Name: western blotting using the invitrogen nupage novex bis tris minigels
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами от Национального института здоровья и Джорджа Э. Хьюитт фонд стипендий (AP).

Гель-электрофорез Техническое примечание: Перед началом процедуры, ваши образцы белка готов. Во время этого первого шага, белков в образце разделяются в зависимости от их молекулярного веса использованием денатурирующих электрофореза в пол...

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gel+Migration+chart:+.">Gel Migration chart: .</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+western-blot+protocol+from+the+Invitrogen+website.">Complete western-blot protocol from the Invitrogen website.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NuPAGE+technical+guide.">NuPAGE technical guide.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instruction+Manual,+Mini+Trans-Blot+Cell.">Instruction Manual, Mini Trans-Blot Cell.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ECL+Plus+Western+blotting+detection+reagents+instruction.">ECL Plus Western blotting detection reagents instruction.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+protein+molecular+weights+by+SDS+gel+electrophoresis,+GE+Healthcare+Website.">Estimation of protein molecular weights by SDS gel electrophoresis, GE Healthcare Website.</a> , .</li><li>Yeromin, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+the+CRAC+channel+by+altered+ion+selectivity+in+a+mutant+of+Orai.">Molecular identification of the CRAC channel by altered ion selectivity in a mutant of Orai.</a> Nature. 443, 226-229 (2006).</li><li>Zhang, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Store-dependent+and+-independent+modes+regulating+CRAC+channel+activity+of+human+Orai1+and+Orai3.">Store-dependent and -independent modes regulating CRAC channel activity of human Orai1 and Orai3.</a> J. Biol. Chem. 283, 17662-17671 (2008).</li><li>Penna, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CRAC+channel+consists+of+a+tetramer+formed+by+Stim-induced+dimerization+of+Orai+dimers.">The CRAC channel consists of a tetramer formed by Stim-induced dimerization of Orai dimers.</a> Nature. , .</li></ol>

Процедуры, представленные здесь использует Bis-Tris гель с МЧС работает буфер в качестве примера денатурирующих странице с помощью Invitrogen NuPAGE Novex электрофореза системы. Кроме того, эта сборных гель система позволяет разделения белков в денатурирующих или без денатурирующих условиях, а также вмещает ?...

western blotting using the invitrogen nupage novex bis tris minigels

Вестерн-блоттинг (или иммуноблоттинга) является стандартной процедурой лаборатории позволяет исследователям проверить выражение белка, определяют относительное количество белков, присутствующих в различных образцов, а также анализировать результаты совместной иммунопреципитации экспериментов. В этом методе, белка-мишени обнаруживается с конкретными первичных антител в данном образце гомогената ткани или экстракта. Разделения белков по молекулярной массе достигается с помощью денатурирующих SDS-PAGE. После увольнения в мембране, белка-мишени будет тестироваться с конкретными первичного антитела и обнаружить хемилюминесценции. С момента первого описания, западных промокательной техника претерпела ряд усовершенствований, в том числе сборных гели и удобным оборудованием. В нашей лаборатории мы решили использовать коммерчески доступные системы NuPAGE электрофорез с Invitrogen. Это инновационный нейтральный рН, разрывные SDS-PAGE, сборные мини-гелевой системы. Эта система представляет несколько преимуществ по сравнению с традиционной техникой Laemmli в том числе: я) дольше срок хранения сборных гели от 8 месяцев до 1 года; II) широкий спектр разделение молекулярным весом от 1 до 400 кДа в зависимости от типа геля используются; и в) большую универсальность (диапазон акриламида процентах, тип геля, и ионного состава работает буфера). Процедуре, описанной в этой статье использует видео Bis-Tris разрывных буферной системы с 4-12% Bis-Tris градиент гели и МЧС работает буфер, в качестве иллюстрации того, как выполнять Вестерн-блот использованием электрофореза Invitrogen NuPAGE системы. В нашей лаборатории, мы получили хорошие и воспроизводимые результаты для различных биохимических приложений, использующих эту западных промокательной метод.

Watch this Scientific Journal Video about Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels at JoVE.com

Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels

Эта техническая статья описывает стандартные западных промокательной процедуры с использованием коммерчески доступных NuPAGE электрофореза Mini-гель системы от Invitrogen.

Вестерн-блоттинг Использование Invitrogen NuPage Novex бис Трис MiniGels

Western Blotting (or immunoblotting) is a standard laboratory procedure allowing investigators to verify the expression of a protein, determine the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Surgical Induction of Endolymphatic Hydrops by Obliteration of the Endolymphatic Duct

Хирургическое Индукция эндолимфатического водянка по уничтожению эндолимфатического Канальные

Surgical induction of endolymphatic hydrops (ELH) in the guinea pig by obliteration and obstruction of the endolymphatic duct is a well-accepted animal ...

Western Blotting: Sample Preparation to Detection

Вестерн-блоттинг: Подготовка образцов для обнаружения

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel ...

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) System

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC System

Обнаружение белковых взаимодействий в завод использованием шлюза Совместимость комплементации флуоресценции Бимолекулярные (BiFC) Системные

We have developed a BiFC technique to test the interaction between two proteins in vivo. This is accomplished by splitting a yellow fluorescent protein ...

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

Твердофазный синтез функционализированных Бис-пептида Использование «Безопасность Поймать« Методология

In 1962, R.B. Merrifield published the first procedure using solid-phase peptide synthesis as a novel route to efficiently synthesize peptides. This ...

Using High Resolution Computed Tomography to Visualize the Three Dimensional Structure and Function of Plant Vasculature

Использование компьютерной томографии высокого разрешения для визуализации трехмерной структуры и функции сосудистой завод

High resolution x-ray computed tomography (HRCT) is a non-destructive diagnostic imaging technique with sub-micron resolution capability that is now being ...

Imaging and 3D Reconstruction of Cerebrovascular Structures in Embryonic Zebrafish

Работа с изображениями и 3D Реконструкция Цереброваскулярные структур в эмбриональных данио рерио

Zebrafish are a powerful tool to study developmental biology and pathology in vivo.  The small size and relative transparency of zebrafish embryos make ...

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

Дифференциация новорожденных кожи мышей стволовые клетки в зародышевые-подобных клеток<em&gt; В пробирке</em

Studying  germ cell formation and differentiation has traditionally been very difficult  due to low cell numbers and their location deep within developing ...

V3 Stain-free Workflow for a Practical, Convenient, and Reliable Total Protein Loading Control in Western Blotting

V3 Без пятен рабочий процесс для практического, удобного и надежного тотального контроля загрузки белка в Западном Blotting

The western blot is a very useful and widely adopted lab technique, but its execution is challenging. The workflow is often characterized as a &#34;black ...

The Fastest Western in Town: A Contemporary Twist on the Classic Western Blot Analysis

Самый быстрый Западная в городе: современный поворот на анализ Классический вестерн-блоттинга

The Western blot techniques that were originally established in the late 1970s are still actively utilized today. However, this traditional method of ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

Руководство по современной количественной Люминесцентная Вестерн-блоттинга с устранения неисправностей стратегий

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...