Name: western blotting using the invitrogen nupage novex bis tris minigels
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels at JoVE.com

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة ومؤسسة هيويت E. جورج الزمالة (CNN).

هلام الكهربائي الملاحظة الفنية : قبل بدء هذا الإجراء ، وعينات من البروتين الخاص بك جاهزة. خلال هذه الخطوة الأولى ، يتم فصل البروتينات في العينة وفقا لوزنها الجزيئي باستخدام تغيير...

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gel+Migration+chart:+.">Gel Migration chart: .</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+western-blot+protocol+from+the+Invitrogen+website.">Complete western-blot protocol from the Invitrogen website.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NuPAGE+technical+guide.">NuPAGE technical guide.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instruction+Manual,+Mini+Trans-Blot+Cell.">Instruction Manual, Mini Trans-Blot Cell.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ECL+Plus+Western+blotting+detection+reagents+instruction.">ECL Plus Western blotting detection reagents instruction.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+protein+molecular+weights+by+SDS+gel+electrophoresis,+GE+Healthcare+Website.">Estimation of protein molecular weights by SDS gel electrophoresis, GE Healthcare Website.</a> , .</li><li>Yeromin, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+the+CRAC+channel+by+altered+ion+selectivity+in+a+mutant+of+Orai.">Molecular identification of the CRAC channel by altered ion selectivity in a mutant of Orai.</a> Nature. 443, 226-229 (2006).</li><li>Zhang, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Store-dependent+and+-independent+modes+regulating+CRAC+channel+activity+of+human+Orai1+and+Orai3.">Store-dependent and -independent modes regulating CRAC channel activity of human Orai1 and Orai3.</a> J. Biol. Chem. 283, 17662-17671 (2008).</li><li>Penna, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CRAC+channel+consists+of+a+tetramer+formed+by+Stim-induced+dimerization+of+Orai+dimers.">The CRAC channel consists of a tetramer formed by Stim-induced dimerization of Orai dimers.</a> Nature. , .</li></ol>

الإجراء المعروض هنا يستخدم الجل مكرر تريس مع MES تشغيل العازلة كمثال على تغيير طبيعة الصفحة باستخدام الكهربائي Invitrogen Novex NuPAGE النظام. بالإضافة إلى ذلك ، هذا النظام هلام مسبقة الصنع يسمح فصل البروتين تحت تغيير طبيعة أو عدم تغيير طبيعة الظروف ، وكذلك يستوعب مجموعة واسعة من الأوزان ا...

western blotting using the invitrogen nupage novex bis tris minigels

التنشيف الغربي (أو immunoblotting) هو إجراء المختبر القياسية السماح للمحققين للتحقق من التعبير عن بروتين ، وتحديد القيمة النسبية للحاضر البروتين في عينات مختلفة ، وتحليل نتائج التجارب المشتركة مناعي. في هذا الأسلوب ، يتم الكشف عن بروتين الهدف مع الأضداد ابتدائية معينة في عينة معينة من جناسة الأنسجة أو استخراج. ويتحقق وفقا لفصل البروتين الوزن الجزيئي باستخدام تغيير طبيعة SDS - PAGE. بعد نقلها إلى غشاء ، هو بحث البروتين الهدف مع الأضداد ابتدائية معينة والكشف عنها بواسطة لمعان كيميائي. منذ الوصف الأول ، وقد مرت هذه التقنية الغربي النشاف العديد من التحسينات ، بما في ذلك المواد الهلامية مسبقة الصنع ومعدات صديقة للمستخدم. في مختبرنا ، اخترنا لاستخدام الكهربائي NuPAGE المتاحة تجاريا من نظام Invitrogen. وهو الرقم الهيدروجيني المبتكرة محايدة ، متقطع SDS - PAGE ، مسبقة الصنع مصغرة هلام النظام. هذا النظام يقدم العديد من المزايا التقنية Laemmli التقليدية بما في ذلك : أ) حياة أطول الجرف من المواد الهلامية مسبقة الصنع تتراوح بين 8 أشهر إلى سنة 1 ؛ الثاني) فصل مجموعة واسعة من الأوزان الجزيئية 1-400 كيلو دالتون تبعا لنوع من الجل المستخدمة ؛ والثالث) وزيادة التنوع (مجموعة من نسبة مادة الأكريلاميد ، ونوع من الهلام ، وتركيبة الأيونية للالعازلة على التوالي). الإجراء الموضح في هذه المقالة الفيديو يستخدم نظام مكرر تريس العازلة المتقطعة مع 4-12 ٪ مكرر تريس التدرج المواد الهلامية وزارة التربية والعلم تشغيل العازلة ، وكمثال على كيفية تنفيذ وصمة عار للغرب باستخدام الكهربائي NuPAGE Invitrogen النظام. في المختبر لدينا ، لقد حصلنا على نتائج جيدة وقابلة للتكرار للتطبيقات الحيوية المختلفة باستخدام هذا الأسلوب الغربي النشاف.

