Name: generation of neural stem cells from discarded human fetal cortical tissue
Uploaded: 2011-05-25T12:00:00
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Este trabalho foi financiado em parte pelos Institutos Nacionais de Saúde: HD054347 e NS063997-01 a VLS. Este trabalho também foi apoiado em parte pelo Fundo Célula-tronco através de Empire State de Nova York Secretaria de Estado da Saúde Contrato # C024324 para VLS. As opiniões aqui expressas são da exclusiva responsabilidade do autor e não necessariamente refletem as do Conselho de Célula-Tronco Empire State, o New York State Department of Health, ou o Estado de Nova York. VLS é um Doris Duke Clinical Scientist Award Recipient Desenvolvimento. Agradecemos também Professor Timothy Vartanian por seu dom de Anti-O1, Anti-O4 anticorpos.

1. Preparação de soluções e materiais para dissecção e manutenção da cultura de células-tronco neurais <ol><li> Prepare 100 ml de médio dissecção (KNOCKOUT DMEM/F12, Invitogen) antes do tempo e leve à geladeira. </li><li> Prepare100 meio de cultura ml (Stem Pro NSC SFM, Invitrogen) e manter a 37 ° C em banho-maria. </li><li> Prepare-congelamento de células médias (10% KNOCKOUT DMEM/F12 FBS + DMSO 5%) para a criopreservação das células a longo prazo. </li><li> Se desejar, prepare paraformaldeído a 4...

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	<li>Gage, F. H., Ray, J., Fisher, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+characterization,+and+use+of+stem+cells+from+the+CNS.">Isolation, characterization, and use of stem cells from the CNS.</a> Annu. Rev. Neurosci. 18, 159-192 (1995).</li><li>Vescovi, A. L., Snyder, E. 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S., Folkerth, R., Hecht, J., Shin, S., Iuvone, T., Chesnut, J., Steardo, L., Sheen, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+and+functional+profiling+of+human+Down+syndrome+neural+progenitors+implicates+S100B+and+aquaporin+4+in+cell+injury.">Genomic and functional profiling of human Down syndrome neural progenitors implicates S100B and aquaporin 4 in cell injury.</a> Hum Mol Genet. 17, 440-457 (2008).</li><li>Esposito, G., Scuderi, C., Lu, J., Savani, C., De Filippis, D., Iuvone, T., Steardo, L. J. r., Sheen, V., Steardo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=S100B+induces+tau+protein+hyperphosphorylation+via+Dickopff-1+up-regulation+and+disrupts+the+Wnt+pathway+in+human+neural+stem+cells.">S100B induces tau protein hyperphosphorylation via Dickopff-1 up-regulation and disrupts the Wnt pathway in human neural stem cells.</a> J Cell Mol Med. 12, 914-927 (2008).</li><li>Flax, J. D., Aurora, S., Yang, C., Simonin, C., Wills, A. M., Billinghurst, L. L., Jendoubi, M., Sidman, R. L., Wolfe, J. H., Kim, S. U., Snyder, E. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engraftable+human+neural+stem+cells+respond+to+developmental+cues,+replace+neurons,+and+express+foreign+genes.">Engraftable human neural stem cells respond to developmental cues, replace neurons, and express foreign genes.</a> Nat Biotechnol. 16, 1033-1039 (1998).</li><li>Fults, D., Pedone, C. A., Morse, H. G., Rose, J. W., McKay, R. 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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+method+for+the+rapid+and+long+term+growth+of+human+neural+precursor+cells.">A new method for the rapid and long term growth of human neural precursor cells.</a> J Neurosci Methods. 85, 141-152 (1998).</li></ol>

Existem várias abordagens para a cultura de tecidos frescos e produzir linhas de células humanas. Historicamente, tecido fresco foi colhido e imediatamente cultivadas para gerar vários tipos de células no sistema nervoso central. Essa abordagem, porém, é claramente limitado pelo número de amostras que podem ser obtidos, que no caso de amostras humanas, é geralmente muito pequena. Dado o grau mínimo de manipulação, recém-cultura de células neurais fornecer o sistema mais confiável experimental, limitando ar...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome do reagente </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentários (opcional) </th></tr><tr><td> KNOCKOUT DMEM/F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 12660-012 </td><td> Dissociação médio </td></tr><tr><td> Pro-tronco NSC SFM </td><td> Invitrogen </td><td> A10509-01 </td><td> Meio de cultura </td></tr><tr><td> Soro fetal bovino </td><td> Invitrogen </td><td> 10091-148 </td><td> Médio congelados </td></tr><tr><td> Hanks solução (-Ca 2 +,-Mg 2 +) </td><td> Invitrogen </td><td> 14175-095 </td><td> Dissociação médio </td></tr><tr><td> DMSO </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D2650 </td><td> Médio congelados </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 431788 </td><td> Dissociação médio </td></tr><tr><td> Paraformaldeído </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 158127 </td><td> Solução de fixação </td></tr><tr><td> bFGF </td><td> R &amp; D </td><td> 234-FSE </td><td> Meio de diferenciação </td></tr><tr><td> SHH </td><td> R &amp; D </td><td> 1845-SH </td><td> Meio de diferenciação </td></tr><tr><td> PDGF-AA </td><td> R &amp; D </td><td> 221-AA </td><td> Meio de diferenciação </td></tr><tr><td> B27 </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td><td> Meio de diferenciação </td></tr><tr><td> Rato Anti-MAP2 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M2320 </td><td> 1:200 </td></tr><tr><td> Coelho Anti-DCX </td><td> Sinalização celular </td><td> 4604s </td><td> 1:200 </td></tr><tr><td> Coelho anti-GFAP </td><td> DAKO </td><td> Z0334 </td><td> 1:200 </td></tr><tr><td> Coelho anti-S100B </td><td> DAKO </td><td> Z0311 </td><td> 1:200 </td></tr><tr><td> Coelho Anti-O1 </td><td> dons do Professor Timothy Vartanian * </td><td></td><td> 01:50 </td></tr><tr><td> Coelho Anti-O4 </td><td> Dons do Professor Timothy Vartanian * </td><td></td><td> 01:50 </td></tr><tr><td> 40μm coador celular </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td></td></tr></tbody></table> * Timothy Vartanian, MD, PhD, Departamento de Neurologia e de Neurociência, Weill Cornell Medical College, New York, EUA

