Name: western blotting using the invitrogen nupage novex bis tris minigels
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels at JoVE.com

この作品は、健康とジョージE.ヒューイット財団フェローシップ（AP）の国立研究所からの補助金によって支えられている。

ゲル電気泳動 テクニカルノート ：手順を開始する前に、あなたのタンパク質サンプルをご用意。 この最初のステップで、サンプル中のタンパク質は、変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動（PAGE）を用いてその分子量に従って分離されています。タンパク質サンプルを10分間70℃で加熱された後にドデシル硫酸リ?...

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	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gel+Migration+chart:+.">Gel Migration chart: .</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+western-blot+protocol+from+the+Invitrogen+website.">Complete western-blot protocol from the Invitrogen website.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NuPAGE+technical+guide.">NuPAGE technical guide.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instruction+Manual,+Mini+Trans-Blot+Cell.">Instruction Manual, Mini Trans-Blot Cell.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ECL+Plus+Western+blotting+detection+reagents+instruction.">ECL Plus Western blotting detection reagents instruction.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+protein+molecular+weights+by+SDS+gel+electrophoresis,+GE+Healthcare+Website.">Estimation of protein molecular weights by SDS gel electrophoresis, GE Healthcare Website.</a> , .</li><li>Yeromin, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+the+CRAC+channel+by+altered+ion+selectivity+in+a+mutant+of+Orai.">Molecular identification of the CRAC channel by altered ion selectivity in a mutant of Orai.</a> Nature. 443, 226-229 (2006).</li><li>Zhang, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Store-dependent+and+-independent+modes+regulating+CRAC+channel+activity+of+human+Orai1+and+Orai3.">Store-dependent and -independent modes regulating CRAC channel activity of human Orai1 and Orai3.</a> J. Biol. Chem. 283, 17662-17671 (2008).</li><li>Penna, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CRAC+channel+consists+of+a+tetramer+formed+by+Stim-induced+dimerization+of+Orai+dimers.">The CRAC channel consists of a tetramer formed by Stim-induced dimerization of Orai dimers.</a> Nature. , .</li></ol>

ここに示す手順では、MESは、インビトロジェンNuPAGE NOVEXの電気泳動システムを使用してページを変性の例として、バッファを実行するとビス - トリスゲルを使用しています。さらに、このプレキャストゲルシステムは、変性または非変性条件下でタンパク質の分離を可能にするだけでなく、広範囲の分子量を（ビス - トリスゲルのための100から200 kDaのからのための36から400 kDaのトリス-対応アセテートゲル?...

western blotting using the invitrogen nupage novex bis tris minigels

西洋では（またはイムノ）ブロッティング捜査官は、タンパク質の発現を確認する、異なるサンプル中に存在するタンパク質の相対量を決定し、共免疫沈降実験の結果を分析できるように標準的な検査法です。この方法では、標的タンパク質は、組織ホモジネートまたは抽出物の特定のサンプル中の特定の一次抗体で検出される。分子量に応じてタンパク質の分離はSDS - PAGEを変性使用して実現されます。膜への転送後に、標的タンパク質は、特定の一次抗体でプローブされ、化学発光で検出。 その最初の記述以来、ウェスタンブロッティングの手法は、プリキャストゲルとユーザーフレンドリーな機器を含むいくつかの改良が施されています。当研究室では、我々はInvitrogen社から市販されてNuPAGE電気泳動システムを使用することにしました。それは革新的な中性pH、不連続SDS - PAGE、プレキャストミニゲルシステムです。 8ヶ月から1年までのプレキャストゲルの長い貯蔵寿命ⅰ）、ⅱ）1〜400 kDaの分子量の広い分離範囲はタイプによって定義：このシステムには含めて従来のLaemmliの手法に比べていくつかの利点を提示ゲル使用の;）とIII以上の汎用性（アクリルアミドの割合、ゲルの種類、および実行中の緩衝液のイオン組成の範囲）。 このビデオの記事で説明した手順4-12％ビス - トリス勾配ゲルとMESはインビトロジェンのNuPAGEの電気泳動システムを用いてウエスタンブロットを実行する方法の例として、バッファを実行するとビス - トリス不連続緩衝液系を利用しています。当研究室では、我々はこのウェスタンブロッティング法を用いて様々な生化学アプリケーション用の良いと再現性のある結果を得ている。

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Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels

この技術記事では、Invitrogen社から市販されてNuPAGE電気ミニゲルシステムを使用して標準的なウェスタンブロッティング手順を説明します。

西洋は、Invitrogen NuPage NOVEXビストリスミニゲルを用いたウェスタンブロット

Western Blotting (or immunoblotting) is a standard laboratory procedure allowing investigators to verify the expression of a protein, determine the ...

Research

JoVE Journal

Biology

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