Name: studying cell rolling trajectories on asymmetric receptor patterns
Uploaded: 2011-02-13T16:00:00
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Dieses Projekt wurde von der Deshpande Center for Technological Innovation am MIT (RK und JMK) und der NSF CAREER Award 0952493 durch die chemischen und biologischen Separations Programm RK unterstützt. Wir danken dem Institute for Soldier Nanotechnologies (ISN) und der Microsystems Technology Laboratory (MTL) am MIT für die Nutzung ihrer Einrichtungen.

1. HL60 Zellrollen 1.1. Herstellung von gemusterten Substrate. <ol><li> Mit Mikrokontaktdrucken (mCP) 4-7 zu machen abwechselnd selbstorganisierten Monoschichten (SAMs) von PEG-Moleküle auf der gold-beschichtete Glasträger: Fertigen Mikrokontaktdrucken Polydimethylsiloxan (PDMS) Briefmarken, dass der Rezeptor-Muster mit einem Neigungswinkel von α = 10 definiert ° durch eine SU-8 Formverfahren. Reinigen Sie die Goldoberfläche mit Piranha-Lösung (3:1 Mischung von Schwefelsäure...

<ol>
	<li>Karnik, R., Hong, S., Zhang, H., Mei, Y., Anderson, D. G., Karp, J. M., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomechanical+control+of+cell+rolling+in+two+dimensions+through+surface+Patterning+of+receptors.">Nanomechanical control of cell rolling in two dimensions through surface Patterning of receptors.</a> Nano Lett. 8 (4), 1153-1158 (2008).</li><li>Lee, C. H., Bose, S., Van Vliet, K. J., Karp, J. M., Karnik, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+Lateral+Displacement+of+HL60+Cells+Rolling+on+Asymmetric+P-selectin+Patterns.">Examining Lateral Displacement of HL60 Cells Rolling on Asymmetric P-selectin Patterns.</a> Langmuir. 27 (1), 240-249 (2011).</li><li>Norman, K. E., Moore, K. L., McEver, R. P., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+rolling+in-vivo+is+mediated+by+p-selectin+glycoprotein+ligand-1.">Leukocyte rolling in-vivo is mediated by p-selectin glycoprotein ligand-1.</a> Blood. 86 (12), 4417-4421 (1995).</li><li>Bernard, A., Delamarche, E., Schmid, H., Michel, B., Bosshard, H. R., Biebuyck, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Printing+patterns+of+proteins.">Printing patterns of proteins.</a> Langmuir. 14 (9), 2225-2229 (1998).</li><li>James, C. D., Davis, R. C., Kam, L., Craighead, H. G., Isaacson, M., Turner, J. N., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterned+protein+layers+on+solid+substrates+by+thin+stamp+microcontact+printing.">Patterned protein layers on solid substrates by thin stamp microcontact printing.</a> Langmuir. 14 (4), 741-744 (1998).</li><li>Mrksich, M., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+self-assembled+monolayers+to+understand+the+interactions+of+man-made+surfaces+with+proteins+and+cells.">Using self-assembled monolayers to understand the interactions of man-made surfaces with proteins and cells.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 25, 55-78 (1996).</li><li>Tan, J. L., Tien, J., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcontact+printing+of+proteins+on+mixed+self-assembled+monolayers.">Microcontact printing of proteins on mixed self-assembled monolayers.</a> Langmuir. 18 (2), 519-523 (2002).</li><li>Lee, D., King, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcontact+Printing+of+P-Selectin+Increases+the+Rate+of+Neutrophil+Recruitment+Under+Shear+Flow.">Microcontact Printing of P-Selectin Increases the Rate of Neutrophil Recruitment Under Shear Flow.</a> Biotechnology Progress. 24 (5), 1052-1059 .</li><li>Greenberg, A. W., Hammer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+separation+mediated+by+differential+rolling+adhesion.">Cell separation mediated by differential rolling adhesion.</a> Biotechnol. Bioeng. 73 (2), 111-124 (2001).</li><li>Higuchi, A., Tsukamoto, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+separation+of+hepatocytes+and+fibroblasts+through+surface-modified+polyurethane+membranes.">Cell separation of hepatocytes and fibroblasts through surface-modified polyurethane membranes.</a> J. Biomed. Mater. Res. Part A. 71A (3), 470-479 (2004).</li><li>Alexeev, A., Verberg, R., Balazs, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterned+surfaces+segregate+compliant+microcapsules.">Patterned surfaces segregate compliant microcapsules.</a> Langmuir. 23 (3), 983-987 (2007).</li></ol>

Wir haben ein Protokoll beschriebenen Zellrollen Trajektorien auf asymmetrische Rezeptor-gemusterten Oberflächen hergestellt mit Mikrokontaktdrucken 2 zu prüfen. Das optische Mikroskop Bilder von strukturierten Oberfläche zeigt deutliche Kontrast zwischen PEG und P-Selektin Bereichen eingesetzt, um zu bestätigen, ob Stanzen erfolgreich ist. Sharp, geraden Kanten kann beobachtet werden, wenn das Stampfen gut durchgeführt werden. Harte Drücken des Stempels kann Stempel Deformation, die die Präzision der ...

