Name: dissection and imaging of active zones in the drosophila neuromuscular junction
Uploaded: 2011-04-27T16:00:00
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我々は、この原稿についての有益なコ​​メントのために博士Nael Alamiと博士ナムチョルキムに感謝。

1。免疫蛍光のための準備： <ol><li>解剖表面を作成するには、小規模な組織培養プレートにSylgard 184シリコーンエラストマーベースを注ぐ。解剖領域がリムよりも低くなるように完全にプレートを埋めるためではないことを確認してください。 </li><li>操作の増加を容易にするために約3.5mmの長さに解剖ピンを取り除いて、幼虫ごとに少なくとも6ピンを持っていることを確認してください。 </...

<ol>
	<li>Budnik, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synapse+maturation+and+structural+plasticity+at+Drosophila+neuromuscular+junctions.">Synapse maturation and structural plasticity at Drosophila neuromuscular junctions.</a> Curr Opin Neurobiol. 6, 858-867 (1996).</li><li>Fouquet, W., Owald, D., Wichmann, C., Mertel, S., Depner, H., Dyba, M., Hallermann, S., Kittel, R. J., Eimer, S., Sigrist, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maturation+of+active+zone+assembly+by+Drosophila+Bruchpilot.">Maturation of active zone assembly by Drosophila Bruchpilot.</a> J Cell Biol. 186, 129-145 (2009).</li><li>Hoang, B., Chiba, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-Cell+Analysis+of+Drosophila+Larval+Neuromuscular+Synapses.">Single-Cell Analysis of Drosophila Larval Neuromuscular Synapses.</a> Developmental Biology. 229, 55-70 (2001).</li><li>Keshishian, H., Kim, Y. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orchestrating+development+and+function:+retrograde+BMP+signaling+in+the+Drosophila+nervous+system.">Orchestrating development and function: retrograde BMP signaling in the Drosophila nervous system.</a> Trends in Neurosciences. 27, 143-147 (2004).</li><li>Kittel, R. J., Wichmann, C., Rasse, T. M., Fouquet, W., Schmidt, M., Schmid, A., Wagh, D. A., Pawlu, C., Kellner, R. R., Willig, K. I., Hell, S. W., Buchner, E., Heckmann, M., Sigrist, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bruchpilot+Promotes+Active+Zone+Assembly,+Ca2++Channel+Clustering,+and+Vesicle+Release.">Bruchpilot Promotes Active Zone Assembly, Ca2+ Channel Clustering, and Vesicle Release.</a> Science. 312, 1051-1054 (2006).</li><li>Koh, Y. H., Gramates, L. S., Budnik, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+larval+neuromuscular+junction:+Molecular+components+and+mechanisms+underlying+synaptic+plasticity.">Drosophila larval neuromuscular junction: Molecular components and mechanisms underlying synaptic plasticity.</a> Microscopy Research and Technique. 49, 14-25 (2000).</li><li>Lloyd, T. E., Taylor, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flightless+flies:+Drosophila+models+of+neuromuscular+disease.">Flightless flies: Drosophila models of neuromuscular disease.</a> Ann N Y Acad Sci. 1184, e1-e20 (2010).</li><li>Ratnaparkhi, A., Lawless, G. M., Schweizer, F. E., Golshani, P., Jackson, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+of+ALS:+human+ALS-associated+mutation+in+VAP33A+suggests+a+dominant+negative+mechanism.">A Drosophila model of ALS: human ALS-associated mutation in VAP33A suggests a dominant negative mechanism.</a> PLoS One. 3, e2334-e2334 (2008).</li><li>Wagh, D. A., Rasse, T. M., Asan, E., Hofbauer, A., Schwenkert, I., D&#252;rrbeck, H., Buchner, S., Dabauvalle, M. -. C., Schmidt, M., Qin, G., Wichmann, C., Kittel, R., Sigrist, S. J., Buchner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bruchpilot,+a+Protein+with+Homology+to+ELKS/CAST,+Is+Required+for+Structural+Integrity+and+Function+of+Synaptic+Active+Zones+in+Drosophila.">Bruchpilot, a Protein with Homology to ELKS/CAST, Is Required for Structural Integrity and Function of Synaptic Active Zones in Drosophila.</a> Neuron. 49, 833-844 (2006).</li><li>Zweier, C., Jong, E. K. d. e., Zweier, M., Orrico, A., Ousager, L. B., Collins, A. L., Bijlsma, E. K., Oortveld, M. A., Ekici, A. B., Reis, A., Schenck, A., Rauch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNTNAP2+and+NRXN1+are+mutated+in+autosomal-recessive+Pitt-Hopkins-like+mental+retardation+and+determine+the+level+of+a+common+synaptic+protein+in+Drosophila.">CNTNAP2 and NRXN1 are mutated in autosomal-recessive Pitt-Hopkins-like mental retardation and determine the level of a common synaptic protein in Drosophila.</a> Am J Hum Genet. 85, 655-666 (2009).</li></ol>

