Name: mapping and application of enhancer-trap flippase expression in larval and adult drosophila cns
Uploaded: 2011-06-03T13:00:00
Duration: 9 min 45 s
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हम ओकलाहोमा के विश्वविद्यालय (BZ के लिए) और एक अनुदान से NSF (IOS 1,025,556, BZ और RAB के लिए) से टीआरएफ, RAB, XP, आओ, MLW, कैस, और इस शोध का समर्थन करने के लिए एक आंतरिक कोष धन्यवाद. एक NIH अनुदान (NS060878 RO1 BZ) RAB आंशिक रूप से समर्थित. RAB एक NIH (T32 NS07292) एनआरएसए प्रशिक्षण अनुदान ब्राण्डैस विश्वविद्यालय के लिए सम्मानित किया गया, और एक NIH अनुदान (RO1 GM21473) ब्राण्डैस में जेफरी हॉल के लिए सम्मानित किया गया, इस अध्ययन के प्रारंभिक अवस्था का समर्थन करने के लिए मानता है. हम इस परियोजना के लिए अपने निरंतर encouragements के लिए जेफरी हॉल धन्यवाद. हम टब पी Gal80&gt;&gt; तनाव के साथ हमें प्रदान करने के लिए डा. क्रिस्टिन स्कॉट धन्यवाद .

