधारी मस्तिष्क से अलग तंत्रिका अग्रदूत साबित कोशिकाओं के एक मिश्रित आबादी में एनएससी की आवृत्ति overestimates. यह वीडियो व्यावहारिक रूप से एक उपन्यास अर्द्ध ठोस परख आधारित कोलेजन को दर्शाता है, तंत्रिका कॉलोनी सेल (एन CFCA) परख, जो पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं से स्टेम उनके दीर्घकालिक proliferative संभावित आधार पर भेदभाव करने की क्षमता है, और इस प्रकार निर्मित करना प्रदान करता है एक विधि एनएससी आवृत्ति एन्यूमरेट करने के लिए. एन CFCA ≥ 2 मिमी व्यास में कालोनियों कोशिकाओं है कि एक एनएससी के सभी कार्यात्मक मानदंडों को पूरा से निकाली गई है, जबकि कालोनियों &lt;2mm progenitors से निकाली गई है. एन - CFCA प्रक्रिया प्राथमिक और सुसंस्कृत वयस्क या भ्रूण माउस सीएनएस कोशिकाओं सहित विभिन्न स्रोतों से तैयार की कोशिकाओं के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. यहाँ हम बीतने से एक भ्रूण दिन 14 चूहों के मस्तिष्क से उत्पन्न एन CFCA प्रदर्शन neurospheres तैयार कोशिकाओं का उपयोग करें. संस्कृतियों के प्रसार के माध्यम से तीन सप्ताह के लिए हर सात दिन मंगाया मढ़वाया कोशिकाओं को अपनी पूर्ण proliferative संभावित प्रदर्शन करने के लिए अनुमति देते हैं और फिर तंत्रिका पूर्वज और सदाशयी तंत्रिका स्टेम सेल की आवृत्ति क्रमशः कालोनियों कि &lt;2mm हैं की संख्या की गणना के द्वारा की गणना है और हैं कि कोशिकाओं की संख्या है कि शुरू में मढ़वाया थे के संदर्भ में ≥ 2mm हैं.

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Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

यह वीडियो प्रोटोकॉल दर्शाता है कि कैसे भेदभाव और तंत्रिका अग्रदूत साबित कोशिकाओं के तंत्रिका कोशिका परख कॉलोनी के गठन का उपयोग कर एक मिश्रित आबादी में सदाशयी तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं को एन्यूमरेट.

सेल परख बनाने तंत्रिका कालोनी: एक सदाशयी तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं से तंत्रिका स्टेम सेल भेदभाव की परख

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

अलगाव और वयस्क माउस तंत्रिका स्टेम सेल के विस्तार Neurosphere परख का उपयोग

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

भ्रूण माउस तंत्रिका स्टेम सेल संस्कृति की स्थापना Neurosphere परख का उपयोग

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

संवेदी अंग अग्रदूत साबित कोशिकाओं के बरकरार में लाइव सेल इमेजिंग ड्रोसोफिला Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Neuroblast परख: पीढ़ी और neuronal पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं का संवर्धन फर्क तंत्रिका स्टेम सेल संतान से फ्लो का प्रयोग के लिए एक परख

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

अलगाव और भ्रूण murine तंत्रिका ट्यूब से तंत्रिका शिखा कोशिकाओं की संस्कृति

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

मानव pluripotent से तंत्रिका शिखा पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं के फीडर से मुक्त व्युत्पत्ति स्टेम सेल

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

सेल वयस्क माउस subventricular क्षेत्र से तंत्रिका स्टेम और पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं की छंटनी और उनके सेल चक्र गतिशीलता का लाइव-इमेजिंग

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं के गणन क्लोनल assays का उपयोग

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Development of a Refined Protocol for Trans-scleral Subretinal Transplantation of Human Retinal Pigment Epithelial Cells into Rat Eyes

चूहा आँखों में मानव रेटिना वर्णक उपकला कोशिकाओं के ट्रांस-scleral रेटिना प्रत्यारोपण के लिए एक परिष्कृत प्रोटोकॉल का विकास

Degenerative retinal diseases such as age-related macular degeneration (AMD) are the leading cause of irreversible vision loss worldwide. AMD is ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Sialoglycan के मेटाबोलिक लेबलिंग द्वारा प्राथमिक तंत्रिका स्टेम और संतति कोशिकाओं के सेल सतह मार्करों की पहचान

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...