Name: generation of neural stem cells from discarded human fetal cortical tissue
Uploaded: 2011-05-25T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue at JoVE.com

وأيد هذا العمل في جزء من المعاهد الوطنية للصحة : HD054347 وNS063997 - 01 إلى VLS. كما أيد هذا العمل في جزء من صندوق الدولة الإمبراطورية الخلايا الجذعية من خلال إدارة ولاية نيويورك للصحة العقد # C024324 لVLS. الآراء التي أعرب عنها هنا هي فقط تلك التي للمؤلف ، ولا تعبر بالضرورة عن مجلس الدولة الإمبراطورية الخلايا الجذعية ، وولاية نيويورك وزارة الصحة ، أو ولاية نيويورك. VLS هو عالم دوريس ديوك السريرية التنموي مستلم الجائزة. كما نشكر الأستاذ تيموثي فارتانيان عن هديته المضادة للأجسام المضادة للO1 O4.

1. تحضير محاليل ومواد للتشريح وصيانة الجذعية العصبية خلية ثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد 100ML المتوسطة تشريح (خروج المغلوب DMEM/F12 ، Invitogen) في وقت سابق والثلاجة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Prepare100 مستنبت مل (الجذعية برو NSC SFM ، Invitrogen) والاحتفاظ ب...

<ol>
	<li>Gage, F. H., Ray, J., Fisher, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+characterization,+and+use+of+stem+cells+from+the+CNS.">Isolation, characterization, and use of stem cells from the CNS.</a> Annu. Rev. Neurosci. 18, 159-192 (1995).</li><li>Vescovi, A. L., Snyder, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+properties+of+neural+stem+cell+clones:+plasticity+in+vitro+and+in+vivo.">Establishment and properties of neural stem cell clones: plasticity in vitro and in vivo.</a> Brain Pathol. 9, 569-598 (1999).</li><li>Schwartz, P., Bryant, P., Fuja, T., Su, H., O'Dowd, D., Klassen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+neural+progenitor+cells+from+post-mortem+human+cortex.">Isolation and characterization of neural progenitor cells from post-mortem human cortex.</a> J Neurosci Res. 74, 838-851 (2003).</li><li>Martinez-Serrano, A., Rubio, F. J., Navarro, B., Bueno, C., Villa, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+neural+stem+and+progenitor+cells:+in+vitro+and+in+vivo+properties,+and+potential+for+gene+therapy+and+cell+replacement+in+the+CNS.">Human neural stem and progenitor cells: in vitro and in vivo properties, and potential for gene therapy and cell replacement in the CNS.</a> Curr Gene Ther. 1, 279-299 (2001).</li><li>Rajan, P., Snyder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cells+and+their+manipulation.">Neural stem cells and their manipulation.</a> Methods Enzymol. 419, 23-52 (2006).</li><li>Ruiz-Lozano, P., Rajan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells+as+in+vitro+models+of+disease.">Stem cells as in vitro models of disease.</a> Curr Stem Cell Res Ther. 2, 280-292 (2007).</li><li>Sheen, V., Ferland, R., Harney, M., Hill, R., Neal, J., Banham, A., Brown, P., Chenn, A., Corbo, J., Hecht, J., Folkerth, R., Walsh, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+proliferation+and+migration+in+human+Miller-Dieker+neural+precursors.">Impaired proliferation and migration in human Miller-Dieker neural precursors.</a> Ann Neurol. 60, 137-144 (2006).</li><li>Bahn, S., Mimmack, M., Ryan, M., Caldwell, M., Jauniaux, E., Starkey, M., Svendsen, C., Emson, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+target+genes+of+the+neuron-restrictive+silencer+factor+in+neurospheres+derived+from+fetuses+with+Down's+syndrome:+a+gene+expression+study.">Neuronal target genes of the neuron-restrictive silencer factor in neurospheres derived from fetuses with Down's syndrome: a gene expression study.</a> Lancet. 359, 310-315 (2002).</li><li>Ferland, R. J., Batiz, L. F., Neal, J., Lian, G., Bundock, E., Lu, J., Hsiao, Y. C., Diamond, R., Mei, D., Banham, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+neural+progenitors+along+the+ventricular+and+subventricular+zones+in+periventricular+heterotopia.">Disruption of neural progenitors along the ventricular and subventricular zones in periventricular heterotopia.</a> Hum Mol Genet. 18, 497-516 (2009).</li><li>Esposito, G., Imitola, J., Lu, J., De Filippis, D., Scuderi, C., Ganesh, V. S., Folkerth, R., Hecht, J., Shin, S., Iuvone, T., Chesnut, J., Steardo, L., Sheen, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+and+functional+profiling+of+human+Down+syndrome+neural+progenitors+implicates+S100B+and+aquaporin+4+in+cell+injury.">Genomic and functional profiling of human Down syndrome neural progenitors implicates S100B and aquaporin 4 in cell injury.</a> Hum Mol Genet. 17, 440-457 (2008).</li><li>Esposito, G., Scuderi, C., Lu, J., Savani, C., De Filippis, D., Iuvone, T., Steardo, L. J. r., Sheen, V., Steardo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=S100B+induces+tau+protein+hyperphosphorylation+via+Dickopff-1+up-regulation+and+disrupts+the+Wnt+pathway+in+human+neural+stem+cells.">S100B induces tau protein hyperphosphorylation via Dickopff-1 up-regulation and disrupts the Wnt pathway in human neural stem cells.</a> J Cell Mol Med. 12, 914-927 (2008).</li><li>Flax, J. D., Aurora, S., Yang, C., Simonin, C., Wills, A. M., Billinghurst, L. L., Jendoubi, M., Sidman, R. L., Wolfe, J. H., Kim, S. U., Snyder, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engraftable+human+neural+stem+cells+respond+to+developmental+cues,+replace+neurons,+and+express+foreign+genes.">Engraftable human neural stem cells respond to developmental cues, replace neurons, and express foreign genes.</a> Nat Biotechnol. 16, 1033-1039 (1998).</li><li>Fults, D., Pedone, C. A., Morse, H. G., Rose, J. W., McKay, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+and+characterization+of+a+human+primitive+neuroectodermal+tumor+cell+line+from+the+cerebral+hemisphere.">Establishment and characterization of a human primitive neuroectodermal tumor cell line from the cerebral hemisphere.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 51, 272-280 (1992).</li><li>Conti, L., Cattaneo, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+stem+cell+systems:+physiological+players+or+in+vitro+entities?.">Neural stem cell systems: physiological players or in vitro entities?.</a> Nat Rev Neurosci. 11, 176-187 (2010).</li><li>Svendsen, C. N., ter Borg, M. G., Armstrong, R. J., Rosser, A. E., Chandran, S., Ostenfeld, T., Caldwell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+rapid+and+long+term+growth+of+human+neural+precursor+cells.">A new method for the rapid and long term growth of human neural precursor cells.</a> J Neurosci Methods. 85, 141-152 (1998).</li></ol>