ニューロンは、シナプス終末の面積は非常に重要であり、そしてポストとシナプス前細胞との間の適切な通信のためのブリッジです。疾患モデルにおけるニューロンの健康を調査する強力な方法は、免疫蛍光法によりシナプス末端のタンパク質を分析することです。ここで紹介する免疫蛍光法では、グループ間の環境の違いを制限しながら、研究者は、同時に多くの幼虫を調べることができ?...

<table border="1"><tbody><tr><td>試薬の名前</td><td>会社</td><td>カタログ番号</td><td>コメント</td></tr><tr><td> Sylgard 184シリコーンエラストマー基地</td><td>ダウコーニング</td><td> 68037-59-2 </td><td>混合後、遅いローテーターに置いたり、30分以上放置することにより、ゆっくりと上昇する気泡を可能にする。 </td></tr><tr><td>ステンレス鋼Minutienのピン</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 26002〜10 </td><td>約にトリム。定期的にハサミで長さが3〜4ミリメートル</td></tr><tr><td>椎弓切除鉗子（ピンを把握するための平滑に使用） </td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11223〜20 </td><td>ピンをつかむのに鈍鉗子として使用</td></tr><tr><td>解剖の鉗子</td><td>世界の精密機器</td><td> 501985 </td><td></td></tr><tr><td>超Vannasはさみ、長い8センチメートル</td><td>世界の精密機器</td><td> 501778 </td><td></td></tr><tr><td>マウス抗- BRPの抗体</td><td> DSHB </td><td> NC82 </td><td> 1:50希釈して使用</td></tr><tr><td> Cy3のAffinipureのヤギ抗ホースラディッシュペルオキシダーゼ</td><td>ジャクソンイムノ</td><td> 123-165-021 </td><td> 1:200希釈で使用</td></tr><tr><td>のAlexa Fluor ® 488ヤギ抗マウスIgG </td><td>インビトロジェン</td><td> A11001 </td><td>約を使用してください。 1:200希釈</td></tr></tbody></table>

dissection and imaging of active zones in the drosophila neuromuscular junction

ショウジョウバエ幼虫神経筋接合部（NMJ）は、シナプスの構造と機能の研究のための優れたモデルである。 ショウジョウバエは、強力な遺伝子操作の容易さのためによく知られており、幼虫の神経系は正常な機能にも乱れていないだけの研究に特に役立っていますそれは、いくつかの神経疾患（ロイドとテイラー、2010年）同行。 ショウジョウバエに見られる多くの重要なシナプス分子はまた、哺乳類で発見され、ほとんどのCNS ​​のような哺乳動物ではシナプスを興奮している、 ショウジョウバエ NMJはグルタミン酸作動性であり、活性依存性リモデリング（島ら 、2000）を示しています。それらの神経支配のパターンは、ステレオタイプとそれが可能などの運動ニューロンとそれが支配することが体壁筋線維（Keshishianと金、2004）との間のものとして特定されたシナプスの端末を、勉強することの繰り返しなので、さらに、 ショウジョウバエの神経細胞を個別に識別することができます。遺伝子と物理操作の容易さとともに、進化的に保存シナプスのコンポーネントの存在は、シナプス機能（Budnik、1996）基礎となるメカニズムを調べるためのショウジョウバエモデルに最適です。 これらは神経伝達物質の放出の部位であるので、シナプスの端末でアクティブなゾーンは、特に興味深いものである。 NC82は、 ショウジョウバエのタンパク質Bruchpilot（BRP）、アクティブゾーン（Wagh ら 、2006）の重要なコンポーネントであるCAST1/ERC家族を認識するモノクローナル抗体である。 BRPは、直接、アクティブなゾーンのT -バーを形成することが示さと効果的にTバーの密度の下のCa 2 +チャネル（フーケら 、2009）クラスタリングを担当した。 BRPの変異体は、Ca 2を削減しました+チャネルの密度は、落ち込んで誘発小胞放出、および変更された短期可塑性（キッテルら 、2006）。アクティブなゾーンへの変化は、 ショウジョウバエの疾患モデルで観察されている。例えば、NC82抗体を用いた免疫蛍光は、アクティブなゾーンの密度が筋萎縮性側索硬化症とピット-ホプキンス症候群のモデルで減少したことを示した（Ratnaparkhi ら、2008;。。Zweierら 、2009）。したがって、アクティブなゾーン、または他のシナプス蛋白質の評価は、疾患のショウジョウバエの幼虫のモデルでシナプスの欠陥の存在の貴重な初期の手がかりを提供することがあります。 NMJの免疫蛍光分析のための準備ホールマウント解剖ショウジョウバエの幼虫は、いくつかのスキルが必要ですが、少し練習すれば、ほとんどの科学者によって行うことができます。発表は各遺伝子型間の環境の違いを制限し、再現性と統計分析の信頼性のために十分な動物を提供する、解剖と同じ解剖皿の中で免疫染色するために複数の幼虫のために提供する方法です。