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	<li>Bohm, R. A., Welch, W. P., Goodnight, L. K., Cox, L. W., Henry, L. G., Gunter, T. C., Bao, H., Zhang, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genetic+mosaic+approach+for+neural+circuit+mapping+in+Drosophila.">A genetic mosaic approach for neural circuit mapping in Drosophila.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 16378-16383 (2010).</li><li>Brand, A. H., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gene+expression+as+a+means+of+altering+cell+fates+and+generating+dominant+phenotypes.">Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes.</a> Development. 118, 401-415 (1993).</li><li>Bruno, B., Holbro, N., Reichert, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycomb+group+genes+are+required+for+neural+stem+cell+survival+in+postembryonic+neurogenesis+of+Drosophila.">Polycomb group genes are required for neural stem cell survival in postembryonic neurogenesis of Drosophila.</a> Development. 134, 1091-1099 (2007).</li><li>Duffy, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GAL4+system+in+Drosophila:+a+fly+geneticist's+Swiss+army+knife.">GAL4 system in Drosophila: a fly geneticist's Swiss army knife.</a> Genesis. , 34-341 (2002).</li><li>Gordon, M. D., Scott, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+control+in+a+Drosophila+taste+circuit.">Motor control in a Drosophila taste circuit.</a> Neuron. 61, 373-384 (2009).</li><li>Lee, T., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+for+studies+of+gene+function+in+neuronal+morphogenesis.">Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis.</a> Neuron. 22, 451-461 (1999).</li><li>McGuire, S. E., Le, P. T., Osborn, A. J., Matsumoto, K., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporal+rescue+of+memory+dysfunction+in+Drosophila.">Spatiotemporal rescue of memory dysfunction in Drosophila.</a> Science. 302, 1765-1768 (2003).</li><li>Osterwalder, T., Yoon, K. S., White, B. H., Keshishian, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conditional+tissue+specific+transgene+expression+system+using+inducible+GAL4.">A conditional tissue specific transgene expression system using inducible GAL4.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 98, 12596-12601 (2001).</li><li>Pignoni, F., Zipursky, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+Drosophila+eye+development+by+decapentaplegic.">Induction of Drosophila eye development by decapentaplegic.</a> Development. 124, 271-278 (1997).</li><li>Roman, G., Endo, K., Zong, L., Davis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=P[Switch],+a+system+for+spatial+and+temporal+control+of+gene+expression+in+Drosophila+melanogaster.">P[Switch], a system for spatial and temporal control of gene expression in Drosophila melanogaster.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 12602-12607 (2001).</li><li>Xu, T., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+genetic+mosaics+in+developing+and+adult+Drosophila+tissues.">Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues.</a> Development. 117, 1223-1237 (1993).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Gal4/UAS प्रणाली को व्यापक रूप से और सफलतापूर्वक किया गया है विभिन्न जैविक अध्ययन के लिए Drosophilists (; डफी, 2002 ब्रांड और Perrimon, 1993) द्वारा इस्तेमाल किया. तिथि करने के लिए, मक्खी समुदाय प्रमोटर - संचालित और बढ़ाने जाल Gal4 लाइनों के हजारों उत्पन्न किया है. FINGR विधि का एक प्रमुख शक्ति है कि यह Gal4/UAS सिस्टम के साथ संगत है, यह संभव काफी ड्रोसोफिला पढ़ाई में Gal4 की शक्ति का विस्तार कर रही है. एक FINGR विधि के महत्वपूर्ण अनुप्रयोग ठीक धुन तंत्रिका सर्किट Gal4/Gal80 चौराहे के माध्यम से व्यवहार अंतर्निहित है. इन कार्यों में शामिल हैं, लेकिन, सीखने और स्मृति, प्रेमालाप, नींद, और circadian ताल सीमित नहीं कर रहे हैं हो सकता है. FINGR विधि भी महत्वपूर्ण न्यूरॉन्स कि अल्जाइमर जैसे मानव neurodegenerative रोगों, amyotrophic पार्श्व काठिन्य (ए एल एस), और पार्किंसंस रोग मॉडलिंग में neurodegeneration के लिए प्रवण हैं नक्शे के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इसी तरह, न्यूरॉन्स या तंत्रिका सर्किट mediating कोकीन, शराब, और अन्य पदार्थ की लत के लिए महत्वपूर्ण के foci FINGR विधि का उपयोग मैप किया जा सकता है. यह नोट किया जाए कि सशर्त Gal4s (Osterwalder एट अल, 2001.. रोमन एट अल, 2001) FINGR विधि के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है क्रम में करने के लिए तंत्रिका सर्किट और व्यवहार के अस्थायी नियंत्रण हासिल. Gal80 परिवर्तित उपकरणों की एक तापमान के प्रति संवेदनशील Gal80 (टीएस Gal80, McGuire एट अल. 2003) का उपयोग करके संशोधन का उत्पादन कर सकते हैं टब पी&gt; रोक&gt; Gal80 टीएस या टब पी&gt; Gal80 टीएस&gt; सर्किट हेरफेर में आगे लौकिक लचीलापन जोड़ने. तंत्रिका तंत्र के अलावा, FINGR विधि कोशिकाओं के सबसेट में Gal4 अभिव्यक्ति है चाहे वह पंख या पैर की है सीमित करने के लिए समान रूप से लागू होता है. एट - FLPx2 लाइनों सभी ड्रोसोफिला / FRT FLP आधारित clonal (Xu और रुबिन, 1993) विश्लेषण MARCM (ली और लुओ, 1999) सहित, में रुचि रखते हैं जीव के लिए एक मूल्यवान संसाधन हो जाएगा. यह भी उम्मीद है कि कुछ एट FLPx2 लाइनों प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य क्लोनों के उत्पादन के लिए और दोहराया morphological और व्यवहार विश्लेषण के लिए heatshock FLP की जगह हो सकता है. बढ़ाने जाल Gal4 लाइनों की तरह, सबसे एट FLPx2 - लाइनों के लिए विशेष रूप से एक ब्याज की कोशिकाओं में व्यक्त होने की उम्मीद नहीं कर रहे हैं. अधिकांश लाइनों ब्याज की कोशिकाओं में और के रूप में अच्छी तरह से अन्य कोशिकाओं या ऊतकों में FLP व्यक्त करेंगे. हालांकि, दोनों Gal4 और एट - FLPx2 ऊतक विशिष्टता &#39;की कमी FINGR विधि के लिए एक प्रमुख चिंता का विषय के रूप में लंबे समय के रूप में उनके अतिव्यापी क्षेत्र में एक विशेष प्रयोग के लिए वांछनीय है नहीं किया जाएगा. FINGR एक परिष्कृत एक में दो &#39;व्यापक&#39; सिस्टम बारी करने के लिए डिज़ाइन किया गया है. इन प्रोटोकॉल में सचित्र तरीकों के बजाय मानक हैं और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य होना चाहिए. प्रमुख सजग कदम है कि एक ध्यान की आवश्यकता होती है लगानेवाला का चयन उपयोग कर रहे हैं. पीएफए ​​की तुलना में अन्य Fixatives क्योंकि वे GFP संकेत बुझाने के लिए बचा जाना चाहिए. हम यह भी उल्लेख किया है कि विच्छेदन पकवान पीएफए ​​के साथ नियतन के लिए इस्तेमाल नहीं किया संभावना है कि FLP अभिव्यक्ति मज़बूती GFP द्वारा रिपोर्ट नहीं किया जाएगा से बचने चाहिए.

mapping and application of enhancer-trap flippase expression in larval and adult drosophila cns

