Name: lineage labeling of zebrafish cells with laser uncagable fluorescein dextran
Uploaded: 2011-04-28T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Lineage Labeling of Zebrafish Cells with Laser Uncagable Fluorescein Dextran at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить Дэна Карлина за помощь в создании клетке флуоресцеина. Кроме того, мы хотели бы поблагодарить следующих источников финансирования: Университет Вандербильта Медицинской школы Программа Развития Грант обучения биологии в ЕАК, и NIH HD054534to ОЦГ.

1. Синтез клетке Fluorescein Декстран <ol><li> Отмерьте 3,5 - 4 мг aminodextran и добавить в Invitrogen поставляемых тонированные пробирку, содержащую 1 мг CMNB-клетке флуоресцеина SE. В наших руках это соотношение дает среднюю загрузку ~ 2,5 молекул красителя в декстран. </li><li> Добавить 500 мкл 0,1 М Na 2 B 4 O <...

<ol>
	<li>Hatada, Y., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fate+map+of+the+epiblast+of+the+early+chick+embryo.">A fate map of the epiblast of the early chick embryo.</a> Development. 120, 2879-2889 (1994).</li><li>Moody, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fates+of+the+blastomeres+of+the+32-cell-stage+Xenopus+embryo.">Fates of the blastomeres of the 32-cell-stage Xenopus embryo.</a> Dev Biol. 122, 300-319 (1987).</li><li>Wetts, R., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotent+Precursors+Can+Give+Rise+to+All+Major+Cell-Types+of+the+Frog+Retina.">Multipotent Precursors Can Give Rise to All Major Cell-Types of the Frog Retina.</a> Science. 239, 1142-1145 (1988).</li><li>Wetts, R., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+fluorescent+tracers+to+study+neural+cell+lineages.">Microinjection of fluorescent tracers to study neural cell lineages.</a> Development. , 1-8 (1991).</li><li>Woo, K., Fraser, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Order+and+coherence+in+the+fate+map+of+the+zebrafish+nervous+system.">Order and coherence in the fate map of the zebrafish nervous system.</a> Development. 121, 2595-2609 (1995).</li><li>Ando, R., Hama, H., Yamamoto-Hino, M., Mizuno, H., Miyawaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optical+marker+based+on+the+UV-induced+green-to-red+photoconversion+of+a+fluorescent+protein.">An optical marker based on the UV-induced green-to-red photoconversion of a fluorescent protein.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 12651-12656 (2002).</li><li>Sato, T., Takahoko, M., Okamoto, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HuC:Kaede,+a+useful+tool+to+label+neural+morphologies+in+networks+in+vivo.">HuC:Kaede, a useful tool to label neural morphologies in networks in vivo.</a> Genesis. 44, 136-142 (2006).</li><li>Wiedenmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EosFP,+a+fluorescent+marker+protein+with+UV-inducible+green-to-red+fluorescence+conversion.">EosFP, a fluorescent marker protein with UV-inducible green-to-red fluorescence conversion.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101, 15905-15910 (2004).</li><li>Haugland, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Fluorescent Probes and Research Chemicals. , 707-711 (2002).</li><li>Kozlowski, D. J., Murakami, T., Ho, R. K., Weinberg, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+cell+movement+and+tissue+patterning+in+the+zebrafish+embryo+revealed+by+fate+mapping+with+caged+fluorescein.">Regional cell movement and tissue patterning in the zebrafish embryo revealed by fate mapping with caged fluorescein.</a> Biochem Cell Biol. 75, 551-562 (1997).</li><li>Kozlowski, D. J., Weinberg, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoactivatable+(caged)+fluorescein+as+a+cell+tracer+for+fate+mapping+in+the+zebrafish+embryo.">Photoactivatable (caged) fluorescein as a cell tracer for fate mapping in the zebrafish embryo.</a> Methods Mol Biol. 135, 349-355 (2000).</li><li>Russek-Blum, N., Nabel-Rosen, H., Levkowitz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+resolution+fate+map+of+the+zebrafish+diencephalon.">High resolution fate map of the zebrafish diencephalon.</a> Dev Dyn. 238, 1827-1835 (2009).</li><li>Summers, R. G., Piston, D. W., Harris, K. M., Morrill, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+orientation+of+first+cleavage+in+the+sea+urchin+embryo,+Lytechinus+variegatus,+does+not+specify+the+axes+of+bilateral+symmetry.">The orientation of first cleavage in the sea urchin embryo, Lytechinus variegatus, does not specify the axes of bilateral symmetry.</a> Dev Biol. 175, 177-183 (1996).</li></ol>

