Name: organotypic culture of full-thickness adult porcine retina
Uploaded: 2011-03-20T11:00:00
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इस काम NIH अनुदान 012031 EY (एट ए), एफएम Kirby फाउंडेशन (एट ए), अनुसंधान से एक पुरस्कार दृष्टिहीनता, (MAZ) इंक, न्यू जर्सी लायंस नेत्र अनुसंधान फाउंडेशन (MAZ) को रोकने के द्वारा समर्थित किया गया था, न्यू जर्सी (MAZ), यूसुफ जे और गुलबहार DiSepio रेटिना रिसर्च फंड (MAZ), जेनिस और मिशेल वासर और एश्बी मिशेल फैलोशिप (AMK) के नेत्र संस्थान.

1. सेल संस्कृति आवेषण के लिए एक कस्टम स्टैंड बनाना एक 5 मिलीलीटर विंदुक टिप (आईएससी BioExpress, पी 3250 के-19 #) के आधार पर 13 मिमी है, जो पूरी तरह से एक 10 मिमी के नीचे (12.6 मिमी, बाहरी व्यास) आकार (भीतरी व्यास) NUNC सेल म...

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	<li>Johnson, T. V., Martin, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+and+characterization+of+an+adult+retinal+explant+organotypic+tissue+culture+system+as+an+in+vitro+intraocular+stem+cell+transplantation+model.">Development and characterization of an adult retinal explant organotypic tissue culture system as an in vitro intraocular stem cell transplantation model.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 49, 3503-3512 (2008).</li><li>Kretz, A., Marticke, J. K., Happold, C. J., Schmeer, C., Isenmann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+primary+culture+technique+of+adult+retina+for+regeneration+studies+on+adult+CNS+neurons.">A primary culture technique of adult retina for regeneration studies on adult CNS neurons.</a> Nat Protoc. 2, 131-140 (2007).</li><li>Donovan, S. L., Dyer, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+square+wave+electroporation+of+retinal+explant+cultures.">Preparation and square wave electroporation of retinal explant cultures.</a> Nat Protoc. 1, 2710-2718 (2006).</li><li>Koizumi, A., Zeck, G., Ben, Y., Masland, R. H., Jakobs, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+culture+of+physiologically+functional+adult+mammalian+retinas.">Organotypic culture of physiologically functional adult mammalian retinas.</a> PLoS One. 2, e221-e221 (2007).</li><li>Lye, M. H., Jakobs, T. C., Masland, R. H., Koizumi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+culture+of+adult+rabbit+retina.">Organotypic culture of adult rabbit retina.</a> J Vis Exp. , (2007).</li><li>Ames, A., Li, Y. Y., Heher, E. C., Kimble, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy+metabolism+of+rabbit+retina+as+related+to+function:+high+cost+of+Na++transport.">Energy metabolism of rabbit retina as related to function: high cost of Na+ transport.</a> J Neurosci. 12, 840-853 (1992).</li><li>Kobuch, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+adult+porcine+retina+and+retinal+pigment+epithelium+in+perfusion+culture:+characterisation+of+an+organotypic+in+vitro+model.">Maintenance of adult porcine retina and retinal pigment epithelium in perfusion culture: characterisation of an organotypic in vitro model.</a> Exp Eye Res. 86, 661-668 (2008).</li><li>Kaempf, S., Walter, P., Salz, A. K., Thumann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+organotypic+culture+model+of+adult+mammalian+neurosensory+retina+in+co-culture+with+retinal+pigment+epithelium.">Novel organotypic culture model of adult mammalian neurosensory retina in co-culture with retinal pigment epithelium.</a> J Neurosci Methods. 173, 47-58 (2008).</li><li>Guduric-Fuchs, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+study+of+pig+retinal+development.">Immunohistochemical study of pig retinal development.</a> Mol Vis. 15, 1915-1928 (2009).</li><li>Chandler, M. J., Smith, P. J., Samuelson, D. A., MacKay, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoreceptor+density+of+the+domestic+pig+retina.">Photoreceptor density of the domestic pig retina.</a> Vet Ophthalmol. 2, 179-184 (1999).</li></ol>

