Name: engineering biological-based vascular grafts using a pulsatile bioreactor
Uploaded: 2011-06-14T12:00:00
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Este trabajo está financiado por los Institutos Nacionales de Salud Grant R01 EB-008836 y HL083895 R01 (tanto a LEN). Podríamos agradecer a Daryl Smith, el soplador de vidrio de la Universidad, para la toma de los biorreactores de nuestra investigación.

Autoclave Ensamble y autoclave los tubos del sistema de caudal y componentes bio-reactor (biorreactor sí mismo y la tapa de silicona tapón) como se indica en la Figura 1 y Figura 2. Alimentación por sonda tiene un conector macho en un extremo y un extremo abierto en el otro lado. Tres segmentos de tubo corto se inserta a través de una gorra de silicona para el intercambio de gases. 1. Coser PGA Mesh <ol><li> Corte de malla de 1,1 cm PGA ~ x 8 cm hoja (depende ...

<ol>
	<li>Risau, W., Flamme, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasculogenesis.">Vasculogenesis.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 11, 73-91 (1995).</li><li>Fankhauser, F., Bebie, H., Kwasniewska, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Influcence+of+mechanical+Forices+and+Flow+Mechanisms+on+Vessel+Occlusion.">The Influcence of mechanical Forices and Flow Mechanisms on Vessel Occlusion.</a> Lasers in Surgery and Medicine. 6, 530-532 (1987).</li><li>Niklason, L. E., Gao, J., Abbott, W. M., Hirschi, K. K., Houser, S., Marini, R., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+arteries+grown+in+vitro.">Functional arteries grown in vitro.</a> Science. 284, 489-493 (1999).</li><li>Prabhakar, V., Grinstaff, M. W., Alarcon, J., Knors, C., Solan, A. K., Niklason, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+porcine+arteries:+Effects+of+scaffold+modification.">Engineering porcine arteries: Effects of scaffold modification.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 67A, 303-311 (2003).</li><li>Mitchell, S. L., Niklason, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirements+for+growing+tissue-engineered+vascular+grafts.">Requirements for growing tissue-engineered vascular grafts.</a> Cardiovascular Pathology. 12, 59-64 (2003).</li><li>Dahl, S. L. M., Rhim, C., Song, Y. C., Niklason, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+and+compositions+of+tissue+engineered+and+native+arteries.">Mechanical properties and compositions of tissue engineered and native arteries.</a> Annals of Biomedical Engineering. 35, 348-355 (2007).</li><li>Quint, C., Kondo, Y., Manson, R. J., Lawson, J. H., Dardik, A., Niklason, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+tissue-engineered+blood+vessel+as+an+arterial+conduit.">Decellularized tissue-engineered blood vessel as an arterial conduit.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 108, 9214-9219 (2011).</li><li>Niklason, L. E., Yeh, A. T., Calle, E. A., Bai, Y., Valent&#237;n, A., Humphrey, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enabling+Tools+for+Engineering+Collagenous+Tissues+Integrating+Bioreactors,+Intravital+Imaging,+and+Biomechanical+Modeling.">Enabling Tools for Engineering Collagenous Tissues Integrating Bioreactors, Intravital Imaging, and Biomechanical Modeling.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107, 3335-3339 (2010).</li><li>Gong, Z., Calkins, G., Cheng, E. -. c., Krause, D., Niklason, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+Culture+Medium+on+Smooth+Muscle+Cell+Differentiation+from+Human+Bone+Marrow-Derived+Mesenchymal+Stem+Cells.">Influence of Culture Medium on Smooth Muscle Cell Differentiation from Human Bone Marrow-Derived Mesenchymal Stem Cells.</a> Tissue Engineering Part A. 15, 319-330 (2009).</li><li>Gong, Z. D., Niklason, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-diameter+human+vessel+wall+engineered+from+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+(hMSCs.">Small-diameter human vessel wall engineered from bone marrow-derived mesenchymal stem cells (hMSCs.</a> Faseb Journal. 22, 1635-1648 (2008).</li><li>Poh, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessels+engineered+from+human+cells.">Blood vessels engineered from human cells.</a> Lancet. 365, 2122-2124 (2005).</li><li>American Heart Association. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biostatistical fact sheet: cardiovascular procedures. , (2002).</li></ol>

