Name: thermodynamics of membrane protein folding measured by fluorescence spectroscopy
Uploaded: 2011-04-28T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Thermodynamics of Membrane Protein Folding Measured by Fluorescence Spectroscopy at JoVE.com

Vi tackar Peking Wu för användning av hennes uppgifter. Detta arbete stöddes av en NSF KARRIÄR pris till jek

1. Beredning av ~ 50 små nm diameter Unilamellar Blåsor (SUV) för Membrane Protein Folding <ol><li> En lösning av 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DMPC) lipider i kloroform köps och aliquotted i rena glasflaskor på 20 mg per injektionsflaska kvantiteter för förvaring. Ett lager av kvävgas tillsätts i varje flaska för att förhindra lipid oxidation, och flaskorna är förseglade med lock och parafilm. Injektionsflaskorna förvarats i en -20 ° C frys fram till användning. </li><li> En i...

<ol>
	<li>Shirley, B. A., Shirley, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Protein Folding and Stability. , 177-190 (1995).</li><li>Pace, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+and+Analysis+of+Urea+and+Guanidine+Hydrochloride+Denaturation+Curves.">Determination and Analysis of Urea and Guanidine Hydrochloride Denaturation Curves.</a> Methods Enzymol. 131, 266-279 (1986).</li><li>Lau, F. W., Bowie, J. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Method+for+Assessing+the+Stability+of+a+Membrane+Protein.">A Method for Assessing the Stability of a Membrane Protein.</a> Biochemistry. 36, 5884-5892 (1997).</li><li>Burgess, N. K., Dao, T. P., Stanley, A. M., Fleming, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-Barrel+Proteins+that+Reside+in+the+Escherichia+coli+Outer+Membrane+in+Vivo+Demonstrate+Varied+Folding+Behavior+in+Vitro.">&#946;-Barrel Proteins that Reside in the Escherichia coli Outer Membrane in Vivo Demonstrate Varied Folding Behavior in Vitro.</a> J. Biol. Chem. 283, 26748-26758 (2008).</li><li>Booth, P. J., Curnow, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Folding+scene+investigation:+membrane+proteins.">Folding scene investigation: membrane proteins.</a> Curr. Opin. Struct. Biol. 19, 8-13 (2009).</li><li>Hong, H., Tamm, L. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+coupling+of+integral+membrane+protein+stability+to+lipid+bilayer+forces.">Elastic coupling of integral membrane protein stability to lipid bilayer forces.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 4065-4070 (2004).</li><li>Sanchez, K. M., Gable, J. E., Schlamadinger, D. E., Kim, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Tryptophan+Microenvironment,+Soluble+Domain,+and+Vesicle+Size+on+the+Thermodynamics+of+Membrane+Protein+Folding:+Lessons+from+the+Transmembrane+Protein+OmpA.">Effects of Tryptophan Microenvironment, Soluble Domain, and Vesicle Size on the Thermodynamics of Membrane Protein Folding: Lessons from the Transmembrane Protein OmpA.</a> Biochemistry. 47, 12844-12852 (2008).</li></ol>

Den nuvarande protokollet beskriver generationen utspelas kurvor av membran-associerade proteiner och peptider som innehåller tryptofan rester. Här är det antas att tryptofan fluorescens reflekterar om proteinet är vikt och infogas i syntetiska lipid blåsor eller ovikta i lösning. Ytterligare antaganden, till exempel två-state-vikning och linjärt beroende av fri energi med denatureringsmedel koncentration, görs i den aktuella rapporten,. Ändring av dessa antaganden resulterar i olika ekvationer 2 De...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DMPC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Avanti Polar Lipids</td>
<td>850345C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Urea</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MP Biochemicals</td>
<td>04821527</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Phosphate Dibasic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>P288</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Potassium Phosphate Monobasic</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>P285</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

thermodynamics of membrane protein folding measured by fluorescence spectroscopy

Membran protein folding är ett framväxande ämne med både grundläggande och hälsorelaterade betydelse. Överflödet av membranproteiner i celler ligger bakom behovet av omfattande studie av vikning av denna allestädes närvarande familj av proteiner. Dessutom har framsteg i vår förmåga att karakterisera sjukdomar som förknippas med felveckade proteiner motiverade betydande experimentella och teoretiska insatser inom området proteinveckning. Snabba framsteg inom detta viktiga område är tyvärr hindras av den inneboende utmaningar som är förknippade med membranproteiner och komplexitet hopfällningsmekanism. Vi presenterar här en experimentell metoder för att mäta termodynamiska egendom Gibbs fria energi utvecklas i frånvaro av denatureringsmedel, Δ g · H 2 O, för ett representativt integrerad membranprotein från E. coli. Detta protokoll är inriktat på tillämpningen av fluorescens spektroskopi för att bestämma balansen populationer av vikt och ovikt stater som funktion av denatureringsmedel koncentration. Experimentella överväganden för beredning av syntetiska lipid blåsor samt viktiga steg i dataanalysen förfarandet är markerade. Denna teknik är mångsidig och kan bedrivas med olika typer av denatureringsmedel, bland annat temperatur och pH, ​​samt i olika vikning miljöer av lipider och miceller. Det nuvarande protokollet är en som kan generaliseras till alla membran eller lösligt protein som uppfyller kriterier som diskuteras nedan.

