Name: western blotting using the invitrogen nupage novex bis tris minigels
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels at JoVE.com

यह काम स्वास्थ्य और जॉर्ज ई. हेविट फाउंडेशन फैलोशिप (एपी) के राष्ट्रीय संस्थानों से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.

जेल वैद्युतकणसंचलन तकनीकी नोट: प्रक्रिया शुरू करने से पहले, अपने प्रोटीन के नमूने तैयार है . इस दिशा में पहला कदम के दौरान, नमूना में प्रोटीन उनके आणविक denaturing polyacrylamide जेल वैद्?...

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	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gel+Migration+chart:+.">Gel Migration chart: .</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+western-blot+protocol+from+the+Invitrogen+website.">Complete western-blot protocol from the Invitrogen website.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NuPAGE+technical+guide.">NuPAGE technical guide.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instruction+Manual,+Mini+Trans-Blot+Cell.">Instruction Manual, Mini Trans-Blot Cell.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ECL+Plus+Western+blotting+detection+reagents+instruction.">ECL Plus Western blotting detection reagents instruction.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+protein+molecular+weights+by+SDS+gel+electrophoresis,+GE+Healthcare+Website.">Estimation of protein molecular weights by SDS gel electrophoresis, GE Healthcare Website.</a> , .</li><li>Yeromin, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+the+CRAC+channel+by+altered+ion+selectivity+in+a+mutant+of+Orai.">Molecular identification of the CRAC channel by altered ion selectivity in a mutant of Orai.</a> Nature. 443, 226-229 (2006).</li><li>Zhang, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Store-dependent+and+-independent+modes+regulating+CRAC+channel+activity+of+human+Orai1+and+Orai3.">Store-dependent and -independent modes regulating CRAC channel activity of human Orai1 and Orai3.</a> J. Biol. Chem. 283, 17662-17671 (2008).</li><li>Penna, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CRAC+channel+consists+of+a+tetramer+formed+by+Stim-induced+dimerization+of+Orai+dimers.">The CRAC channel consists of a tetramer formed by Stim-induced dimerization of Orai dimers.</a> Nature. , .</li></ol>

यहाँ प्रस्तुत की प्रक्रिया एमईएस PAGE denaturing Invitrogen NuPAGE Novex वैद्युतकणसंचलन प्रणाली का उपयोग कर के एक उदाहरण के रूप में बफर चलाने के साथ एक बीआईएस Tris जेल का उपयोग करता है. इसके अलावा, इस पूर्व डाली जेल प्रणाली के तहत प्रोटी?...

western blotting using the invitrogen nupage novex bis tris minigels

पश्चिमी सोख्ता (या immunoblotting) के जांचकर्ताओं को एक प्रोटीन की अभिव्यक्ति को सत्यापित करने के लिए अनुमति देता है एक मानक प्रयोगशाला प्रक्रिया है, विभिन्न नमूनों में मौजूद प्रोटीन के रिश्तेदार राशि निर्धारित करते हैं, और सह immunoprecipitation प्रयोगों के परिणामों का विश्लेषण. इस विधि में, एक लक्ष्य प्रोटीन ऊतक homogenate या निकालने के किसी नमूने में एक विशिष्ट प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ पाया है. प्रोटीन आणविक भार अनुसार जुदाई एसडीएस पृष्ठ denaturing का उपयोग करने के लिए हासिल की है. एक झिल्ली को स्थानांतरण के बाद, लक्ष्य प्रोटीन एक विशिष्ट प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ जांच है और chemiluminescence द्वारा पता लगाया. अपनी पहली वर्णन के बाद से, पश्चिमी सोख्ता तकनीक पूर्व डाली जैल और उपयोगकर्ता के अनुकूल उपकरण सहित कई सुधार आया है. हमारी प्रयोगशाला में, हम Invitrogen से व्यावसायिक रूप से उपलब्ध NuPAGE वैद्युतकणसंचलन प्रणाली का उपयोग करने के लिए चुना है. यह एक अभिनव तटस्थ पीएच, असंतत एसडीएस PAGE, पूर्व डाली मिनी जेल प्रणाली है. I) 8 महीने से लेकर 1 वर्ष पूर्व डाली जैल की एक लंबी शैल्फ जीवन, ii) 1 से 400 केडीए के लिए आणविक वजन का एक व्यापक रेंज जुदाई प्रकार के आधार: इस प्रणाली सहित पारंपरिक Laemmli तकनीक से अधिक कई फायदे प्रस्तुत की जेल इस्तेमाल किया, और iii) अधिक से अधिक बहुमुखी प्रतिभा (acrylamide प्रतिशत, जेल के प्रकार, और चल रहे बफर के ईओण संरचना की सीमा). इस वीडियो आलेख में वर्णित प्रक्रिया 4-12% बीआईएस Tris ढाल जैल और एमईएस बफर कैसे एक पश्चिमी धब्बा प्रदर्शन करने के लिए Invitrogen NuPAGE वैद्युतकणसंचलन प्रणाली का उपयोग का एक उदाहरण के रूप में चल रहा है के साथ बीआईएस Tris असंतत बफर प्रणाली का इस्तेमाल करता है. हमारी प्रयोगशाला में, हम विभिन्न जैव रासायनिक इस पश्चिमी सोख्ता पद्धति का उपयोग करके अनुप्रयोगों के लिए अच्छा है और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्राप्त किया है.

