Name: immunocytochemistry: human neural stem cells
Uploaded: 2007-08-24T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells at JoVE.com

<p> Gli autori desiderano ringraziare il Dott. Philip H. Schwartz del National Human Resource neurale delle cellule staminali presso l&#39;Ospedale dei Bambini, Orange County Istituto di Ricerca per la fornitura di culture hNSPC e il Dr. Gary Bassell alla Emory University per l&#39;istruzione iniziale nella tecnica di colorazione parafilm. </p>

<p class="jove_title"> Giorno 1: Preparazione di cellule coprioggetto di vetro tedesco e Semina </p><p class="jove_content"> <em>Nota:</em> coprioggetto di vetro tedesco sono spesso preferibili per la coltura delle cellule staminali neurali primarie e neuroni. Usiamo il seguente protocollo di pulizia per migliorare l&#39;adesione cellulare e la diffusione. Coprioggetto posizione in un rack di piccole dimensioni che consentirà l&#39;accesso liquido entrambi i lati del vetrino. In primo luogo, coprioggetto incubare 1% Liquinox per 10 minuti, seg...

<ol>
	<li>Flanagan, L. A., Chou, J., Falet, H., Neujahr, R., Hartwig, J. H., Stossel, T. P., Filamin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filamin+A,+the+Arp2/3+complex,+and+the+morphology+and+function+of+cortical+actin+filaments+in+human+melanoma+cells.">Filamin A, the Arp2/3 complex, and the morphology and function of cortical actin filaments in human melanoma cells.</a> <em style='font-style: italic'>J. Cell Biol</em>. <b>155</b>, 511-518 (2001).</li><li>Flanagan, L. A., Rebaza, L. M., Derzic, S., Schwartz, P. H., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins.">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> <em style='font-style: italic'>J. Neurosci. Res</em>. <b>83</b>, 845-856 (2006).</li><li>Flanagan, L. A., Ziaeian, B., Palmer, T., Schwartz, P. H., Loring, J. F., Wesselschmidt, R. W., Schwartz, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunocytochemical+analysis+of+stem+cells.">Immunocytochemical analysis of stem cells.</a> <em style='font-style: italic'>In Human Stem Cell Manual: A Laboratory Guide</em>. , (2007).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passaging+Human+Neural+Stem+Cells.">Passaging Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counting+Human+Neural+Stem+Cells.">Counting Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li></ol>

<p> Questo protocollo descrive una procedura per immunocolorazione hNSPCs che riduce al minimo il volume di anticorpi necessari e dà colorazione affidabile cellulare. La procedura descritta è meglio per gli antigeni intracellulari, ma può essere modificato per macchiare le molecole della superficie cellulare o per migliorare la colorazione del citoscheletro. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>German glass (Deutsche Spiegelglas) coverslips</td>
<td>Tool</td>
<td>Carolina Biological Supply Company</td>
<td>WW-63-3029</td>
<td>12,15,18, 22, 25 mm coverslips available</td>
</tr>
<tr>
<td>Liquinox phosphate-free detergent</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>Z273279</td>
<td>very viscous</td>
</tr>
<tr>
<td>Poly-D-lysine hydrobromide</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P7280</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin, natural mouse</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>23017-015</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EMEM (1X)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Mediatech</td>
<td>MT-10-010-CV</td>
<td>Distributed by Fisher under the indicated catalog #</td>
</tr>
<tr>
<td>24 well plate</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher</td>
<td>08-772-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton X-100</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>BP151-500</td>
<td>very viscous</td>
</tr>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P6148</td>
<td>potential carcinogen, use caution when using it in powder and solution form</td>
</tr>
<tr>
<td>Bovine Serum Albumin, IgG-free</td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson Immunoresearch</td>
<td>001-000-161</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hoechst 33342</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>H-1399</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield</td>
<td>Reagent</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H-1000</td>
<td>viscous</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

immunocytochemistry: human neural stem cells

<p class="jove_content"> Immunocitochimica è un metodo molto potente e molto semplice per la determinazione della presenza, localizzazione subcellulare e l&#39;abbondanza relativa di un antigene di interesse, più comunemente una proteina, in cellule in coltura. Questo protocollo presenta un facile da seguire serie di passi che permetterà ai ricercatori di conservare gli anticorpi primari e secondari mentre ottenere alta qualità, qualità riproducibile e dati quantitativi dalla loro colorazione. Ci sono due aspetti di questo protocollo che consente di preservare il volume di anticorpi necessari per la colorazione. Per uno, le cellule sono coltivate su piccole lamelle circolari che sono posti in pozzetti di una piastra di coltura dei tessuti. Dopo la fissazione, le cellule su vetrini possono essere rimossi dai pozzetti della piastra. Per la colorazione degli anticorpi, il vetrino con le cellule è invertita su una piccola goccia di soluzione di anticorpi su parafilm ed è coperto con un secondo pezzo di parafilm per evitare l&#39;essiccazione. Utilizzando questo metodo, solo ~ 25 ml di soluzione di anticorpi è necessario per ogni coprioggetto (o campione) per essere colorato. Questo protocollo descrive immunocolorazione di staminali neurali umane / precursore cellule (hNSPCs), ma può essere usato per molti altri tipi di cellule. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells at JoVE.com

Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells

<p class="jove_content">Immunocitochimica è un potente metodo per determinare la presenza, localizzazione subcellulare e l&#39;abbondanza relativa di un antigene di interesse in cellule in coltura. Questo protocollo presenta un facile da seguire serie di passaggi che permettono di conservare gli anticorpi e ottenere il massimo della propria colorazione.</p>

Immunocitochimica: cellule staminali neuronali

Immunocytochemistry is a very powerful and fairly straightforward method for determining the presence, subcellular localization, and relative abundance of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Propagazione di staminali embrionali umane (ES) Cellule

Ricerca

Biologia

Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector

Trasfezione delle cellule staminali neuronali con il Nucleofector Amaxa

Transfection of primary mammalian neural cells, such as human neural stem/precursor cells (hNSPCs), with commonly used cationic lipid transfection ...

Counting Human Neural Stem Cells

Conteggio cellule staminali neuronali

Knowledge of the exact number of viable cells in a given volume of a cell suspension is required for many routine tissue culture manipulations, such as ...

Passaging Human Neural Stem Cells

Passaging cellule staminali neuronali

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Derivazione di cellule staminali embrionali umane da Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures

Topo Epidermal cresta neurale delle cellule staminali (EPI-NCSC) Culture

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Immunoprecipitazione della cromatina di cellule staminali embrionali umane

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

Cultura e manutenzione di cellule staminali embrionali umane

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Freezing and Thawing Human Embryonic Stem Cells

Congelamento e scongelamento cellule staminali embrionali umane

Since James Thomson et al developed a technique in 1998 to isolate and grow hES in culture, freezing cells for later use and thawing and expanding cells ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Differenziazione delle cellule staminali embrionali in precursori degli oligodendrociti

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...