द्विआधारी / Gal4 यूएएस विधि जीन और ड्रोसोफिला में तंत्रिका circuitry हेरफेर के लिए शक्तिशाली है . सबसे neurobiological पढ़ाई के लिए, तथापि, Gal4 अभिव्यक्ति शायद ही पर्याप्त है ऊतक विशेष व्यवहार readouts के साथ सर्किट के सटीक सहसंबंध के लिए अनुमति. इस बड़ी बाधा को दूर करने के लिए, हम हाल ही में FINGR विधि विकसित करने के लिए ब्याज के ऊतकों में अधिक प्रतिबंधात्मक Gal4 अभिव्यक्ति को प्राप्त करने. 1) पारंपरिक Gal4/UAS प्रणाली;) 2 / FLP FRT की मध्यस्थता Gal80 परिवर्तित उपकरणों का एक सेट है, और 3) बढ़ाने के जाल FLP (ईटी FLP): FINGR विधि तीन घटक होते हैं. Gal4 ब्याज की प्राथमिक तंत्रिका circuitry को परिभाषित करने के लिए प्रयोग किया जाता है. साथ Gal4 नीचे आएगी यूएएस - effector यूएएस MJD78Q या टीएस यूएएस - शि के रूप में है, neuronal गतिविधि है, जो बारी में मक्खी के व्यवहार में परिवर्तन के द्वारा प्रकट है को नियंत्रित करता है. यूएएस GFP, विशिष्ट व्यवहार में शामिल तंत्रिका सर्किट के रूप में एक अतिरिक्त के साथ यूएएस के रिपोर्टर एक साथ morphological विश्लेषण के लिए मैप किया जा सकता है. टब पी&gt;&gt; Gal80 (&#39;बाहर फ्लिप&#39;) और टब P&gt;&gt; Gal80 (&#39;फ्लिप&#39;) बंद करो: व्यापक अभिव्यक्ति के साथ Gal4 लाइनों के लिए, Gal4 अभिव्यक्ति दो पूरक Gal80 परिवर्तित उपकरण का उपयोग करके प्रतिबंधित किया जा सकता है अंत में, जांचकर्ताओं Gal80 मोड़ पर या बंद कर सकते हैं, क्रमशः ऊतक विशेष एट - FLP की मदद के साथ,. फ्लिप मोड में, Gal80 Gal4 अभिव्यक्ति है जहाँ भी एक दूसरे को काटना Gal4 और ईटी - FLP दबाने जाएगा. फ्लिप बाहर मोड में, Gal80 जिसमें Gal4 और FLP ओवरलैप कोशिकाओं में Gal4 दमन से राहत मिल जाएगी. दोनों दृष्टिकोण Gal4 परिभाषित circuitry में कोशिकाओं की संख्या का प्रतिबंध सक्षम है, लेकिन एक व्युत्क्रम पैटर्न में. FINGR विधि मक्खी समुदाय में Gal4 लाइनों और पारंपरिक clonal विश्लेषण के लिए और तंत्रिका सर्किट मानचित्रण के लिए अत्यधिक बहुमुखी के विशाल संग्रह के साथ संगत है. इस प्रोटोकॉल में, हम का चयन करें एट FLPx2 लाइनों और फोटोरिसेप्टर कोशिकाओं में FINGR विधि की प्रभावशीलता में FLP अभिव्यक्ति पैटर्न के मानचित्रण प्रदर्शित करता है. FINGR विधि का सिद्धांत भी अन्य आनुवंशिक मॉडल जीवों में जो का Gal4/UAS, Gal80, और / FLP FRT उपयोग किया जाता है है लागू किया जाना चाहिए.

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Mapping and Application of Enhancer-trap Flippase Expression in Larval and Adult Drosophila CNS

हम एक Flippase प्रेरित intersectional Gal80/Gal4 दमन विधि (FINGR) का वर्णन है, ऊतक विशेष FLP Gal80 अभिव्यक्ति पैटर्न को निर्धारित करने के लिए अनुमति देता है. Gal4 और FLP ओवरलैप, जहाँ भी Gal4 अभिव्यक्ति चालू है (Gal80 बाहर रूप से फ़्लिप) या बंद (Gal80 में रूप से फ़्लिप). FINGR विधि clonal विश्लेषण और तंत्रिका सर्किट मानचित्रण के लिए बहुमुखी है.

मानचित्रण और बढ़ाने जाल Flippase अभिव्यक्ति की लारवल और वयस्क में आवेदन ड्रोसोफिला सीएनएस

The Gal4/ UAS binary method is powerful for gene and neural circuitry manipulation in Drosophila. For most neurobiological studies, however, Gal4 ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Mapping and Application of Enhancer-trap Flippase Expression in Larval and Adult Drosophila CNS

Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

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लक्ष्य निर्धारण घ्राण बल्ब संयुक्त का प्रयोग न्यूरॉन्स Vivo में Electroporation और Gal4 आधार बढ़ाने जाल Zebrafish लाइन्स

In vivo electroporation is a powerful method for delivering DNA expression plasmids, RNAi reagents, and morpholino anti-sense oligonucleotides to specific ...

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Live Imaging of Drosophila Larval Neuroblasts

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के रहते इमेजिंग<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; लारवल neuroblasts

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Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective

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Using Linear Agarose Channels to Study Drosophila Larval Crawling Behavior

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रैखिक Agarose चैनलों का उपयोग कर अध्ययन करने के लिए<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; लारवल रेंगने व्यवहार

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