विजन शोधकर्ताओं रेटिना संस्कृति प्रणालियों की एक किस्म की स्थापना की है organotypic प्रणाली, रेटिना स्टेम सेल प्रत्यारोपण 1, रेटिना 2 उत्थान, और exogenous जीन अभिव्यक्ति 3-5 जैसे मुद्दों की एक किस्म का अध?...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक के नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियाँ </td></tr><tr><td> सदस्य </td><td> Invitrogen - Gibco </td><td> 10370-021 </td><td></td></tr><tr><td> 5 एमएल विंदुक टिप </td><td> आईएससी BioExpress </td><td> 19-P-3250 के </td><td></td></tr><tr><td> NUNC सेल संस्कृति डालने </td><td> थर्मल </td><td> 137443 </td><td> 8μm, Polycarbonate </td></tr><tr><td> वाटमान 4M फ़िल्टर कागज </td><td> वाटमान </td><td> 1004 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Cellgro - mediatech इंक </td><td> 10-013-CV </td><td></td></tr><tr><td> अग्रवाल </td><td> Fluka </td><td> 05040 </td><td></td></tr><tr><td> Fungizone Amphotericin बी </td><td> Invitrogen - Gibco </td><td> 15290018 </td><td></td></tr><tr><td> Trephine ब्लेड </td><td> Bausch और Lomb </td><td> T3096 </td><td> 6.00mm </td></tr><tr><td> अक्टूबर यौगिक </td><td> इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी विज्ञान </td><td> 62550-01 </td><td> 4583 </td></tr><tr><td></td><td> विज्ञान </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cryostat </td><td> Leica </td><td> CM1900 </td><td></td></tr><tr><td> Vibratome </td><td> Leica </td><td> श्रृंखला 1000 </td><td></td></tr><tr><td> Confocal माइक्रोस्कोपी; </td><td> कार्ल Zeiss </td><td> LSM510 </td><td></td></tr><tr><td> विरोधी Synaptic पुटिका 2 प्रोटीन (SV2) माउस मोनोक्लोनल एंटीबॉडी </td><td> DSHB </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> विरोधी Glial Fibrillary अम्लीय (GFAP) प्रोटीन पॉलीक्लोनल खरगोश एंटीबॉडी </td><td> DAKO </td><td> DAKO </td><td></td></tr><tr><td> Propidium आयोडाइड (पीआई) </td><td> सिग्मा </td><td> P4170 </td><td></td></tr></tbody></table>

organotypic culture of full-thickness adult porcine retina

इन विट्रो मॉडल में एक मान्यता प्राप्त के लिए मांग है कि जगह या पशु प्रयोगों को कम कर सकते हैं. सुअर रेटिना एक समान मानव रेटिना neuronal संरचना है और इसलिए मानव रेटिना चोट और अपक्षयी रोग के तंत्र के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण प्रजाति है. यहाँ हम वयस्क सुअर का एक बूचड़खाने से प्राप्त आँखों से अलग रेटिना के organotypic संस्कृति के लिए एक लागत प्रभावी तकनीक का वर्णन. पूर्वकाल खंड को हटाने के बाद, एक trephine ब्लेड कई तंत्रिका रेटिना Bruch है वयस्क सुअर आँखों के पीछे खंड से झिल्ली RPE रंजित - श्वेतपटल explants बनाने के लिए इस्तेमाल किया गया था. बाँझ फिल्टर पेपर के एक टुकड़े प्रत्येक explant से तंत्रिका रेटिना से लिफ्ट करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. फिल्टर कागज रेटिना जटिल (फोटोरिसेप्टर ऊपर की ओर) एक सम्मिलित करते हैं, जो संस्कृति डिश के नीचे से दूर कस्टम बनाया एक स्टैंड द्वारा आयोजित किया गया था के ऊपर संवर्धित किया गया था. खड़े रेटिना के दोनों पक्षों के लिए संस्कृति के माध्यम से अच्छी परिसंचरण के लिए अनुमति देता है. कुल मिलाकर, यह प्रक्रिया सरल, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है, और कम से कम सात दिन के लिए देशी रेटिना संरचना के संरक्षण परमिट, यह स्तनधारी रेटिना पर morphological, औषधीय, और जैव रासायनिक अध्ययन के एक किस्म के लिए एक उपयोगी मॉडल बनाने.

