Name: immunocytochemistry: human neural stem cells
Uploaded: 2007-08-24T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells at JoVE.com

<p> De auteurs willen dr. Philip H. Schwartz van de National Human Resource Neural Stamcel erkennen bij de Children&#39;s Hospital, Orange County Instituut voor het verstrekken van hNSPC culturen en dr. Gary Bassell aan de Emory University voor een eerste instructie in de parafilm vlekken techniek. </p>

<p class="jove_title"> Dag 1: Voorbereiding van de Duitse dekglaasjes en zaaien Cellen </p><p class="jove_content"> <em>Let op:</em> Duitse dekglaasjes worden vaak voorkeur voor het kweken van primaire neurale stamcellen en neuronen. We gebruiken de volgende schoonmaak protocol om celadhesie en de verspreiding te verbeteren. Positie coverslips in een klein rek dat vloeibare toegang tot beide zijden van het dekglaasje zal toestaan. De eerste, incubeer dekglaasjes in 1% Liquinox gedurende 10 minuten, gevolgd door drie wasbeurten met gedemineralis...

<ol>
	<li>Flanagan, L. A., Chou, J., Falet, H., Neujahr, R., Hartwig, J. H., Stossel, T. P., Filamin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filamin+A,+the+Arp2/3+complex,+and+the+morphology+and+function+of+cortical+actin+filaments+in+human+melanoma+cells.">Filamin A, the Arp2/3 complex, and the morphology and function of cortical actin filaments in human melanoma cells.</a> <em style='font-style: italic'>J. Cell Biol</em>. <b>155</b>, 511-518 (2001).</li><li>Flanagan, L. A., Rebaza, L. M., Derzic, S., Schwartz, P. H., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins.">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> <em style='font-style: italic'>J. Neurosci. Res</em>. <b>83</b>, 845-856 (2006).</li><li>Flanagan, L. A., Ziaeian, B., Palmer, T., Schwartz, P. H., Loring, J. F., Wesselschmidt, R. W., Schwartz, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunocytochemical+analysis+of+stem+cells.">Immunocytochemical analysis of stem cells.</a> <em style='font-style: italic'>In Human Stem Cell Manual: A Laboratory Guide</em>. , (2007).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passaging+Human+Neural+Stem+Cells.">Passaging Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counting+Human+Neural+Stem+Cells.">Counting Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li></ol>

<p> Dit protocol beschrijft een procedure voor immunokleuring hNSPCs dat het volume van antilichamen nodig minimaliseert en geeft betrouwbare cel vlekken. De procedure zoals beschreven is het beste voor intracellulaire antigenen, maar kan worden aangepast aan het celoppervlak moleculen vlek of vlekken van het cytoskelet te verbeteren. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>German glass (Deutsche Spiegelglas) coverslips</td>
<td>Tool</td>
<td>Carolina Biological Supply Company</td>
<td>WW-63-3029</td>
<td>12,15,18, 22, 25 mm coverslips available</td>
</tr>
<tr>
<td>Liquinox phosphate-free detergent</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>Z273279</td>
<td>very viscous</td>
</tr>
<tr>
<td>Poly-D-lysine hydrobromide</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P7280</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin, natural mouse</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>23017-015</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EMEM (1X)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Mediatech</td>
<td>MT-10-010-CV</td>
<td>Distributed by Fisher under the indicated catalog #</td>
</tr>
<tr>
<td>24 well plate</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher</td>
<td>08-772-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton X-100</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>BP151-500</td>
<td>very viscous</td>
</tr>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P6148</td>
<td>potential carcinogen, use caution when using it in powder and solution form</td>
</tr>
<tr>
<td>Bovine Serum Albumin, IgG-free</td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson Immunoresearch</td>
<td>001-000-161</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hoechst 33342</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>H-1399</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield</td>
<td>Reagent</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H-1000</td>
<td>viscous</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

immunocytochemistry: human neural stem cells

<p class="jove_content"> Immunocytochemie is een zeer krachtige en vrij eenvoudige methode voor het bepalen van de aanwezigheid, subcellulaire lokalisatie, en relatieve rijkdom van een antigeen van belang, meestal een eiwit, in gekweekte cellen. Dit protocol biedt een makkelijk te volgen reeks van stappen die in staat zal stellen onderzoekers aan primaire en secundaire antilichamen te besparen, terwijl het krijgen van hoge kwaliteit, reproduceerbare kwalitatieve en kwantitatieve gegevens uit hun vlekken. Er zijn twee aspecten van dit protocol die helpen om het volume van antilichaam nodig voor kleuring behouden. Voor een, zijn de cellen gekweekt op kleine, ronde dekglaasjes die zijn geplaatst in putjes van een weefselkweek plaat. Na fixatie, kunnen de cellen op de dekglaasjes verwijderd worden uit de putjes van de plaat. Voor antilichaam kleuring, is het dekglaasje met cellen omgekeerd op een kleine daling van antilichamen oplossing op parafilm en is bedekt met een tweede stuk van Parafilm om uitdroging te voorkomen. Met behulp van deze methode is slechts ~ 25 ui van antilichaam-oplossing die nodig is voor elke dekglaasje (of monster), te worden gemerkt. Dit protocol beschrijft immunokleuring van menselijke neurale stamcellen / precursor cellen (hNSPCs), maar kan worden gebruikt voor vele andere celtypes. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells at JoVE.com

Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells

<p class="jove_content">Immunocytochemie is een krachtige methode om de aanwezigheid, subcellulaire lokalisatie, en relatieve rijkdom van een antigeen van belang in gekweekte cellen te bepalen. Dit protocol biedt een makkelijk te volgen serie van stappen die in staat zal stellen een om antistoffen te behouden en het meeste uit je vlekken krijgen.</p>

Immunocytochemie: menselijke neurale stamcellen

Immunocytochemistry is a very powerful and fairly straightforward method for determining the presence, subcellular localization, and relative abundance of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Verspreiding van menselijke embryonale stamcellen (ES) cellen

Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector

Transfecteren menselijke neurale stamcellen met de Amaxa Nucleofector

Transfection of primary mammalian neural cells, such as human neural stem/precursor cells (hNSPCs), with commonly used cationic lipid transfection ...

Counting Human Neural Stem Cells

Het tellen van menselijke neurale stamcellen

Knowledge of the exact number of viable cells in a given volume of a cell suspension is required for many routine tissue culture manipulations, such as ...

Passaging Human Neural Stem Cells

Passage menselijke neurale stamcellen

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Afleiding van menselijke embryonale stamcellen door Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures

Muis Epidermale neurale lijst Stem Cell (EPI-NCSC) culturen

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Chromatine immunoprecipitatie van menselijke embryonale stamcellen

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

Cultuur en onderhoud van menselijke embryonale stamcellen

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Freezing and Thawing Human Embryonic Stem Cells

Invriezen en ontdooien van menselijke embryonale stamcellen

Since James Thomson et al developed a technique in 1998 to isolate and grow hES in culture, freezing cells for later use and thawing and expanding cells ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Differentiatie van embryonale stamcellen in de oligodendrocyt Voorlopers

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...