Name: western blotting using the invitrogen nupage novex bis tris minigels
Uploaded: 2007-08-22T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels at JoVE.com

Este trabajo fue apoyado por becas de los Institutos Nacionales de Salud y el gobierno de George E. Hewitt Beca de la Fundación (AP).

Electroforesis en gel Nota técnica: Antes de comenzar el procedimiento, que las muestras de proteínas listo. Durante este primer paso, las proteínas de la muestra se separan según su peso molecular mediante electroforesis en gel desnaturalizante de poliacrilamida (PAGE). El NuPAGE ® tampón de muestra LDS cargado con dodecil sulfato de litio (LDS) mantiene polipéptidos en un estado desnaturalizado una vez que la muestra de proteína s...

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gel+Migration+chart:+.">Gel Migration chart: .</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complete+western-blot+protocol+from+the+Invitrogen+website.">Complete western-blot protocol from the Invitrogen website.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NuPAGE+technical+guide.">NuPAGE technical guide.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instruction+Manual,+Mini+Trans-Blot+Cell.">Instruction Manual, Mini Trans-Blot Cell.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ECL+Plus+Western+blotting+detection+reagents+instruction.">ECL Plus Western blotting detection reagents instruction.</a> , .</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+protein+molecular+weights+by+SDS+gel+electrophoresis,+GE+Healthcare+Website.">Estimation of protein molecular weights by SDS gel electrophoresis, GE Healthcare Website.</a> , .</li><li>Yeromin, A. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+identification+of+the+CRAC+channel+by+altered+ion+selectivity+in+a+mutant+of+Orai.">Molecular identification of the CRAC channel by altered ion selectivity in a mutant of Orai.</a> Nature. 443, 226-229 (2006).</li><li>Zhang, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Store-dependent+and+-independent+modes+regulating+CRAC+channel+activity+of+human+Orai1+and+Orai3.">Store-dependent and -independent modes regulating CRAC channel activity of human Orai1 and Orai3.</a> J. Biol. Chem. 283, 17662-17671 (2008).</li><li>Penna, , et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CRAC+channel+consists+of+a+tetramer+formed+by+Stim-induced+dimerization+of+Orai+dimers.">The CRAC channel consists of a tetramer formed by Stim-induced dimerization of Orai dimers.</a> Nature. , .</li></ol>

El procedimiento que aquí se presenta utiliza un gel de Bis-Tris con MES funcionamiento de amortiguación como un ejemplo de la desnaturalización PAGE utilizando el sistema de electroforesis Invitrogen NuPAGE Novex. Además, este sistema de gel prefabricados permite la separación de proteínas en desnaturalización o no desnaturalización condiciones, así como se adapta a una amplia gama de pesos moleculares (1 a 200 kDa para los geles de Bis-Tris de 36 a 400 kDa para el Tris- geles de acetato). Dependiendo de su experiencia, usted pued...

western blotting using the invitrogen nupage novex bis tris minigels

Western Blot (o inmunotransferencia) es un procedimiento estándar de laboratorio que permite a los investigadores a comprobar la expresión de una proteína, determinar la cantidad relativa de las proteínas presentes en diferentes muestras y analizar los resultados de los experimentos de co-inmunoprecipitación. En este método, una proteína diana se detecta con un anticuerpo primario específico en una determinada muestra de tejido homogeneizado o extracto. Separación de proteínas en función del peso molecular se realiza mediante desnaturalización SDS-PAGE. Después de la transferencia a una membrana, la proteína de interés es determinada con un anticuerpo primario específico y detectado por quimioluminiscencia. Desde su primera descripción, la técnica de western-blot ha sido objeto de varias mejoras, incluyendo pre-cast geles y equipos de fácil uso. En nuestro laboratorio, hemos optado por utilizar el sistema de electroforesis NuPAGE disponibles en el mercado de Invitrogen. Se trata de un pH neutro innovadoras, discontinuo SDS-PAGE, prefabricados de mini-gel del sistema. Este sistema presenta varias ventajas sobre la técnica tradicional de Laemmli, incluyendo: i) una vida útil más larga de los geles prefabricados que van desde 8 meses a 1 año, ii) un rango de separación amplia de pesos moleculares 1 a 400 kDa, dependiendo del tipo de de gel que se utiliza, y iii) una mayor versatilidad (rango de porcentaje de acrilamida, el tipo de gel, y la composición iónica del buffer de ejecución). El procedimiento descrito en este artículo de vídeo utiliza el sistema Bis-Tris discontinua con 4-12% Bis-Tris gradiente de geles y MES funcionamiento de amortiguación, como una ilustración de cómo realizar un western blot, utilizando el sistema de electroforesis NuPAGE Invitrogen. En nuestro laboratorio, hemos obtenido buenos resultados y reproducible para diferentes aplicaciones bioquímicas utilizando este método occidental-Blot.