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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Human promyelocytic leukemia cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>CCL-240</td>
<td>HL60 cells</td>
</tr>
<tr>
<td>Gold-coated glass slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EMF</td>
<td>TA134</td>
<td>Gold slides</td>
</tr>
<tr>
<td>(1-Mercaptoundec-11-yl)tetra(ethylene glycol)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>674508</td>
<td>PEG</td>
</tr>
<tr>
<td>Recombinant human P-selectin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&amp;D Systems Inc.</td>
<td>ADP3-050</td>
<td>P-selectin</td>
</tr>
<tr>
<td>Bovine serum albumin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rockland Immunochemicals, Inc.</td>
<td>BSA-50</td>
<td>BSA</td>
</tr>
<tr>
<td>Dulbecco's phosphate buffered saline </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mediatech Inc.</td>
<td>21-030</td>
<td>DPBS</td>
</tr>
<tr>
<td>Sulfuric acid </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>339741</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hydrogen peroxide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>316989</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

studying cell rolling trajectories on asymmetric receptor patterns

Seitliche Verschiebung der Zellen senkrecht zu einer Strömung durch Rollen auf asymmetrische Rezeptor-Muster stellt eine Chance für die Entwicklung neuer Geräte für die Label-Free-Trennung und Analyse von Zellen 1. Solche Geräte können seitliche Verschiebung für Durchlauferhitzer Trennung oder Rezeptor-Muster, die Adhäsion modulieren, um zwischen verschiedenen Zellphänotypen oder Ebenen der Rezeptor-Expression unterscheiden zu verwenden. Das Verständnis der Natur der Zelle rollt Trajektorien auf Rezeptor-gemusterten Substrate notwendig ist für das Engineering der Substrate und Gestaltung von solchen Geräten. Hier zeigen wir ein Protokoll zur Untersuchung von Zell rollenden Bahnen auf asymmetrische Rezeptor Muster, Zellrollen Haftung 2 unterstützen. Klar definierte, um angelegte Muster der P-Selektin-Rezeptoren wurden unter Verwendung Mikrokontaktdrucken auf Gold-beschichtete Folien, die in einer Flusskammer aufgenommen wurden. HL60-Zellen, die PSGL-1-Ligand 3 wurden über ein Feld von gemusterten Linien flossen und visualisiert auf einer invertierten Hellfeld-Mikroskop. Die Zellen gerollt und entlang der schrägen Kanten der Muster verfolgt, was in seitliche Auslenkung 1. Jede Zelle in der Regel für eine bestimmte Strecke entlang der Muster Kanten (definiert als die Kante Tracking Länge) gerollt, losgelöst von der Kante, und wieder an einem nachgeschalteten Muster. Obwohl diese Distanz macht es schwierig, die gesamte Flugbahn einer Zelle vom Eingang bis in die Strömungskammer Ausfahrt track war Partikel-Tracking-Software verwendet werden, um zu analysieren und die Ausbeute der rollenden Bahnen der Zellen während der Zeit, als sie auf einem einzigen Rezeptor bewegten gemusterte Linie. Die Bahnen wurden dann untersucht, um Verteilungen von Zellrollen Geschwindigkeiten und dem Rand Tracking Längen für jede Zelle für verschiedene Muster zu erhalten. Dieses Protokoll ist sinnvoll für die Quantifizierung Zellrollen Trajektorien auf Rezeptor-Muster und über diese Parameter wie Muster Winkel und Schubspannung. Diese Daten werden von Nutzen sein für die Gestaltung von mikrofluidischen Bauteilen für Label-freie Zelle Trennung und Analyse.

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Studying Cell Rolling Trajectories on Asymmetric Receptor Patterns

Wir beschreiben ein Protokoll zu beobachten und zu analysieren Zellrollen Trajektorien auf asymmetrische Rezeptor-gemusterten Substrate. Die resultierenden Daten sind nützlich für das Engineering von Rezeptor-gemusterten Substrate für Label-freie Zelle Trennung und Analyse.

Studieren Zellrollen Trajectories auf Asymmetric Rezeptor Patterns

Lateral displacement of cells orthogonal to a flow stream by rolling on asymmetric receptor patterns presents an opportunity for development of new ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Microfabrication of Nanoporous Gold Patterns for Cell-material Interaction Studies

Microfabrication von Nanoporöse Gold-Patterns für Zell-Material-Interaktion Studies

Nanostructured materials with feature sizes in tens of nanometers have enhanced the performance of several technologies, including fuel cells, biosensors, ...

Forschung

Biotechnik

Systematic Analysis of In Vitro Cell Rolling Using a Multi-well Plate Microfluidic System

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Systematische Analyse von<em&gt; In-vitro-</em&gt; Zellroll Mit einer Multi-Well-Platte mikrofluidischen System

A major challenge for cell-based therapy is the inability to systemically target a large quantity of viable cells with high efficiency to tissues of ...

Cell Patterning on Photolithographically Defined 
Parylene-C: SiO2 Substrates

Cell Patterning on Photolithographically Defined 
Parylene-C: SiO2 Substrates

Musterbildung auf Photolithographische Definierte Parylene-C: SiO<sub&gt; 2</sub&gt; Substrate

Cell patterning platforms support broad research goals, such as construction of predefined in vitro neuronal networks and the exploration of certain ...

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In current protocol, a combinatorial approach has been developed to simplify the design and production of sensing materials for the construction of ...

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Feste Lipidnanopartikel (SLN) für die intrazelluläre Targeting-Anwendungen

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Ein Makrophagen-Reporter-Zell-Assay zur Untersuchung der toll-like Receptor-vermittelten NF-kB/AP-1-Signalisierung auf adsorbierten Proteinschichten auf polymeren Oberflächen

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