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Organotypic Culture of Full-thickness Adult Porcine Retina

यहाँ हम सात दिनों के लिए एक लागत प्रभावी वयस्क सुअर का रेटिना के organotypic संस्कृति के लिए तकनीक का वर्णन. संक्षेप में, एक बाँझ फिल्टर पेपर RPE और एक कस्टम बनाया एक स्टैंड द्वारा उठाए गए डालने पर जगह फोटोरिसेप्टर ऊपर की ओर से तंत्रिका रेटिना लिफ्ट बंद करने के लिए इस्तेमाल किया गया था.

पूर्ण मोटाई वयस्क सुअर रेटिना के Organotypic संस्कृति

There is a recognized demand for in vitro models that can replace or reduce animal experiments. Porcine retina has a similar neuronal structure to human ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Organotypic Hippocampal Slice Culture Model for Examining Neuronal Injury

Neuronal चोट की जांच करने के लिए Organotypic hippocampal स्लाइस संस्कृति मॉडल

Organotypic hippocampal slice culture is an in vitro method to examine mechanisms of neuronal injury in which the basic architecture and composition of ...

Organotypic Slice Culture of GFP-expressing Mouse Embryos for Real-time Imaging of Peripheral Nerve Outgrowth

Organotypic स्लाइस संस्कृति GFP परिधीय तंत्रिका परिणाम की वास्तविक समय इमेजिंग के लिए माउस भ्रूण व्यक्त

For many purposes, the cultivation of mouse embryos ex vivo as organotypic slices is desirable. For example, we employ a transgenic mouse line (tauGFP) in ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

विकास माउस रेटिना के vivo electroporation में

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

अलगाव और वयस्क तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं की संस्कृति माउस Subcallosal जोन से

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Preparation of Horizontal Slices of Adult Mouse Retina for Electrophysiological Studies

Electrophysiological अध्ययन के लिए वयस्क माउस रेटिना की क्षैतिज स्लाइस की तैयारी

Vertical slice preparations are well established to study circuitry and signal transmission in the adult mammalian retina. The plane of sectioning in ...

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

Time-lapse Confocal Imaging of Migrating Neurons in Organotypic Slice Culture of Embryonic Mouse Brain Using In Utero Electroporation

समयबद्धता संगठनात्मक स्लाइस में प्रवासित न्यूरॉन्स के कन्फोकल इमेजिंग भ्रूण माउस मस्तिष्क का प्रयोग करना<em&gt; यूटरो में</em&gt; विद्युतचरण

In utero electroporation is a rapid and powerful approach to study the process of radial migration in the cerebral cortex of developing mouse embryos. It ...

Simple Generation of a High Yield Culture of Induced Neurons from Human Adult Skin Fibroblasts

मानव वयस्क त्वचा Fibroblasts से प्रेरित ंयूरॉंस की एक उच्च उपज संस्कृति के सरल पीढ़ी

Induced neurons (iNs), the product of somatic cells directly converted to neurons, are a way to obtain patient-derived neurons from tissue that is easily ...

Isolation and Culture of Primary Neurons and Glia from Adult Rat Urinary Bladder

वयस्क चूहा मूत्राशय से प्राथमिक न्यूरॉन्स और ग्लिया की अलगाव और संस्कृति

The lower urinary tract has two main functions, namely, periodic urine storage and micturition; these functions are mediated through central and ...

Culture of Neurospheres Derived from the Neurogenic Niches in Adult Prairie Voles

वयस्क प्रेयरी वोल्स में न्यूरोजेनिक निकस से प्राप्त न्यूरोस्फीयर की संस्कृति

Neurospheres are primary cell aggregates that comprise neural stem cells and progenitor cells. These 3D structures are an excellent tool to determine the ...

Single-Cell Electroporation across Different Organotypic Slice Culture of Mouse Hippocampal Excitatory and Class-Specific Inhibitory Neurons

माउस हिप्पोकैम्पल उत्तेजक और कक्षा-विशिष्ट निरोधात्मक न्यूरॉन्स की विभिन्न ऑर्गैग्निक स्लाइस संस्कृति में एकल-सेल इलेक्ट्रोपशन

Electroporation has established itself as a critical method for transferring specific genes into cells to understand their function. Here, we describe a ...