Name: studying cell rolling trajectories on asymmetric receptor patterns
Uploaded: 2011-02-13T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Studying Cell Rolling Trajectories on Asymmetric Receptor Patterns at JoVE.com

פרויקט זה מומן על ידי מרכז Deshpande עבור חדשנות טכנולוגית ב-MIT (ר.ק. ו JMK) ואת אות הקריירה NSF 0952493 עד ר.ק. דרך כימי וביולוגי תוכנית הפרדות. אנו מודים המכון ננוטכנולוגיות חייל (ISN) לבין טכנולוגיה Microsystems מעבדה (MTL) ב-MIT עבור שימוש במתקנים שלהם.

1. HL60 תא מתגלגל 1.1. המצאה של Patterned מצעים. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות הדפסה microcontact (μCP) 4-7 לבצע לסירוגין עצמית התאספו monolayers (Sams) של מולקולות PEG על מצופה זהב שקופיות הזכוכית: לפברק הדפסה microcontact polydimethylsil...

<ol>
	<li>Karnik, R., Hong, S., Zhang, H., Mei, Y., Anderson, D. G., Karp, J. M., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomechanical+control+of+cell+rolling+in+two+dimensions+through+surface+Patterning+of+receptors.">Nanomechanical control of cell rolling in two dimensions through surface Patterning of receptors.</a> Nano Lett. 8 (4), 1153-1158 (2008).</li><li>Lee, C. H., Bose, S., Van Vliet, K. J., Karp, J. M., Karnik, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+Lateral+Displacement+of+HL60+Cells+Rolling+on+Asymmetric+P-selectin+Patterns.">Examining Lateral Displacement of HL60 Cells Rolling on Asymmetric P-selectin Patterns.</a> Langmuir. 27 (1), 240-249 (2011).</li><li>Norman, K. E., Moore, K. L., McEver, R. P., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+rolling+in-vivo+is+mediated+by+p-selectin+glycoprotein+ligand-1.">Leukocyte rolling in-vivo is mediated by p-selectin glycoprotein ligand-1.</a> Blood. 86 (12), 4417-4421 (1995).</li><li>Bernard, A., Delamarche, E., Schmid, H., Michel, B., Bosshard, H. R., Biebuyck, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Printing+patterns+of+proteins.">Printing patterns of proteins.</a> Langmuir. 14 (9), 2225-2229 (1998).</li><li>James, C. D., Davis, R. C., Kam, L., Craighead, H. G., Isaacson, M., Turner, J. N., Shain, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterned+protein+layers+on+solid+substrates+by+thin+stamp+microcontact+printing.">Patterned protein layers on solid substrates by thin stamp microcontact printing.</a> Langmuir. 14 (4), 741-744 (1998).</li><li>Mrksich, M., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+self-assembled+monolayers+to+understand+the+interactions+of+man-made+surfaces+with+proteins+and+cells.">Using self-assembled monolayers to understand the interactions of man-made surfaces with proteins and cells.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 25, 55-78 (1996).</li><li>Tan, J. L., Tien, J., Chen, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcontact+printing+of+proteins+on+mixed+self-assembled+monolayers.">Microcontact printing of proteins on mixed self-assembled monolayers.</a> Langmuir. 18 (2), 519-523 (2002).</li><li>Lee, D., King, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcontact+Printing+of+P-Selectin+Increases+the+Rate+of+Neutrophil+Recruitment+Under+Shear+Flow.">Microcontact Printing of P-Selectin Increases the Rate of Neutrophil Recruitment Under Shear Flow.</a> Biotechnology Progress. 24 (5), 1052-1059 .</li><li>Greenberg, A. W., Hammer, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+separation+mediated+by+differential+rolling+adhesion.">Cell separation mediated by differential rolling adhesion.</a> Biotechnol. Bioeng. 73 (2), 111-124 (2001).</li><li>Higuchi, A., Tsukamoto, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+separation+of+hepatocytes+and+fibroblasts+through+surface-modified+polyurethane+membranes.">Cell separation of hepatocytes and fibroblasts through surface-modified polyurethane membranes.</a> J. Biomed. Mater. Res. Part A. 71A (3), 470-479 (2004).</li><li>Alexeev, A., Verberg, R., Balazs, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterned+surfaces+segregate+compliant+microcapsules.">Patterned surfaces segregate compliant microcapsules.</a> Langmuir. 23 (3), 983-987 (2007).</li></ol>