Как описано, этот протокол обеспечивает относительно быстрый метод линии маркировки в данио, которая построена на часто используемые методы микроинъекции, микроскопии и иммунофлюоресценции. Мы обнаружили, что лазерная uncaging быть наиболее эффективным и экономически эффективный спосо?...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/details.php?id=2672">Lineage Labeling of Zebrafish Cells with Laser Uncagable Fluorescein Dextran</a>. There was an error in the authors, Ilya A. Shestopalov and James K. Chen, names. The author's names have been corrected to: Ilya A. Shestopalov and James K. Chen instead of: Ilya Shestopalov and James Chen

A correction to the article Lineage Labeling of Zebrafish Cells with Laser Uncagable Fluorescein Dextran was made.

Erratum: Lineage Labeling of Zebrafish Cells with Laser Uncagable Fluorescein Dextran

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>CMNB-caged fluorescein SE</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>C20050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Aminodextran, 10kDa</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>D1860</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Zeba desalt spin columns</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pierce</td>
<td>89889</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>goat anti-fluorescein antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A11095</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alexa Fluor 633 Donkey anti-goat antibody</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>A21082</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>35mmx10mm petri dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Becton-Dickinson</td>
<td>351008</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Upright compound microscope with 40x water immersion objective</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Leica</td>
<td>DM6000B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MicroPoint Manual Laser Illumination System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Photonic Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phenylthiourea (PTU)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alfa Aesar</td>
<td>L06690</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tricaine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>E10521</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Proteinase K</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roche</td>
<td>03115836991</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plastic thread</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Any sewing supply store</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Agarose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Research Products International</td>
<td>A20090</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SpeedVac</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Thermo Scientific</td>
<td>Savant SPD131DDA</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Vortexing mixer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>Vortex Genie 2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pressure injector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Applied Scientific Instrumentation</td>
<td>MPPI-3</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

lineage labeling of zebrafish cells with laser uncagable fluorescein dextran

Центральной проблемой в биологии развития, является вывести происхождение множества типов клеток, присутствующих в позвоночных, как они возникают из недифференцированных предшественников. Исследователи использовали различные методы маркировки линии, такие как DII маркировки 1 и давление впрыска прослеживаемых ферменты 2 выяснить судьбу ячейки на более поздних стадиях развития в модельных системах. Первые карты судьбы в данио (Danio rerio) были собраны iontophoretic инъекции флуоресцентных красителей, таких, как родамин декстран, в одиночных камерах в дискретных регионов эмбриона и отслеживания судьбы помечены ячейки со временем 3-5. Хотя эффективные, эти методы технически сложные и требуют специализированного оборудования, не часто встречается в данио лабораториях. В последнее время photoconvertable флуоресцентные белки, такие как Eos и Kaede, который необратимо переключаться с зеленого на красный флуоресценции при воздействии ультрафиолетового света, видим широкое использование в данио 6-8. Оптическая ясность данио эмбриона и относительной легкостью трансгенеза сделали эти инструменты особенно привлекательными для линии маркировки и наблюдать миграцию клеток в естественных условиях 7. Несмотря на свою полезность, эти белки имеют некоторые недостатки по сравнению с красителем-опосредованных методов линии маркировки. Наиболее важным является трудность, мы нашли в получении высоких 3-D резолюции в ходе фотопреобразования этих белков. В свете этого, может быть, лучшее сочетание разрешение и простоту использования для маркировки линии в данио использует клетке флуоресцеина декстран, флуоресцентный краситель, который связан с тушением группа, которая маскирует его флуоресценции 9. Красителя может быть &quot;Uncaged&quot; (освобожден от закалки группы) в пределах определенной ячейке с помощью УФ света от лампы лазер или ртути, что позволяет визуализировать его флуоресценции или иммунодетекции. В отличие от iontophoretic методы, флуоресцеин клетке может быть введен со стандартными аппаратами впрыска и Uncaged с epifluorescence микроскопа, снабженного отверстием 10. Кроме того, антитела против флуоресцеина обнаружить только Uncaged форме, и эпитоп выживает фиксации и 11. Наконец, флуоресцеин клетке может быть активирована с очень высоким 3-D разрешение, особенно если двухфотонной микроскопии используется 12,13. Этот протокол описывает метод маркировки линии по клетке флуоресцеина и лазерной uncaging. Subsequenctly, Uncaged флуоресцеина обнаруживается одновременно с другими эпитопов, таких как GFP путем маркировки с антителами.