هناك نهج مختلف تجاه نسيج ثقافة جديدة وانتاج خطوط الخلايا البشرية. تاريخيا ، لم تحصد أنسجة جديدة وتربيتها على الفور لتوليد مختلف أنواع الخلايا في الجهاز العصبي المركزي. هذا النهج غير محدودة بشكل واضح من قبل عدد من العينات التي يمكن الحصول عليها والتي في حالة العينات ا...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> خروج المغلوب DMEM/F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 12660-012 </td><td> تفارق المتوسطة </td></tr><tr><td> الجذعية برو NSC SFM </td><td> Invitrogen </td><td> A10509 - 01 </td><td> مستنبت </td></tr><tr><td> المصل البقري الجنين </td><td> Invitrogen </td><td> 10091-148 </td><td> المجمدة المتوسطة </td></tr><tr><td> هانكس الحل (ولاية كاليفورنيا 2 + ، 2 + - MG) </td><td> Invitrogen </td><td> 14175-095 </td><td> تفارق المتوسطة </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> سيغما الدريخ </td><td> D2650 </td><td> المجمدة المتوسطة </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 431788 </td><td> تفارق المتوسطة </td></tr><tr><td> بارافورمالدهيد </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 158127 </td><td> تثبيت الحل </td></tr><tr><td> bFGF </td><td> R &amp; D </td><td> 234 - FSE </td><td> تمايز المتوسطة </td></tr><tr><td> SHH </td><td> R &amp; D </td><td> 1845 - SH </td><td> تمايز المتوسطة </td></tr><tr><td> PDGF - AA </td><td> R &amp; D </td><td> 221 - AA </td><td> تمايز المتوسطة </td></tr><tr><td> B27 </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td><td> تمايز المتوسطة </td></tr><tr><td> الماوس المضادة للMAP2 </td><td> سيغما الدريخ </td><td> M2320 </td><td> 1:200 </td></tr><tr><td> أرنب المضادة للDCX </td><td> إشارات الخلية </td><td> 4604s </td><td> 1:200 </td></tr><tr><td> أرنب المضادة للGFAP </td><td> داكو </td><td> Z0334 </td><td> 1:200 </td></tr><tr><td> أرنب المضادة للS100B </td><td> داكو </td><td> Z0311 </td><td> 1:200 </td></tr><tr><td> أرنب المضادة للO1 </td><td> الهدايا البروفسور تيموثي فارتانيان * </td><td></td><td> 01:50 </td></tr><tr><td> أرنب المضادة للO4 </td><td> الهدايا البروفسور تيموثي فارتانيان * </td><td></td><td> 01:50 </td></tr><tr><td> 40μm الخلية مصفاة </td><td> فالكون دينار بحريني </td><td> 352340 </td><td></td></tr></tbody></table> * تيموثي فارتانيان ، دكتوراه في الطب ، دكتوراه ، وإدارة الولايات المتحدة الأمريكية الأعصاب وعلم الأعصاب ، كلية طب وايل كورنيل في نيويورك ،