תיארנו פרוטוקול לבחון מסלולים מתגלגל על קולטן תא בדוגמת משטחים סימטריים מפוברק באמצעות הדפסה microcontact 2. התמונות מיקרוסקופ אופטי של פני השטח בדוגמת מראה בניגוד ברור בין PEG ו-P-selectin אזורים ניתן להשתמש כדי לאשר הטבעה מוצלחת. שארפ, ישרות ניתן לראות כאשר ביול מבוצע הי?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Human promyelocytic leukemia cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ATCC</td>
<td>CCL-240</td>
<td>HL60 cells</td>
</tr>
<tr>
<td>Gold-coated glass slides</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>EMF</td>
<td>TA134</td>
<td>Gold slides</td>
</tr>
<tr>
<td>(1-Mercaptoundec-11-yl)tetra(ethylene glycol)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>674508</td>
<td>PEG</td>
</tr>
<tr>
<td>Recombinant human P-selectin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>R&amp;D Systems Inc.</td>
<td>ADP3-050</td>
<td>P-selectin</td>
</tr>
<tr>
<td>Bovine serum albumin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rockland Immunochemicals, Inc.</td>
<td>BSA-50</td>
<td>BSA</td>
</tr>
<tr>
<td>Dulbecco's phosphate buffered saline </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mediatech Inc.</td>
<td>21-030</td>
<td>DPBS</td>
</tr>
<tr>
<td>Sulfuric acid </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>339741</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hydrogen peroxide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>316989</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

studying cell rolling trajectories on asymmetric receptor patterns

תזוזה רוחבית של תאים אורתוגונליים כדי להזרים זרם על ידי גלגול על דפוסי קולטן אסימטרית מהווה הזדמנות לפיתוח של מכשירים חדשים ההפרדה תווית חינם ניתוח של תאים 1. מכשירים כאלה עשויים להשתמש תזוזה לרוחב הפרדה רצוף זרימה, או דפוסי קולטן כי לווסת הידבקות להבחין בין פנוטיפים תאים שונים או רמות של ביטוי הקולטן. הבנת טבעה של מסלולי מתגלגל על ​​קולטן תא בדוגמת מצעים הכרחי ההנדסה של מצעים ועיצוב של מכשירים כאלה. הנה, אנחנו מדגימים פרוטוקול לחקר מסלולי התא מתגלגל על דפוסי קולטן אסימטרית התומכים הידבקות התא מתגלגל 2. מוגדרים היטב, מיקרומטר בקנה מידה דפוסי P-selectin רצפטורים היו מפוברקות באמצעות הדפסה microcontact על מצופה זהב שקופיות שולבו בחדר זרימה. HL60 תאים המבטאים את ליגנד PSGL-1 3 היו זרמו על פני השדה של קווים בדוגמת ו דמיינו על הפוך מיקרוסקופ שדה בהיר. התאים התגלגל מסומנים בשולי נוטה דפוסים, וכתוצאה מכך סטיה לרוחב 1. כל תא התגלגל בדרך כלל במרחק מסוים לאורך שולי התבנית (כהגדרתו אורך מעקב קצה), מנותקת מן הקצה, והעלה שוב לדפוס במורד הזרם. למרות ניתוק זה מקשה לעקוב אחר מסלול שלם של תא מהכניסה ליציאה בחדר זרימה, חלקיק מעקב התוכנה שימשה לנתח התשואה מסלולי גלגול של התאים בתקופה שבה הם נעים על קולטן אחד בדוגמת קו. מסלולי נבדקו ואז לקבל הפצות של גלגול מהירויות התא אורכי קצה מעקב עבור כל תא של דפוסים שונים. פרוטוקול זה שימושי לכימות מסלולים תא מתגלגל על ​​דפוסי הקולטן הקשור אלה פרמטרים הנדסיים כגון זווית דפוס מתח גזירה. נתונים אלה יהיה שימושי עבור העיצוב של התקנים microfluidic להפרדת-תווית חינם התא ניתוח.