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Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels

यह तकनीकी लेख एक मानक पश्चिमी सोख्ता Invitrogen से व्यावसायिक रूप से उपलब्ध NuPAGE वैद्युतकणसंचलन मिनी जेल प्रणाली का उपयोग कर प्रक्रिया का वर्णन करता है.

Invitrogen NuPage Novex बीआईएस Tris MiniGels का प्रयोग पश्चिमी सोख्ता

Western Blotting (or immunoblotting) is a standard laboratory procedure allowing investigators to verify the expression of a protein, determine the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Surgical Induction of Endolymphatic Hydrops by Obliteration of the Endolymphatic Duct

Endolymphatic वाहिनी की विस्मृति द्वारा Endolymphatic Hydrops के सर्जिकल प्रेरण

Surgical induction of endolymphatic hydrops (ELH) in the guinea pig by obliteration and obstruction of the endolymphatic duct is a well-accepted animal ...

Western Blotting: Sample Preparation to Detection

पश्चिमी सोख्ता: जांच के लिए नमूना तैयार

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel ...

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) System

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC System

संयंत्र में प्रोटीन बातचीत एक गेटवे संगत bimolecular प्रतिदीप्ति (BiFC) complementation सिस्टम का उपयोग की जांच

We have developed a BiFC technique to test the interaction between two proteins in vivo. This is accomplished by splitting a yellow fluorescent protein ...

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

Functionalized बीआईएस - पेप्टाइड की ठोस चरण संश्लेषण पद्धति का प्रयोग &quot;सुरक्षा पकड़ो&quot;

In 1962, R.B. Merrifield published the first procedure using solid-phase peptide synthesis as a novel route to efficiently synthesize peptides. This ...

Using High Resolution Computed Tomography to Visualize the Three Dimensional Structure and Function of Plant Vasculature

उच्च संकल्प गणना टोमोग्राफी का उपयोग करने के लिए तीन आयामी और संयंत्र vasculature की संरचना और समारोह कल्पना

High resolution x-ray computed tomography (HRCT) is a non-destructive diagnostic imaging technique with sub-micron resolution capability that is now being ...

Imaging and 3D Reconstruction of Cerebrovascular Structures in Embryonic Zebrafish

इमेजिंग और भ्रूणीय Zebrafish में cerebrovascular संरचनाएं की 3 डी पुनर्निर्माण

Zebrafish are a powerful tool to study developmental biology and pathology in vivo.  The small size and relative transparency of zebrafish embryos make ...

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

रोगाणु की तरह कोशिकाओं में नवजात माउस त्वचा प्राप्त स्टेम कोशिकाओं के भेदभाव<em&gt; इन विट्रो में</em

Studying  germ cell formation and differentiation has traditionally been very difficult  due to low cell numbers and their location deep within developing ...

V3 Stain-free Workflow for a Practical, Convenient, and Reliable Total Protein Loading Control in Western Blotting

पश्चिमी ब्लॉटिंग में व्यावहारिक, सुविधाजनक और विश्वसनीय कुल प्रोटीन लोडिंग नियंत्रण के लिए V3 दाग मुक्त वर्कफ़्लो

The western blot is a very useful and widely adopted lab technique, but its execution is challenging. The workflow is often characterized as a &#34;black ...

The Fastest Western in Town: A Contemporary Twist on the Classic Western Blot Analysis

टाउन में पश्चिमी सबसे तेज: क्लासिक पश्चिमी धब्बा विश्लेषण पर एक समकालीन मोड़

The Western blot techniques that were originally established in the late 1970s are still actively utilized today. However, this traditional method of ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

समस्या निवारण रणनीतियों के साथ आधुनिक मात्रात्मक फ्लोरोसेंट पश्चिमी सोख्ता के लिए एक गाइड

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...