Name: western blotting using the invitrogen nupage novex bis tris minigels
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00
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이 작품은 건강과 조지 E. 휴이트 재단 교제 (AP)의 국립 연구소에서 보조금에 의해 지원되었다.

겔 전기 영동 기술 참고 : 절차를 시작하기 전에 단백질 샘플을 준비했습니다. 이 첫 번째 단계 동안 샘플에서 단백질은 denaturing polyacrylamide 젤 전기 영동 (PAGE)를 사용하여 분자량에 따라 구분됩니다. 단백질 샘플이 10 분 동안 70 ° C에서 가열되고 나면 리튬 Dodecyl의 황산 (LDS)를 읽어 NuPAGE ® LDS 샘플 버퍼 변성 상태 poly...

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	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gel+Migration+chart:+.">Gel Migration chart: .</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+western-blot+protocol+from+the+Invitrogen+website.">Complete western-blot protocol from the Invitrogen website.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NuPAGE+technical+guide.">NuPAGE technical guide.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instruction+Manual,+Mini+Trans-Blot+Cell.">Instruction Manual, Mini Trans-Blot Cell.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ECL+Plus+Western+blotting+detection+reagents+instruction.">ECL Plus Western blotting detection reagents instruction.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+protein+molecular+weights+by+SDS+gel+electrophoresis,+GE+Healthcare+Website.">Estimation of protein molecular weights by SDS gel electrophoresis, GE Healthcare Website.</a> , .</li><li>Yeromin, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+the+CRAC+channel+by+altered+ion+selectivity+in+a+mutant+of+Orai.">Molecular identification of the CRAC channel by altered ion selectivity in a mutant of Orai.</a> Nature. 443, 226-229 (2006).</li><li>Zhang, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Store-dependent+and+-independent+modes+regulating+CRAC+channel+activity+of+human+Orai1+and+Orai3.">Store-dependent and -independent modes regulating CRAC channel activity of human Orai1 and Orai3.</a> J. Biol. Chem. 283, 17662-17671 (2008).</li><li>Penna, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CRAC+channel+consists+of+a+tetramer+formed+by+Stim-induced+dimerization+of+Orai+dimers.">The CRAC channel consists of a tetramer formed by Stim-induced dimerization of Orai dimers.</a> Nature. , .</li></ol>

여기에 제시 절차는 MES는 Invitrogen NuPAGE Novex 전기 영동 시스템을 사용하여 페이지를 denaturing의 예로 버퍼를 실행하는 비스 - 트리스 젤을 사용합니다. 또한이 사전 캐스트 겔 시스템은 denaturing 또는 비 - denaturing 조건뿐만 아니라 아래의 단백질 분리 수 있습니다 분자 무게의 광범위한 (위한 36-400 KDA에 BIS - 트리스 젤에 대한 1-200 KDA에서 트리스 - 숙박 아세테이트 젤). 실험에 따라, 당신은 여기에서 설명한 서양 모?...

western blotting using the invitrogen nupage novex bis tris minigels

서양은 모래 바닥 (또는 immunoblotting하는) 조사관은 단백질의 표현을 확인할 수 있도록 표준 실험실 절차, 다른 샘플에서 단백질 현재의 상대적 양을 결정하고, 공동 immunoprecipitation 실험의 결과를 분석할 수 있습니다. 이 방법에서는 대상 단백질은 조직 homogenate 또는 추출물의 주어진 샘플의 특정 기본 항체와 함께 발견됩니다. 분자량에 따른 단백질 분리는 SDS - PAGE를 denaturing 사용하여 이루어진다. 멤브레인로 전송 후, 대상 단백질은 특정 기본 항체와 탐지하고 chemiluminescence에 의해 감지. 최초의 설명 이후 서양 모래 바닥 기법 사전 주조 젤류 및 사용자 친화적인 장비를 포함한 여러 개선을 거쳐있다. 저희 연구실에서는, 우리는 Invitrogen에서 상용 NuPAGE 전기 영동 시스템을 사용하도록 선택했습니다. 그것은 혁신적인 중립 산도, 불연속 SDS - PAGE, 사전 캐스트 미니 젤 시스템입니다. 8개월에서 일년에 이르기까지 사전 주조 젤의 긴 선반 인생); II) 1에서 400 KDA하는 분자 무게의 광범위한 분리 범위는 유형에 따라이 시스템을 포함한 전통적인 Laemmli 기술을 통해 몇 가지 장점을 소개 의 겔 사용되는;) 및 III보다 다재 다능한 (아크릴 아미드 비율, 젤의 종류 및 실행 버퍼의 이온 조성의 범위). 이 비디오 문서에서 설명하는 절차는 4-12% 비스 - 트리스 기울기 젤류 및 MES는 Invitrogen의 NuPAGE 전기 영동 시스템을 사용하여 서양 얼룩을 수행하는 방법에 대한 그림으로, 버퍼를 실행하는 BIS - 트리스 불연속 버퍼 시스템을 사용합니다. 저희 연구실에서는, 우리는이 서양 모래 바닥 방법을 사용하여 다양한 생화 학적 응용 프로그램을위한 좋은 재현성 결과를 획득했습니다.