Watch this Scientific Journal Video about Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels at JoVE.com

Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels

هذا المقال يصف التقنية القياسية الغربي النشاف الإجراء باستخدام الكهربائي NuPAGE المتاحة تجاريا مصغرة جل النظام من Invitrogen.

الغربية التنشيف باستخدام NuPage Invitrogen Novex مكرر تريس MiniGels

Western Blotting (or immunoblotting) is a standard laboratory procedure allowing investigators to verify the expression of a protein, determine the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Surgical Induction of Endolymphatic Hydrops by Obliteration of the Endolymphatic Duct

الجراحية تحريض موه اللمف الباطن عن طريق محو القناة اللمف الباطن

Surgical induction of endolymphatic hydrops (ELH) in the guinea pig by obliteration and obstruction of the endolymphatic duct is a well-accepted animal ...

Western Blotting: Sample Preparation to Detection

الغربية التنشيف : إعداد نموذج لكشف

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel ...

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) System

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC System

الكشف عن تفاعلات البروتين في النبات باستخدام عبارة الإسفار ثنائي الجزيء المتوافقة التكملة (BiFC) نظام

We have developed a BiFC technique to test the interaction between two proteins in vivo. This is accomplished by splitting a yellow fluorescent protein ...

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

الصلبة التجميعي المرحلة من الببتيد البس Functionalized استخدام &quot;سلامة الصيد&quot; منهجية

In 1962, R.B. Merrifield published the first procedure using solid-phase peptide synthesis as a novel route to efficiently synthesize peptides. This ...

Using High Resolution Computed Tomography to Visualize the Three Dimensional Structure and Function of Plant Vasculature

باستخدام التصوير المقطعي عالي الدقة لتصور البنية الثلاثية وظيفة الأوعية الدموية النباتية

High resolution x-ray computed tomography (HRCT) is a non-destructive diagnostic imaging technique with sub-micron resolution capability that is now being ...

Imaging and 3D Reconstruction of Cerebrovascular Structures in Embryonic Zebrafish

التصوير والإعمار 3D من الهياكل الدماغية في الجنينية اسماك الزرد

Zebrafish are a powerful tool to study developmental biology and pathology in vivo.  The small size and relative transparency of zebrafish embryos make ...

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

التفريق بين الأطفال حديثي الولادة ماوس خلايا الجلد الجذعية المشتقة في مثل جرثومة خلايا<em&gt; في المختبر</em

Studying  germ cell formation and differentiation has traditionally been very difficult  due to low cell numbers and their location deep within developing ...

V3 Stain-free Workflow for a Practical, Convenient, and Reliable Total Protein Loading Control in Western Blotting

V3 سير العمل خالية من وصمة عار لمراقبة عملية ومريحة وموثوق بها مجموع البروتين تحميل في النشاف الغربية

The western blot is a very useful and widely adopted lab technique, but its execution is challenging. The workflow is often characterized as a &#34;black ...

The Fastest Western in Town: A Contemporary Twist on the Classic Western Blot Analysis

أسرع الغربية في المدينة: لمسة عصرية على تحليل كلاسيكي غربي وصمة عار

The Western blot techniques that were originally established in the late 1970s are still actively utilized today. However, this traditional method of ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

دليل لمودرن الكمية نيون الغربية التنشيف مع استراتيجيات استكشاف الأخطاء وإصلاحها

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...