Watch this Scientific Journal Video about Thermodynamics of Membrane Protein Folding Measured by Fluorescence Spectroscopy at JoVE.com

Thermodynamics of Membrane Protein Folding Measured by Fluorescence Spectroscopy

Denna video artikeln närmare den experimentella förfarande för erhållande av Gibbs fria energi av membran protein folding av tryptofan fluorescens.

Termodynamik för membranprotein Folding Mätt fluorescensspektroskopi

Membrane protein folding is an emerging topic with both fundamental and health-related significance.  The abundance of membrane proteins in cells ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Chemistry

Bioengineering

Thermodynamics

SCIENTISTS IN ACTION

Fluorescence detection methods for microfluidic droplet platforms

Fluorescens detektionsmetoder för mikroflödessystem droppe plattformar

The development of microfluidic platforms for performing chemistry and biology has in large part been driven by a range of potential benefits that ...

Microfluidic Mixers for Studying Protein Folding

Mikroflödessystem Blandare för att studera protein Folding

The process by which a protein folds into its native conformation is highly relevant to biology and human health yet still poorly understood. One reason ...

Membrane-SPINE: A Biochemical Tool to Identify Protein-protein Interactions of Membrane Proteins In Vivo

Membrane-SPINE: A Biochemical Tool to Identify Protein-protein Interactions of Membrane Proteins In Vivo

Membran-SPINE: A Biochemical verktyg för att identifiera protein-proteininteraktioner av membranproteiner<em&gt; In Vivo</em

Membrane proteins are essential for cell viability and are therefore important therapeutic targets1-3. Since they function in complexes4, methods to ...

A Step Beyond BRET: Fluorescence by Unbound Excitation from Luminescence (FUEL)

A Step Beyond BRET: Fluorescence by Unbound Excitation from Luminescence FUEL

En Step Beyond BRET: Fluorescens från Obundet Excitation från Luminescence (FUEL)

Fluorescence by Unbound Excitation from Luminescence (FUEL) is a radiative excitation-emission process that produces increased signal and contrast ...

High-resolution Spatiotemporal Analysis of Receptor Dynamics by Single-molecule Fluorescence Microscopy

Högupplöst Spatiotemporal Analys av Receptor Dynamics av ​​Single-molekyl fluorescensmikroskopi

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., ...

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

3D Orbital Tracking i en modifierad Två-foton Mikroskop: En ansökan till spårning av intracellulära vesiklar

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

Luminescence Resonance Energy Transfer to Study Conformational Changes in Membrane Proteins Expressed in Mammalian Cells

Luminiscens Resonance Energy Transfer att studera strukturförändringar i membranproteiner i däggdjursceller

Luminescence Resonance Energy Transfer, or LRET, is a powerful technique used to measure distances between two sites in proteins within the distance range ...

Preparation of Extracellular Matrix Protein Fibers for Brillouin Spectroscopy

Beredning av extracellulära matrixproteinfibrer för Brillouin spektroskopi

Brillouin spectroscopy is an emerging technique in the biomedical field. It probes the mechanical properties of a sample through the interaction of ...

Engineering 'Golden' Fluorescence by Selective Pressure Incorporation of Non-canonical Amino Acids and Protein Analysis by Mass Spectrometry and Fluorescence

Engineering 'Golden' fluorescens vid selektionstryck inkorporering av icke-kanoniska aminosyror och proteinanalys av masspektrometri och fluorescens

Fluorescent proteins are fundamental tools for the life sciences, in particular for fluorescence microscopy of living cells. While wild-type and ...

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate (LAL) Assays

Detection of Endotoxin in Nano-formulations Using Limulus Amoebocyte Lysate LAL Assays

Påvisande av Endotoxin i Nano-formuleringar använder Limulus immobiliserat Lysate (LAL) analyser

When present in pharmaceutical products, a Gram-negative bacterial cell wall component endotoxin (often also called lipopolysaccharide) can cause ...