generation of neural stem cells from discarded human fetal cortical tissue

Células-tronco neurais (NSCs) residem ao longo da zona neuroepitélio ventricular durante o desenvolvimento da placa cortical. Estes progenitores início em última análise, dar origem a células progenitoras intermediário e depois, os vários subtipos de células neuronais e gliais que formam o córtex cerebral. A capacidade de gerar e expandir NSCs humanos (chamados neurospheres) de tecido normal descartados fetal fornece um meio com o qual a estudar diretamente os aspectos funcionais do desenvolvimento humano normal NSC 1-5. Esta abordagem também pode ser direcionado para a geração de NSCs a partir da conhecida distúrbios neurológicos, assim proporcionando a oportunidade de identificar processos de doenças que alteram a proliferação de células progenitoras, migração e diferenciação 6-9. Temos focado na identificação de mecanismos patológicos em humanos NSCs síndrome de Down que possam contribuir para o fenótipo da doença de Alzheimer acelerada 10,11. Nem in vivo, nem em modelos in vitro do mouse pode replicar o repertório idêntico de genes localizados no cromossomo humano 21. Aqui nós usamos um método simples e confiável para isolar Baixo NSCs síndrome de humano abortado córtex fetal e cultivá-las em cultura. A metodologia fornece aspectos específicos da colheita do tecido dissecção, com referências anatômicas limitadas, separação de células, revestimento e passaging de NSCs humana. Nós também fornecemos alguns protocolos básicos para induzir diferenciação de NSCs humana em subtipos de células mais seletivo.

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Generation of Neural Stem Cells from Discarded Human Fetal Cortical Tissue

Um método simples e confiável sobre o isolamento e cultura de células-tronco neurais de tecido fetal humano descartado cortical é descrito. Derivados de culturas humanas conhecidas doenças neurológicas podem ser usados ​​para a caracterização de processos patológicos celular e molecular, bem como fornecer uma plataforma para avaliar a eficácia farmacológica.

Geração de células-tronco neurais de Discarded tecido fetal humano Cortical

Neural stem cells (NSCs) reside along the ventricular zone neuroepithelium during the development of the cortical plate. These early progenitors ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

Neurais Colony-Forming Assay Cell: um ensaio para Discriminar Bona Fide células-tronco neurais de células progenitoras neurais

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Neurociência

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

Isolamento e Cultura de células da crista neural-tronco de folículos capilares humanos

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

O Ensaio neuroblasto: um ensaio para a Geração e Enriquecimento de células progenitoras neuronais de Diferenciando Progeny Neural Stem Cell utilizando citometria de fluxo

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

Isolamento e cultivo de células da crista neural do tubo neural embrionário murino

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Progenitor-derived Oligodendrocyte Culture System from Human Fetal Brain

Progenitor derivado Sistema de Cultura oligodendroglial Cérebro Fetal Humano

Differentiation of human neural progenitors into neuronal and glial cell types offers a model to study and compare molecular regulation of neural cell ...

A cGMP-applicable Expansion Method for Aggregates of Human Neural Stem and Progenitor Cells Derived From Pluripotent Stem Cells or Fetal Brain Tissue

Um Método de Expansão cGMP-aplicável para Agregados de Neural Humano-tronco e células progenitoras derivadas de células-tronco pluripotentes ou tecido cerebral do feto

A cell expansion technique to amass large numbers of cells from a single specimen for research experiments and clinical trials would greatly benefit the ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Derivação sem alimentador de células da crista neural progenitoras pluripotentes humanas de células-tronco

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Modeling Astrocytoma Pathogenesis In Vitro and In Vivo Using Cortical Astrocytes or Neural Stem Cells from Conditional, Genetically Engineered Mice

Modelagem astrocitoma Patogênese<em&gt; In Vitro</em&gt; E<em&gt; In Vivo</em&gt; Usando Cortical astrócitos ou células-tronco neurais de condicional, Geneticamente Modificadas Ratos

Current astrocytoma models are limited in their ability to define the roles of oncogenic mutations in specific brain cell types during disease ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Isolamento e Cultura de células estaminais adultas neurais do Subcallosal Zona Rato

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Development of a Refined Protocol for Trans-scleral Subretinal Transplantation of Human Retinal Pigment Epithelial Cells into Rat Eyes

Desenvolvimento de um protocolo refinado para Trans-escleral apresentam transplante de células epiteliais de pigmento Retinal humano nos olhos de rato

Degenerative retinal diseases such as age-related macular degeneration (AMD) are the leading cause of irreversible vision loss worldwide. AMD is ...