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Dissection and Imaging of Active Zones in the Drosophila Neuromuscular Junction

の神経筋接合部（NMJ）<em&gt;キイロショウジョウバエ</em&gt;正常なシナプス機能だけでなく、特定の神経疾患に見られるシナプス機能への摂動を研究するための重要なモデル系である。我々は解剖のためのプロトコルを提示<em&gt;ショウジョウバエ</emNMJ内のアクティブゾーン蛋白質のための&gt;幼虫のモータシステムと免疫染色。

で、アクティブなゾーンの解剖とイメージングショウジョウバエ神経筋接合部

The Drosophila  larvae neuromuscular junction (NMJ) is an excellent model for the study of synaptic structure and function. Drosophila  is well known for ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Imaging of Active Zones in the Drosophila Neuromuscular Junction

Single Drosophila Ommatidium Dissection and Imaging

Single Drosophila Ommatidium Dissection and Imaging

シングルショウジョウバエ個眼の解剖とイメージング

The fruit fly Drosophila melanogaster has made invaluable contributions to neuroscience research and has been used widely as a model for neurodegenerative ...

Sequential Photo-bleaching to Delineate Single Schwann Cells at the Neuromuscular Junction

シーケンシャル神経筋接合部におけるシングルシュワン細胞の輪郭を描くのにフォトブリーチング

Sequential photo-bleaching provides a non-invasive way to label individual SCs at the NMJ. The NMJ is the largest synapse of the mammalian nervous system ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

全マウント神経筋接合解析のための トランス対アブドミン筋 の解剖

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Detection of In Situ Protein-protein Complexes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction Using Proximity Ligation Assay

Detection of In Situ Protein-protein Complexes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction Using Proximity Ligation Assay

の検出<em&gt;その場で</emで&gt;タンパク質 - タンパク質複合体<em&gt;ショウジョウバエ</em近接ライゲーションアッセイの使用&gt;幼虫神経筋接合部

Discs large (Dlg) is a conserved member of the membrane-associated guanylate kinase family, and serves as a major scaffolding protein at the larval ...

The Neuromuscular Junction: Measuring Synapse Size, Fragmentation and Changes in Synaptic Protein Density Using Confocal Fluorescence Microscopy

神経筋接合部：測定シナプスサイズ、断片化および共焦点蛍光顕微鏡を用いてシナプスタンパク質の密度の変化

The neuromuscular junction (NMJ) is the large, cholinergic relay synapse through which mammalian motor neurons control voluntary muscle contraction. ...

Why Quantification Matters: Characterization of Phenotypes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

Why Quantification Matters: Characterization of Phenotypes at the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

なぜ定量事項：での表現型のキャラクタリゼーション<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;幼虫の神経筋接合部

Most studies on morphogenesis rely on qualitative descriptions of how anatomical traits are affected by the disruption of specific genes and genetic ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

大人のホールマウントの準備のためのシンプルなワンステップ解剖プロトコル<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;ブレインズ

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Measuring Neuromuscular Junction Functionality

神経筋接合部機能を測定

Neuromuscular junction (NMJ) functionality plays a pivotal role when studying diseases in which the communication between motor neuron and muscle is ...

Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology

Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology

高スループットとのマルチパラメトリック定量化のための2個のアルゴリズム<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;神経筋接合部形態

Synaptic morphology is tightly related to synaptic efficacy, and in many cases morphological synapse defects ultimately lead to synaptic malfunction. The ...

Focal Macropatch Recordings of Synaptic Currents from the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

Focal Macropatch Recordings of Synaptic Currents from the Drosophila Larval Neuromuscular Junction

ショウジョウバエ幼虫神経筋接合部のシナプス電流の焦点 Macropatch 録音

Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an excellent model system to study glutamatergic synaptic transmission. We describe the technique of focal ...