Name: immunocytochemistry: human neural stem cells
Uploaded: 2007-08-24T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells at JoVE.com

<p> Авторы хотели бы выразить признательность д-р Филип Х. Шварца о человеческом нейронных ресурсов стволовых клеток в детской больнице, Orange County научно-исследовательский институт для обеспечения hNSPC культур и доктор Гари Bassell в Университете Эмори для начального обучения в технике окрашивания парафильмом. </p>

<p class="jove_title"> День 1: Подготовка немецких Покровные стекла и посевные клетки </p><p class="jove_content"> <em>Примечание:</em> немецкий покровные стекла часто предпочтительнее для культивирования первичных нервных стволовых клеток и нейронов. Мы используем следующий протокол очистки для улучшения адгезии клетки и ...

<ol>
	<li>Flanagan, L. A., Chou, J., Falet, H., Neujahr, R., Hartwig, J. H., Stossel, T. P., Filamin, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filamin+A,+the+Arp2/3+complex,+and+the+morphology+and+function+of+cortical+actin+filaments+in+human+melanoma+cells.">Filamin A, the Arp2/3 complex, and the morphology and function of cortical actin filaments in human melanoma cells.</a> <em style='font-style: italic'>J. Cell Biol</em>. <b>155</b>, 511-518 (2001).</li><li>Flanagan, L. A., Rebaza, L. M., Derzic, S., Schwartz, P. H., Monuki, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+human+neural+precursor+cells+by+laminin+and+integrins.">Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins.</a> <em style='font-style: italic'>J. Neurosci. Res</em>. <b>83</b>, 845-856 (2006).</li><li>Flanagan, L. A., Ziaeian, B., Palmer, T., Schwartz, P. H., Loring, J. F., Wesselschmidt, R. W., Schwartz, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunocytochemical+analysis+of+stem+cells.">Immunocytochemical analysis of stem cells.</a> <em style='font-style: italic'>In Human Stem Cell Manual: A Laboratory Guide</em>. , (2007).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Passaging+Human+Neural+Stem+Cells.">Passaging Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li><li>Marchenko, S., Flanagan, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counting+Human+Neural+Stem+Cells.">Counting Human Neural Stem Cells.</a> <em style='font-style: italic'>Journal of Visualized Experiments</em>. <b>7</b>, (2007).</li></ol>

<p> Этот протокол описывает процедуру иммуноокрашивания hNSPCs, что сводит к минимуму объем антител необходимо и дает надежные окрашивания клеток. Процедура, как описано, что лучше для внутриклеточных антигенов, но может быть изменен, чтобы пятно молекул клеточной поверхности, а также для усиления окра...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>German glass (Deutsche Spiegelglas) coverslips</td>
<td>Tool</td>
<td>Carolina Biological Supply Company</td>
<td>WW-63-3029</td>
<td>12,15,18, 22, 25 mm coverslips available</td>
</tr>
<tr>
<td>Liquinox phosphate-free detergent</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>Z273279</td>
<td>very viscous</td>
</tr>
<tr>
<td>Poly-D-lysine hydrobromide</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P7280</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laminin, natural mouse</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>23017-015</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EMEM (1X)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Mediatech</td>
<td>MT-10-010-CV</td>
<td>Distributed by Fisher under the indicated catalog #</td>
</tr>
<tr>
<td>24 well plate</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher</td>
<td>08-772-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Triton X-100</td>
<td>Reagent</td>
<td>Fisher</td>
<td>BP151-500</td>
<td>very viscous</td>
</tr>
<tr>
<td>Paraformaldehyde</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P6148</td>
<td>potential carcinogen, use caution when using it in powder and solution form</td>
</tr>
<tr>
<td>Bovine Serum Albumin, IgG-free</td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson Immunoresearch</td>
<td>001-000-161</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hoechst 33342</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>H-1399</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vectashield</td>
<td>Reagent</td>
<td>Vector Laboratories</td>
<td>H-1000</td>
<td>viscous</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