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Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels

이 기술 문서는 Invitrogen에서 상용 NuPAGE 전기 영동 미니 젤 시스템을 사용하여 표준 서양 모래 바닥 절차를 설명합니다.

웨스턴 Invitrogen NuPage Novex BIS 트리스 MiniGels를 사용하여 모래 바닥

Western Blotting (or immunoblotting) is a standard laboratory procedure allowing investigators to verify the expression of a protein, determine the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Surgical Induction of Endolymphatic Hydrops by Obliteration of the Endolymphatic Duct

Endolymphatic 덕트의 말살로 Endolymphatic의 Hydrops의 외과 유도

Surgical induction of endolymphatic hydrops (ELH) in the guinea pig by obliteration and obstruction of the endolymphatic duct is a well-accepted animal ...

연구

생물학

Western Blotting: Sample Preparation to Detection

웨스턴 모래 바닥 : 샘플 준비를 탐지하기 위해

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel ...

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) System

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC System

게이트웨이 가능 Bimolecular의 형광 Complementation (BiFC) 시스템을 사용하여 공장에서 단백질 상호 작용의 검출

We have developed a BiFC technique to test the interaction between two proteins in vivo. This is accomplished by splitting a yellow fluorescent protein ...

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

기능화 비스 - 펩타이드의 고상 합성은 방법론 &quot;을 안전 잡아라&quot;사용

In 1962, R.B. Merrifield published the first procedure using solid-phase peptide synthesis as a novel route to efficiently synthesize peptides. This ...

Using High Resolution Computed Tomography to Visualize the Three Dimensional Structure and Function of Plant Vasculature

공장 Vasculature의 3 차원 구조 및 기능을 시각화하기 위해 높은 해상도로 계산 된 단층 촬영을 사용하여

High resolution x-ray computed tomography (HRCT) is a non-destructive diagnostic imaging technique with sub-micron resolution capability that is now being ...

Imaging and 3D Reconstruction of Cerebrovascular Structures in Embryonic Zebrafish

이미징 및 배아 제브라 피쉬의 뇌 혈관 구조의 3 차원 재구성

Zebrafish are a powerful tool to study developmental biology and pathology in vivo.  The small size and relative transparency of zebrafish embryos make ...

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

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세균과 같은 세포로 신생아 마우스 피부 유래 줄기 세포의 분화<em&gt; 체외</em

Studying  germ cell formation and differentiation has traditionally been very difficult  due to low cell numbers and their location deep within developing ...

V3 Stain-free Workflow for a Practical, Convenient, and Reliable Total Protein Loading Control in Western Blotting

서부 블로팅에서 실용적이고 편리하며 신뢰할 수 있는 토탈 단백질 로딩 제어를 위한 V3 얼룩 없는 워크플로우

The western blot is a very useful and widely adopted lab technique, but its execution is challenging. The workflow is often characterized as a &#34;black ...

The Fastest Western in Town: A Contemporary Twist on the Classic Western Blot Analysis

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The Western blot techniques that were originally established in the late 1970s are still actively utilized today. However, this traditional method of ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

문제 해결 전략 현대 양적 형광 웨스턴 블로 팅에 가이드

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