इस काम के दिग्गजों मामलों और NIH 5U01HL100398 और 1R01HL104040 अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.

1. भ्रूण शारीरिक (EB) 96 दौर नीचे अच्छी तरह से microtiter प्लेट का उपयोग का गठन <ol><li> माउस ES कोशिकाओं माउस ES सेल मध्यम LIF के साथ पूरक के साथ 10cm सेल संस्कृति प्लेटों में आगे बढ़ें. </li><li> जब ES कोशिकाओं उपयोग करने के लिए तैयार (आम तौर पर 50-70% संगम पर) कर रहे हैं, ES मीडिया को हटाने और कोशिकाओं 5ml बाँझ पीबीएस के साथ एक बार कुल्ला. </li><li> प्रत्येक थाली और 37 पर सेते प्लेटें ° सी 3 ~ 5 मिनट के लिए 2ml 0.05% / trypsin EDTA जोड़ें, 3 मिलीलीटर ES मीडिया के साथ trypsin EDTA बुझाने. </li><li> 50ml बाज़ ट्यूबों और स्पिन करने के लिए 3 मिनट के लिए 1000 rpm पर कोशिकाओं स्थानांतरण. </li><li> सतह पर तैरनेवाला निकालें, और resuspend सेल गोली EB मीडिया के वांछित राशि के साथ. </li><li> सेल संख्या की गणना और 5 x10 3 EB मीडिया में कोशिकाओं / मिलीलीटर कोशिकाओं पतला. </li><li> Multichannel विंदुक प्रयोग EB मीडिया के 100μl जोड़ने के 96 में से प्रत्येक में अच्छी तरह से कोशिकाओं को शामिल करने वाले दौर में अच्छी तरह से microtiter प्लेटें. </li><li> प्लेस 96 - दौर एक इनक्यूबेटर में अच्छी तरह से microtiter प्लेटें. </li></ol> 2. कुंजी संकेतन मार्ग (ओं) की महत्वपूर्ण समय खिड़कियों के cardiogenesis लिए पहचान <ol><li> 96 प्रत्येक में 96 अच्छी तरह microtiter 0 दिन, 1 दिन, 2 दिन, 3 दिन और 4 दिन, आदि के कुओं की त्रैमासिक जैसे विभिन्न समय बिंदुओं पर ES कोशिकाओं से युक्त प्लेटों के प्रत्येक अच्छी तरह से में विशिष्ट संकेत दे रास्ते और वाहन नियंत्रण के modulators जोड़ें अच्छी तरह से थाली (48 कुओं) प्रत्येक शुरू उपचार के समय बिंदु के लिए उपयोग किया जाता है. </li><li> अलग रोक समय अंक पर हर 48 कुओं के लिए EB मीडिया बदलकर modulators धो लें. उदाहरण के लिए, ES 0 दिन से शुरू कोशिकाओं के लिए दो दिन के उपचार मिल, 2 दिन में बाहर modulators धोने. किसी भी अब इलाज के लिए 48 घंटे से EB ताजा modulators के साथ हर दो दिन में पूरक वांछित रोकने के लिए समय अंक जब तक मीडिया में परिवर्तन. </li><li> 7 दिन के बाद एक खुर्दबीन के नीचे EB संकुचन जांच करते हैं. ईबीएस करार सकारात्मक लोगों के रूप में प्रत्येक अलग उपचार समय पाठ्यक्रमों के लिए ईबीएस करार के प्रतिशत प्राप्त करने के साथ कुओं कुल. </li><li> ES cardiogenesis के लिए महत्वपूर्ण समय अंक समय फ्रेम में जो निहित करार ईबीएस संकेत modulators के द्वारा इलाज किया जब वाहन पर नियंत्रण की तुलना में उच्चतम प्रतिशत हैं. </li></ol> 3. ईबीएस में cardiogenesis के लिए संकेत के समय खिड़कियों के सत्यापन फांसी बूंदों से बना <ol><li> पीबीएस के 3-4 मिलीलीटर के साथ जोड़ने के लिए वाष्पीकरण रोकने के द्वारा पेट्री डिश तैयार है. </li><li> चरणों 1.1 ~ 1.5 2.5x10 4 कोशिकाओं / एमएल अंतिम सेल घनत्व में ES कोशिकाओं को तैयार का पालन करें. </li><li> आसान पहुँच के लिए जीवाणु डिश में सेल मिश्रण डालो. Multichannel विंदुक का प्रयोग, उल्टे lids पर 20 μl बूँदें (के बारे में 500 कोशिकाओं से युक्त) को जोड़ने. व्यक्तिगत बूंदों को स्पर्श करने की अनुमति नहीं है. आम तौर पर एक ढक्कन के ऊपर 80 बूँदें के लिए फिट कर सकते हैं. पीबीएस युक्त पकवान अधिक ढक्कन वापस पलटें. 24 घंटे या 48 घंटे के लिए सेते एक इनक्यूबेटर में EB गठन की अनुमति है. </li><li> नीचे प्रत्येक ढक्कन से EB मीडिया और एक नया पेट्री डिश 2 ईबीएस के lids के पूल के 3 मिलीलीटर के साथ फांसी बूंदों से गठन EB धो लें. 10ml के एक कुल मात्रा EB मीडिया जोड़ें. </li><li> स्थानांतरण ईबीएस में 0.2% जिलेटिन 4 दिन में लेपित प्लेटें 6 अच्छी तरह पर निलंबन. सामान्य में 30 ईबीएस प्रत्येक अच्छी तरह से स्थानांतरित कर रहे हैं. EB मीडिया जोड़ें 2 मिलीलीटर प्रत्येक के लिए अच्छी तरह अंतिम मात्रा. </li><li> 96 अच्छी तरह से थाली प्रयोगों से पहचान की समय अवधि में modulators संकेत सेते हैं. </li><li> निरीक्षण के बाद सात दिन और cardiogenesis खुर्दबीन के नीचे EB संकुचन आगे RT-पीसीआर immunostaining, और दूसरों को, यदि आवश्यक हो, द्वारा विशेषता हो सकता है. </li></ol>