Watch this Scientific Journal Video about Studying Cell Rolling Trajectories on Asymmetric Receptor Patterns at JoVE.com

Studying Cell Rolling Trajectories on Asymmetric Receptor Patterns

אנו מתארים פרוטוקול להתבונן ולנתח מסלולי מתגלגל תאים על מצעים בדוגמת אסימטרית הקולטן. את הנתונים המתקבלים שימושיים ההנדסה של הקולטן בדוגמת מצעים להפרדה-תווית חינם התא ניתוח.

מסלולי לימוד Cell רולינג על דפוסי קולטן אסימטרית

Lateral displacement of cells orthogonal to a flow stream by rolling on asymmetric receptor patterns presents an opportunity for development of new ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Microfabrication of Nanoporous Gold Patterns for Cell-material Interaction Studies

Microfabrication של דפוסי זהב Nanoporous לסלולרי מהותי מחקרי אינטראקציה

Nanostructured materials with feature sizes in tens of nanometers have enhanced the performance of several technologies, including fuel cells, biosensors, ...

Systematic Analysis of In Vitro Cell Rolling Using a Multi-well Plate Microfluidic System

Systematic Analysis of In Vitro Cell Rolling Using a Multi-well Plate Microfluidic System

ניתוח שיטתי של<em&gt; במבחנה</em&gt; תא רולינג באמצעות מערכת microfluidic צלחת רב גם

A major challenge for cell-based therapy is the inability to systemically target a large quantity of viable cells with high efficiency to tissues of ...

Cell Patterning on Photolithographically Defined 
Parylene-C: SiO2 Substrates

Cell Patterning on Photolithographically Defined 
Parylene-C: SiO2 Substrates

תא דפוסים על photolithographically מוגדר Parylene-C: SiO<sub&gt; 2</sub&gt; מצעים

Cell patterning platforms support broad research goals, such as construction of predefined in vitro neuronal networks and the exploration of certain ...

Electronic Tongue Generating Continuous Recognition Patterns for Protein Analysis

לשון אלקטרונית יצירת דפוסי הכרה רציפה לניתוח חלבון

In current protocol, a combinatorial approach has been developed to simplify the design and production of sensing materials for the construction of ...

Fluorescence Biomembrane Force Probe: Concurrent Quantitation of Receptor-ligand Kinetics and Binding-induced Intracellular Signaling on a Single Cell

הקרינה Biomembrane חיל Probe: Quantitation במקביל של קינטיקס קולטן ליגנד ומושרה כריכת איתות תאיים בתא בודד

Membrane receptor-ligand interactions mediate many cellular functions. Binding kinetics and downstream signaling triggered by these molecular interactions ...

Solid Lipid Nanoparticles (SLNs) for Intracellular Targeting Applications

Solid Lipid Nanoparticles SLNs for Intracellular Targeting Applications

מוצקים שומנים חלקיקים (SLNs) אפליקציות לתאיות מיקוד

Nanoparticle-based delivery vehicles have shown great promise for intracellular targeting applications, providing a mechanism to specifically alter ...

Studying the Stoichiometry of Epidermal Growth Factor Receptor in Intact Cells using Correlative Microscopy

לומד את ההרכב של עוריות Growth Factor Receptor בתאים השלמים באמצעות מתאם מיקרוסקופית

This protocol describes the labeling of epidermal growth factor receptor (EGFR) on COS7 fibroblast cells, and subsequent correlative fluorescence ...

Human Neural Organoids for Studying Brain Cancer and Neurodegenerative Diseases

ארגונית עצבית אנושית לחקר סרטן המוח ומחלות ניווניות

The lack of relevant in vitro neural models is an important obstacle on medical progress for neuropathologies. Establishment of relevant cellular models ...

A Macrophage Reporter Cell Assay to Examine Toll-Like Receptor-Mediated NF-kB/AP-1 Signaling on Adsorbed Protein Layers on Polymeric Surfaces

תא עיתונאי מקרופאג שיטה לבחון קולטן שיחת כמו-תיווך NF-kB/AP-1 איתות על שכבות חלבון Adsorbed על משטחים פולימריים

The persistent inflammatory host response to an implanted biomaterial, known as the foreign body reaction, is a significant challenge in the development ...

A Human 3D Extracellular Matrix-Adipocyte Culture Model for Studying Matrix-Cell Metabolic Crosstalk

שלושה תלת-ממד של מטריקס-Adipocyte מודל תרבות המודל ללימוד תא מטריקס-מטבולית הסלולר

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of ...