Watch this Scientific Journal Video about Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels at JoVE.com

Western Blotting Using the Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels

Este artículo técnico describe un estándar occidental-blot procedimiento que utiliza la electroforesis disponibles en el mercado NuPAGE Mini-Gel sistema de Invitrogen.

Western Blot utilizando el Invitrogen NuPage Novex Bis Tris MiniGels

Western Blotting (or immunoblotting) is a standard laboratory procedure allowing investigators to verify the expression of a protein, determine the ...

Research

JoVE Journal

Biology

Surgical Induction of Endolymphatic Hydrops by Obliteration of the Endolymphatic Duct

Inducción quirúrgica de edema endolinfático por la obliteración del conducto endolinfático

Surgical induction of endolymphatic hydrops (ELH) in the guinea pig by obliteration and obstruction of the endolymphatic duct is a well-accepted animal ...

Investigación

Biología

Western Blotting: Sample Preparation to Detection

Western Blot: Preparación de muestras para la detección

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel ...

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) System

Detection of Protein Interactions in Plant using a Gateway Compatible Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC System

Detección de interacciones de proteínas en la planta mediante un Gateway Compatible Complementación fluorescencia bimoleculares (BiFC) del sistema

We have developed a BiFC technique to test the interaction between two proteins in vivo. This is accomplished by splitting a yellow fluorescent protein ...

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

Síntesis en fase sólida de un péptido funcionalizado Bis-El uso de &quot;Cierre de seguridad&quot; Metodología

In 1962, R.B. Merrifield published the first procedure using solid-phase peptide synthesis as a novel route to efficiently synthesize peptides. This ...

Using High Resolution Computed Tomography to Visualize the Three Dimensional Structure and Function of Plant Vasculature

El uso de alta resolución de tomografía computarizada para visualizar la estructura tridimensional y la función de la Planta Vasculatura

High resolution x-ray computed tomography (HRCT) is a non-destructive diagnostic imaging technique with sub-micron resolution capability that is now being ...

Imaging and 3D Reconstruction of Cerebrovascular Structures in Embryonic Zebrafish

Imágenes y Reconstrucción 3D de Estructuras Embrionarias cerebrovasculares en pez cebra

Zebrafish are a powerful tool to study developmental biology and pathology in vivo.  The small size and relative transparency of zebrafish embryos make ...

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

Differentiation of Newborn Mouse Skin Derived Stem Cells into Germ-like Cells In vitro

La diferenciación de ratón recién nacido piel derivados de las células madre en células germinales-como<em&gt; In vitro</em

Studying  germ cell formation and differentiation has traditionally been very difficult  due to low cell numbers and their location deep within developing ...

V3 Stain-free Workflow for a Practical, Convenient, and Reliable Total Protein Loading Control in Western Blotting

Flujo de trabajo sin manchas V3 para un control de carga total de proteínas práctico, conveniente y confiable en Western Blotting

The western blot is a very useful and widely adopted lab technique, but its execution is challenging. The workflow is often characterized as a &#34;black ...

The Fastest Western in Town: A Contemporary Twist on the Classic Western Blot Analysis

El más rápido de Occidente en la ciudad: un toque contemporáneo en el análisis clásico de Western Blot

The Western blot techniques that were originally established in the late 1970s are still actively utilized today. However, this traditional method of ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

Una guía para la moderna cuantitativa fluorescente Western Blot con las estrategias de solución de problemas

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...