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	<li>Fukuda, K., Yuasa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+as+a+source+of+regenerative+cardiomyocytes.">Stem cells as a source of regenerative cardiomyocytes.</a> Circulation research. 98, 1002-1013 (2006).</li><li>Foley, A. C., Mercola, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+induction+by+Wnt+antagonists+depends+on+the+homeodomain+transcription+factor+Hex.">Heart induction by Wnt antagonists depends on the homeodomain transcription factor Hex.</a> Genes Dev. 19, 387-396 (2005).</li><li>Naito, A. T., Shiojima, I., Akazawa, H., Hidaka, K., Morisaki, T., Kikuchi, A., Komuro, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+stage-specific+biphasic+roles+of+Wnt/beta-catenin+signaling+in+cardiomyogenesis+and+hematopoiesis.">Developmental stage-specific biphasic roles of Wnt/beta-catenin signaling in cardiomyogenesis and hematopoiesis.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 19812-19817 (2006).</li><li>Hao, J., Daleo, M. A., Murphy, C. K., Yu, P. B., Ho, J. N., Hu, J., Peterson, R. T., Hatzopoulos, A. K., Hong, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dorsomorphin,+a+selective+small+molecule+inhibitor+of+BMP+signaling,+promotes+cardiomyogenesis+in+embryonic+stem+cells.">Dorsomorphin, a selective small molecule inhibitor of BMP signaling, promotes cardiomyogenesis in embryonic stem cells.</a> PloS one. 3, e2904-e2904 (2008).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

फांसी ड्रॉप विधि पारंपरिक EB गठन के लिए और इन विट्रो भेदभाव में विधि का इस्तेमाल किया गया है. हालांकि, यह श्रमसाध्य है और प्रयोगात्मक लचीलापन सैन्य चिंताओं के कारण सीमा है. द्वारा एक ही टोकन, परिणाम भी अधिक मान्य करने के लिए मुश्किल experimenter के कौशल के रूप में सफल EB गठन और फांसी बूंदों के रूप में हेरफेर करने के लिए महत्वपूर्ण है. एक सरल विधि के एक दौर तली एक एकल कदम प्रक्रिया के रूप में 96 अच्छी तरह से थाली में ईबीएस फार्म है. इस स्वरूप इन विट्रो भेदभाव में अनुमति देता है के लिए मानकीकृत हो और अधिक प्रयोगात्मक EB गठन और बहाव हेरफेर (जैसे न्यूनाधिक इसके अलावा या हटाने) की आसानी के कारण स्थिति को समायोजित कर सकते हैं. इसके अलावा, 96 अच्छी तरह से थाली स्वरूप माउस ES कोशिकाओं में एक कुशल स्क्रीनिंग उपकरण किया जा करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है.