immunocytochemistry: human neural stem cells

<p class="jove_content"> Иммуноцитохимическая это очень мощный и достаточно простой метод для определения присутствия, субклеточные локализации, а также относительное содержание антигена интересов, чаще всего белка в культуре клеток. Этот протокол представляет простой в последующей серии шагов, что позволит исследователям сохранить первичные и вторичные антитела, получая высокое качество, воспроизводимые качественных и количественных данных из их окрашивания. Есть два аспекта этого протокола, который поможет сохранить объемы антитела необходимы для окрашивания. С одной стороны, клетки выращивают на небольших, круговые покровные, которые размещаются в лунках планшета для культуры ткани. После фиксации клеток на покровных могут быть удалены из скважин пластины. Для окрашивания антителами, покровное с клетками инвертируется на небольшую каплю раствора антител на парафильмом и покрыт второй кусок парафильмом для предотвращения высыхания. Используя этот метод, только ~ 25 мкл антител решения, необходимые для каждого покровное (или образец), чтобы быть окрашены. Этот протокол описывает иммуноокрашивания из человеческих стволовых нейронных / клеток-предшественников (hNSPCs), но может использоваться и для многих других типов клеток. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells at JoVE.com

Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells (Video) | JoVE

<p class="jove_content">Иммуноцитохимическая представляет собой мощный метод для определения присутствия, субклеточные локализации, а также относительное содержание антигена интереса к культуре клеток. Этот протокол представляет простой в последующей серии шагов, которые позволяют сохранить антител и получить максимальную отдачу от своих пятен.</p>

Иммуноцитохимическая: Человеческие нервные стволовые клетки

Immunocytochemistry is a very powerful and fairly straightforward method for determining the presence, subcellular localization, and relative abundance of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Immunocytochemistry: Human Neural Stem Cells

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells (Video) | JoVE

Распространение человеческих эмбриональных стволовых (ЭС) клеток

Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector

Transfecting Human Neural Stem Cells with the Amaxa Nucleofector (Video) | JoVE

Трансфекции правам нервные стволовые клетки с Amaxa Nucleofector

Transfection of primary mammalian neural cells, such as human neural stem/precursor cells (hNSPCs), with commonly used cationic lipid transfection ...

Counting Human Neural Stem Cells

Counting Human Neural Stem Cells (Video) | JoVE

Подсчет правам нервные стволовые клетки

Knowledge of the exact number of viable cells in a given volume of a cell suspension is required for many routine tissue culture manipulations, such as ...

Passaging Human Neural Stem Cells

Passaging Human Neural Stem Cells (Video) | JoVE

Пассирования правам нервные стволовые клетки

The ability to manipulate human neural stem/precursor cells (hNSPCs) in vitro provides a means to investigate their utility as cell transplants for ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery (Video) | JoVE

Вывод человеческих эмбриональных стволовых клеток на применение специфических иммунных сывороток в хирургии

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures (Video) | JoVE

Мышь эпидермального нервного гребня стволовых клеток (EPI-NCSC) Культур

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells (Video) | JoVE

Хроматин Иммунопреципитация из человеческих эмбриональных стволовых клеток

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Freezing and Thawing Human Embryonic Stem Cells

Freezing and Thawing Human Embryonic Stem Cells (Video) | JoVE

Замораживание и размораживание человеческих эмбриональных стволовых клеток

Since James Thomson et al developed a technique in 1998 to isolate and grow hES in culture, freezing cells for later use and thawing and expanding cells ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors (Video) | JoVE

Дифференциация эмбриональных стволовых клеток в олигодендроцитов прекурсоров

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Transfecting and Nucleofecting Human Induced Pluripotent Stem Cells

Transfecting and Nucleofecting Human Induced Pluripotent Stem Cells (Video) | JoVE

Трансфекции и Nucleofecting человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток

Genetic modification is continuing to be an essential tool in studying stem cell biology and in setting forth potential clinical applications of human ...