generation of neural stem cells from discarded human fetal cortical tissue

الخلايا الجذعية العصبية (NSCs) يقيمون على طول منطقة البطين الظهارة العصبية خلال وضع لوحة القشرية. هذه الأسلاف في وقت مبكر يعطي في نهاية المطاف إلى ظهور الأسلاف والمتوسطة في وقت لاحق. مختلف أنواع فرعية الخلية العصبية والدبقية التي تشكل القشرة الدماغية القدرة على توليد وتوسيع NSCs الإنسان (ما يسمى neurospheres) من أنسجة الأجنة تجاهل العادي مع توفر وسيلة للدراسة بشكل مباشر على الجوانب الوظيفية العادية التنمية البشرية NSC 1-5. ويمكن أيضا أن يكون هذا النهج الموجه نحو جيل من NSCs من الاضطرابات العصبية المعروفة ، مما يتيح الفرصة لتحديد العمليات التي تغير انتشار المرض السلف ، والهجرة ، وتمايز 6-9. وقد ركزنا على تحديد الآليات المرضية في الإنسان NSCs متلازمة داون التي قد تساهم في مرض الزهايمر النمط الظاهري لتسريع 10،11. ولا يستطيع أحد في الجسم الحي ، ولا في نماذج الماوس المختبر تكرار ذخيرة مماثلة من الجينات الموجودة على الكروموسوم البشري 21. هنا نستخدم طريقة بسيطة وموثوق بها لعزل متلازمة داون NSCs من القشور أجهضت الجنين البشري وزرعها في الثقافة. المنهجية توفر جوانب محددة من حصاد الأنسجة ، والتشريح مع معالم التشريحية محدودة ، والفرز الخلية ، والطلاء ، والركض من NSCs الإنسان. كما نقوم بتوفير بعض البروتوكولات الأساسية لإحداث تمايز NSCs الإنسان في خلية فرعية أكثر انتقائية.

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue at JoVE.com

Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue

ووصف طريقة بسيطة وموثوق بها عن العزلة وثقافة من الخلايا الجذعية العصبية من أنسجة الأجنة البشرية تجاهل القشرية. ويمكن استخدام الثقافات المستمدة من الاضطرابات العصبية يعرف الإنسان المرضية لتوصيف العمليات الخلوية والجزيئية ، فضلا عن توفير منبر لتقييم فعالية العقاقير.

جيل من الخلايا الجذعية العصبية من الأنسجة الجنينية البشرية المهملة القشرية

Neural stem cells (NSCs) reside along the ventricular zone neuroepithelium during the development of the cortical plate. These early progenitors ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

العصبية تشكيل مستعمرة الفحص الخلوي : إن الفحص تميز بحسن نية الخلايا الجذعية العصبية من الخلايا العصبية السلف

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

العزلة وثقافة العصبية الخلايا الجذعية من بصيلات الشعر كريست الإنسان

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

الفحص Neuroblast: والفحص للانشاء وإثراء خلايا متعلق بالخلايا العصبية السلف من التفريق العصبية الجذعية آله الخلية باستخدام التدفق الخلوي

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

العزلة والثقافة من الخلايا العصبية كريست من الأنبوبة العصبية الجنينية الفئران

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Progenitor-derived Oligodendrocyte Culture System from Human Fetal Brain

السلف المستمدة من نظام الثقافة دبقية قليلة التغصن من دماغ الجنين البشري

Differentiation of human neural progenitors into neuronal and glial cell types offers a model to study and compare molecular regulation of neural cell ...

A cGMP-applicable Expansion Method for Aggregates of Human Neural Stem and Progenitor Cells Derived From Pluripotent Stem Cells or Fetal Brain Tissue

وهناك طريقة توسيع المركب-ينطبق على مجاميع من العصبية الجذعية البشرية والخلايا المشتقة من الخلايا السلف الجذعية المحفزة أو الجنين أنسجة المخ

A cell expansion technique to amass large numbers of cells from a single specimen for research experiments and clinical trials would greatly benefit the ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

خالية من التغذية اشتقاق الخلايا العصبية كريست السلف من افرة القوة البشرية الخلايا الجذعية

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

النمذجة الخلايا النجمية إمراض<em&gt; في المختبر</em&gt; و<em&gt; في فيفو</em&gt; استخدام القشرية النجمية أو الخلايا الجذعية العصبية من الشرطي، الفئران المهندسة وراثيا

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

العزلة والثقافة من الخلايا الجذعية البالغة العصبية من المنطقة تحت الثفني ماوس

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Development of a Refined Protocol for Trans-scleral Subretinal Transplantation of Human Retinal Pigment Epithelial Cells into Rat Eyes

وضع البروتوكول المكرر لزرع الخلايا الظهارية الصبغية الشبكية البشرية ترانس-سكليرال سوبريتينال في عيون الفئران

Degenerative retinal diseases such as age-related macular degeneration (AMD) are the leading cause of irreversible vision loss worldwide. AMD is ...