La calidad de los buques de ingeniería es en gran parte dictadas por la calidad de la SMC utilizados en el cultivo de tejidos. Los aspectos críticos del fenotipo contráctil SMC incluyen la morfología, el número de paso bajo, y la capacidad de proliferar en el interior del biorreactor. Se recomienda que el número de pases no será superior a P3 en el momento de la siembra de células en el andamiaje de polímero. Por otra parte, es crucial para confirmar que las fuentes de SMC son libres de micoplasma antes de su u...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre del reactivo / Material </th><th> Proveedor </th><th> Número de catálogo </th></tr><tr><td> FBS (suero fetal bovino) inactivado por calor </td><td> HyClone </td><td> SH30071 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> GIBCO </td><td> 11885 </td></tr><tr><td> rhFGF-básica </td><td> R &amp; B </td><td> 234-FSE </td></tr><tr><td> rrPDGF-BB </td><td> R &amp; B </td><td> 520-BB </td></tr><tr><td> Penicilina G </td><td> Sigma </td><td> PENNA </td></tr><tr><td> De cobre (II) sulfato </td><td> Sigma </td><td> C8027 </td></tr><tr><td> Gylcine </td><td> Sigma </td><td> C8790 </td></tr><tr><td> L-alanina </td><td> Sigma </td><td> A7469-25G </td></tr><tr><td> L-prolina </td><td> Sigma </td><td> P5607-25G </td></tr><tr><td> Ácido Ascórbico </td><td> Sigma </td><td> A4544-25G </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma </td><td> H3375-100G </td></tr><tr><td> Tapón de silicona </td><td> Cole-Parmer </td><td> 06298-24 </td></tr><tr><td> Masterflex tubos L / S </td><td> Cole-Parmer </td><td> 06508-16, 06508-18 </td></tr><tr><td> Masterflex bomba </td><td> Cole-Parmer </td><td> 7553-80 </td></tr><tr><td> Dacron manguito </td><td> Maquet </td><td> 174406 </td></tr><tr><td> PGA se sintió </td><td> Concordia </td><td> MO000877-01 </td></tr><tr><td> 4-0 1.5 métricas Surgipro II sutura </td><td> Syneture </td><td> VP-557-X </td></tr><tr><td> 6-0 0.7 sutura Dexon métricas </td><td> Syneture </td><td> 7538-11 </td></tr><tr><td> 0.22μm PTFE filtros </td><td> Whatman </td><td> 6780-2502 </td></tr><tr><td> Three Way llave de paso </td><td> Edwards Lifesciences </td><td> 593WSC </td></tr><tr><td> Transductor de presión </td><td> Edwards Lifesciences </td><td> PX212 </td></tr><tr><td> IV bolsas </td><td> Baxter </td><td> R4R2110 </td></tr><tr><td> Conjunto de dilución salina </td><td> Flecha </td><td> W20030 </td></tr><tr><td> Tubo de silicona </td><td> Saint-Gobain </td><td> F05027 </td></tr></tbody></table>

engineering biological-based vascular grafts using a pulsatile bioreactor

Mucho esfuerzo se ha dedicado a desarrollar y fomentar la metodología de regeneración funcional de pequeño diámetro arterial pasa por alto. En el medio fisiológico, tanto la estimulación mecánica y química están obligados a mantener el adecuado desarrollo y la funcionalidad de 1,2 vasos arteriales. Sistemas de biorreactor de la cultura desarrollada por nuestro grupo están diseñados para apoyar la regeneración de vasos dentro de un control preciso quimio-mecánica entorno imitando la de los vasos nativos. Nuestra asamblea biorreactor y procedimientos de mantenimiento son bastante simples y altamente repetible 3,4. Las células musculares lisas (SMC) se siembran en un ácido poliglicólico tubular (PGA) de malla que se coloca en un tubo de silicona compatible y cultivadas en el biorreactor con o sin estimulación pulsátil de hasta 12 semanas. Hay cuatro características principales que distinguen a nuestro biorreactor de algunos predecesores. 1) A diferencia de otros sistemas de cultivo que simulan sólo la bioquímica de los vasos sanguíneos circundantes nativo, nuestro biorreactor también crea un ambiente pulsátil fisiológico mediante la aplicación de la tensión radial cíclico de los vasos en la cultura. 2) Varios barcos de ingeniería pueden ser cultivadas simultáneamente bajo diferentes condiciones mecánicas en un entorno químicas controladas. 3) El biorreactor permite una monocapa de células endoteliales (CE) para ser fácilmente cubierta en el lado luminal de los vasos diseñados para los modelos de implantación de los animales. 4) El biorreactor puede recipientes de cultivo diseñado con un tamaño diferente diámetro osciló entre 1 mm y 3 mm, ahorrando el esfuerzo de adaptar cada biorreactor individuales para ajustarse a un tamaño de diámetro específico. Los vasos de ingeniería cultivadas en nuestro biorreactor se asemejan a los vasos nativos sangre histológicamente en algún grado. Las células de la pared de los vasos maduros expresan marcadores de SMC contráctiles del músculo liso, como la cadena pesada de miosina (SMMHC) 3. Una cantidad sustancial de colágeno se deposita dentro de la matriz extracelular, que es responsable de la resistencia a la rotura mecánica de los vasos de ingeniería 5. El análisis bioquímico también indica que el contenido de colágeno de los vasos de ingeniería es comparable a la de las arterias nativas 6. Es importante destacar que el biorreactor pulsátil siempre ha regenerado los vasos que muestran propiedades mecánicas que permiten la implantación de experiencias exitosas en modelos animales 3,7. Además, este biorreactor se pueden modificar para permitir la evaluación en tiempo real y el seguimiento de la remodelación del colágeno a través del tiempo, de forma no invasiva, utilizando un microscopio óptico no lineal (NLOM) 8. Para concluir, este biorreactor debe servir como una plataforma excelente para el estudio de los mecanismos fundamentales que regulan la regeneración funcional de pequeño diámetro injertos vasculares.

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Engineering Biological-Based Vascular Grafts Using a Pulsatile Bioreactor

Nuestro grupo ha desarrollado un sistema de cultivo bio-reactor que imita el estrés pulsátil fisiológicos del sistema cardiovascular para regenerar implantables de pequeño diámetro injertos vasculares.

La ingeniería biológica basada en los injertos vasculares El uso de un biorreactor pulsátil

Much effort has been devoted to develop and advance the methodology to regenerate functional small-diameter arterial bypasses. In the physiological ...

Research

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Bioengineering

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