<ul><li> माउस CGR8 कोशिकाओं को मुख्य रूप से उपयोग किया जाता है. </li><li> ES मध्यम: 10% गर्मी निष्क्रिय FBS के साथ पूरक GMEM मीडिया, 2 एल glutamine मिमी, .05 2 mercaptoethanol मिमी और 200 / यू मिलीलीटर murine LIF. </li><li> EB मध्यम: 20% गर्मी निष्क्रिय FBS IMDM मीडिया के साथ तैयार करने के लिए, 1.6 मिमी एल glutamine, 0.08 2 mercaptoethanol मिमी, और 1X सदस्य गैर आवश्यक अमीनो एसिड समाधान. </li></ul>

modified mouse embryonic stem cell based assay for quantifying  cardiogenic induction efficiency

Pluripotent स्टेम कोशिकाओं के भेदभाव कस एकाधिक कुंजी संकेत रास्ते के अस्थायी और स्थानिक विनियमन द्वारा नियंत्रित किया जाता है. अपनी समझ के लिए एक बाधा दौड़ के भेदभाव दक्षता की कुंजी संकेत घटनाओं के परिवर्तन correlating में विभिन्न तरीकों किया गया है. हम यहाँ एक माउस भ्रूण स्टेम (ते) सेल आधारित परख का उपयोग करने के लिए Wnt / बीटा catenin और बीएमपी हृदयजनित अधिष्ठापन के दौरान संकेत सक्रियण के लिए महत्वपूर्ण समय खिड़कियों की पहचान का वर्णन. एक 96 अच्छी तरह से थाली प्रारूप में भ्रूण निकायों (ईबीएस) करार के लिए स्कोरिंग, हम जल्दी से हृदयजनित दक्षता यों और Wnt / बीटा catenin और बीएमपी विशिष्ट न्यूनाधिक उपचार के बाद एक बार पाठ्यक्रम में संकेत सक्रियण के लिए महत्वपूर्ण समय खिड़कियों की पहचान कर सकते हैं. प्रिंसिपल यहाँ उल्लिखित हृदय प्रेरण अकेले नहीं सीमित है, और कई अन्य सेल प्रजातियों के अध्ययन की दिशा में लागू किया जा सकता है. इसके अलावा, 96 अच्छी तरह प्रारूप के आगे एक उच्च throughput, स्वचालित परख करने के लिए अधिक परिष्कृत प्रयोगात्मक परिकल्पना के परीक्षण के लिए अनुमति के रूप में विकसित किया जा क्षमता है.

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Modified Mouse Embryonic Stem Cell based Assay for Quantifying  Cardiogenic Induction Efficiency

हम एक माउस ES सेल आधारित परख का उपयोग करने के लिए Wnt / बीटा catenin और बीएमपी हृदयजनित अधिष्ठापन के दौरान संकेत सक्रियण के लिए महत्वपूर्ण समय खिड़कियों की पहचान का वर्णन. विधि एक मानकीकृत मंच है कि मज़बूती से हृदयजनित दक्षता quantifies प्रदान करता है, और अन्य सेल प्रजातियों के अध्ययन के लिए लागू होता है.

संशोधित हृदयजनित प्रेरण क्षमता बढ़ाता के लिए माउस भ्रूणीय स्टेम सेल आधारित परख

Differentiation of pluripotent stem cells is tightly controlled by temporal and spatial regulation of multiple key signaling pathways.  One of the hurdles ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Murine भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से hematopoietic स्टेम सेल की व्युत्पत्ति

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के Immunosurgery द्वारा व्युत्पत्ति

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Interview: Bioreactors and Surfaced-Modified 3D-Scaffolds for Stem Cell Research

साक्षात्कार: स्टेम सेल अनुसंधान के लिए और बायोरिएक्टर सामने - संशोधित 3 डी scaffolds

A Nature Editorial in 2003 asked the question  "Good-bye, flat biology?"  What does this question imply? In the past, many in vitro culture systems,  ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

अलगाव और माउस भ्रूणीय कीटाणु कक्ष की व्युत्पत्ति

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

वीडियो मानव भ्रूण स्टेम सेल कॉलोनी विकास के विश्लेषण बायोइनफॉरमैटिक्स

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के Oligodendrocyte व्यापारियों में भेदभाव

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

लघु अणु प्रेरण के साथ pluripotent मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से मानव कार्डिएक व्यापारियों और cardiomyocytes के कुशल व्युत्पत्ति

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Efficient Differentiation of Mouse Embryonic Stem Cells into Motor Neurons

मोटर न्यूरॉन्स में माउस भ्रूणीय स्टेम कोशिकाओं के कुशल भेदभाव

Direct differentiation of embryonic stem (ES) cells into functional  motor neurons represents a promising resource to study disease mechanisms, to  screen ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

माउस भ्रूण fibroblast कोशिकाओं संवर्धन मानव भ्रूण और प्रेरित pluripotent स्टेम सेल के लिए उपयुक्त की तैयारी

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

Oct4GiP Reporter Assay to Study Genes that Regulate Mouse Embryonic Stem Cell Maintenance and Self-renewal

Oct4GiP रिपोर्टर परख अध्ययन जीन है कि माउस भ्रूणीय स्टेम सेल रखरखाव और स्व - नवीकरण विनियमन

Pluripotency and self-renewal are two defining characteristics of embryonic stem cells (ES cells). Understanding the underlying molecular mechanism will ...