Watch this Scientific Journal Video about Lineage Labeling of Zebrafish Cells with Laser Uncagable Fluorescein Dextran at JoVE.com

Lineage Labeling of Zebrafish Cells with Laser Uncagable Fluorescein Dextran

Этот протокол описывает способ маркировать и отслеживать судьбу малых групп эмбрионов данио клетки с помощью УФ-uncaging в клетке флуоресцеина, после чего весь горе immunolabeling для усиления сигнала от Uncaged флуоресцеина.

Lineage Маркировка данио рерио Клетки с лазерной Uncagable Fluorescein Декстран

A central problem in developmental biology is to deduce the origin of the myriad cell types present in vertebrates as they arise from undifferentiated ...

Research

JoVE Journal

Biology

Labeling Stem Cells with Fluorescent Dyes for non-invasive Detection with Optical Imaging

Маркировка стволовых клеток с флуоресцентными красителями для неинвазивного обнаружения оптических изображений с

Optical imaging (OI) is an easy, fast and inexpensive tool for in vivo monitoring of new stem cell based therapies. The technique is based on ex vivo ...

Imaging Glycans in Zebrafish Embryos by Metabolic Labeling and Bioorthogonal Click Chemistry

Изображений гликанов в данио рерио Эмбрионы от метаболического Маркировка и Bioorthogonal химии нажмите

Imaging glycans in vivo has recently been enabled using a bioorthogonal chemical reporter strategy by treating cells or organisms with azide- or ...

Laser Ablation of the Zebrafish Pronephros to Study Renal Epithelial Regeneration

Лазерной абляции предпочки данио рерио по изучению почечных эпителиальных Регенерация

Acute kidney injury (AKI) is characterized by high mortality rates from deterioration of renal function over a period of hours or days that culminates in ...

Phenotypic Analysis and Isolation of Murine Hematopoietic Stem Cells and Lineage-committed Progenitors

Фенотипический анализ и выделение мышей гемопоэтических стволовых клеток и Lineage, совершенных прародителей

The bone marrow is the principal site where HSCs and more mature blood cells lineage progenitors reside and differentiate in an adult organism. HSCs ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Измерительная ячейка Кинетика цикла прогрессии с метаболическим Маркировка и проточной цитометрии

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Laser-inflicted Injury of Zebrafish Embryonic Skeletal Muscle

Лазерная нанесенные травмы рыбок данио эмбриональных скелетных мышц

Various experimental approaches have been used in mouse to induce muscle injury with the aim to study muscle regeneration, including myotoxin injections ...

Nephrotoxin Microinjection in Zebrafish to Model Acute Kidney Injury

Nephrotoxin Микроинъекция в данио рерио к модели острое повреждение почек

The kidneys are susceptible to harm from exposure to chemicals they filter from the bloodstream. This can lead to organ injury associated with a rapid ...

Continuous-wave Thulium Laser for Heating Cultured Cells to Investigate Cellular Thermal Effects

Непрерывный волновой тулиевый лазер для нагревательных клеток, предназначенных для исследования клеточных тепловых эффектов

An original method to heat cultured cells using a 1.94 &#181;m continuous-wave thulium laser for biological assessment is introduced here. Thulium laser ...

Visualization and Quantification of Mesenchymal Cell Adipogenic Differentiation Potential with a Lineage Specific Marker

Визуализация и количественная оценка потенциала дифференциация адипогенном мезенхимальных клеток с маркером конкретных Lineage

Several dyes are currently available for use in detecting differentiation of mesenchymal cells into adipocytes. Dyes, such as Oil Red O, are cheap, easy ...

Lineage Tracing and Clonal Analysis in Developing Cerebral Cortex Using Mosaic Analysis with Double Markers (MADM)

Lineage Tracing and Clonal Analysis in Developing Cerebral Cortex Using Mosaic Analysis with Double Markers MADM

Отслеживание линий и клональный анализ при разработке коры головного мозга с использованием мозаичного анализа с двойными маркерами (MADM)

Beginning from a limited pool of progenitors, the mammalian cerebral cortex forms highly organized functional neural circuits. However, the underlying ...