Name: imaging glycans in zebrafish embryos by metabolic labeling and bioorthogonal click chemistry
Uploaded: 2011-06-06T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging Glycans in Zebrafish Embryos by Metabolic Labeling and Bioorthogonal Click Chemistry at JoVE.com

और मेडिसिन के अल्बर्ट आइंस्टीन कॉलेज से स्टार्टअप धन, इस काम आंशिक रूप से स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान (RDS 3U54AI057158-06S1 GM093282 पीडब्लू) द्वारा समर्थित किया गया.

1. अंडे संग्रह और Dechorionation <ol><li> लीजिए और 35 मिमी पेट्री डिश zebrafish अंडे हस्तांतरण करने के लिए, संभव के रूप में ज्यादा पानी के रूप में हटा दें और फिर 1 मिलीग्राम / एमएल E3 भ्रूण मध्यम में Pronease ई (5 मिमी NaCl, 0.17 मिमी KCl, .33 मि?...

<ol>
	<li>Laughlin, S. T., Bertozzi, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+glycome.">Imaging the glycome.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106, 12-17 (2009).</li><li>Baskin, J. M., Bertozzi, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioorthogonal+click+chemistry:+Covalent+labeling+in+living+systems.">Bioorthogonal click chemistry: Covalent labeling in living systems.</a> Qsar Comb. Sci. 26, 1211-1219 (2007).</li><li>Soriano del Amo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocompatible+copper(I)+catalysts+for+in+vivo+imaging+of+glycans.">Biocompatible copper(I) catalysts for in vivo imaging of glycans.</a> J. Am. Chem. Soc. 132, 16893-16899 (2010).</li><li>Chang, P. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+labeling+of+sialic+acids+in+living+animals+with+alkynyl+sugars.">Metabolic labeling of sialic acids in living animals with alkynyl sugars.</a> Angew. Chem. Int. Ed. 48, 4030-4033 (2009).</li><li>Laughlin, S. T., Baskin, J. M., Amacher, S. L., Bertozzi, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+membrane-associated+glycans+in+developing+zebrafish.">In vivo imaging of membrane-associated glycans in developing zebrafish.</a> Science. 320, 664-667 (2008).</li><li>Baskin, J. M., Dehnert, K. W., Laughlin, S. T., Amacher, S. L., Bertozzi, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+enveloping+layer+glycans+during+zebrafish+early+embryogenesis.">Visualizing enveloping layer glycans during zebrafish early embryogenesis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 107, 10360-10365 (2010).</li><li>Kemp, H. A., Carmany-Rampey, A., Moens, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generating+chimeric+zebrafish+embryos+by+transplantation.">Generating chimeric zebrafish embryos by transplantation.</a> J. Vis. Exp. , (2009).</li><li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemoenzymatic+synthesis+of+GDP-L-fucose+and+the+Lewis+X+glycan+derivatives.">Chemoenzymatic synthesis of GDP-L-fucose and the Lewis X glycan derivatives.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106, 16096-16101 (2009).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+zebrafish+embryos+to+analyze+gene+function.">Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function.</a> J. Vis. Exp. , (2009).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> THE ZEBRAFISH BOOK, A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2007).</li><li>Kimmel, C. B., Warga, R. M., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+organization+of+the+zebrafish+fate+map.">Origin and organization of the zebrafish fate map.</a> Development. 108, 581-594 (1990).</li></ol>

<p class="jove_content"&gt; इमेजिंग biomolecules<em&gt; Vivo में</em&gt; उनके पैतृक वातावरण में उनके जैविक गतिविधियों के महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान करता है है. इस वीडियो में, हम का प्रदर्शन कैसे zebrafish भ्रूण की परत घेर में fucosylated glycans की लेबलिंग BTTES की म...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक के नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचि संख्या </td></tr><tr><td> कॉपर सल्फेट Pentahydrate (द्वितीय) </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> 203165 </td></tr><tr><td> एलेक्सा 488 azide Fluor </td><td> Invitrogen </td><td> A10266 </td></tr><tr><td> dextran, Alexa Fluor 594 </td><td> Invitrogen </td><td> डी - 22,913 </td></tr><tr><td> (+) के एल एस्कॉर्बेट सोडियम </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> A7631 </td></tr><tr><td> Bathocuproinedisulfonic एसिड </td><td> Acros ऑर्गेनिक्स </td><td> 164060010 </td></tr><tr><td> ग्लास नीचे microwell पकवान </td><td> MatTek </td><td> P35G 1.5-14 - सी </td></tr></tbody></table>

imaging glycans in zebrafish embryos by metabolic labeling and bioorthogonal click chemistry

हाल ही में vivo में इमेजिंग glycans azide या alkyne टैग 1 monosaccharides, 2 के साथ कोशिकाओं या जीवों के इलाज के द्वारा किया गया एक bioorthogonal रासायनिक संवाददाता रणनीति का उपयोग सक्षम है. संशोधित monosaccharides, glycan biosynthetic मशीनरी द्वारा संसाधित, कोशिका की सतह glycoconjugates में शामिल हैं. bioorthogonal azide या alkyne टैग तो सहसंयोजक संयुग्मन दृश्य के लिए फ्लोरोसेंट जांच के साथ की अनुमति है, या संवर्धन और glycoproteomic विश्लेषण के लिए आत्मीयता जांच के साथ. इस प्रोटोकॉल आमतौर पर zebrafish भ्रूण में fucosylated glycans की noninvasive इमेजिंग के लिए प्रयोग किया जाता प्रक्रियाओं सहित वर्णन: 1) सकल घरेलू उत्पाद (जीडीपी FucAl) 5 - alkynylfucose, 2 के साथ एक सेल चरण भ्रूण के microinjection) घेर की परत में fucosylated glycans लेबलिंग biocompatible है घन (आई) - उत्प्रेरित cycloaddition azide-alkyne (CuAAC), और confocal माइक्रोस्कोपी 3 के द्वारा) 3 इमेजिंग के माध्यम से azide संयुग्मित fluorophores के साथ zebrafish भ्रूण . विधि यहाँ वर्णित आसानी से हो glycans के अन्य वर्गों, जैसे glycans सियालिक एसिड 4 और 5 एन acetylgalactosamine, 6 युक्त, विकासशील zebrafish में और अन्य जीवित जीवों में कल्पना करने के लिए विस्तारित कर सकते हैं.

Watch this Scientific Journal Video about Imaging Glycans in Zebrafish Embryos by Metabolic Labeling and Bioorthogonal Click Chemistry at JoVE.com

Imaging Glycans in Zebrafish Embryos by Metabolic Labeling and Bioorthogonal Click Chemistry

एक क्लिक रसायन आधारित पद्धति है कि तेजी से, zebrafish भ्रूण में alkyne टैग glycans की noninvasive, और मजबूत लेबलिंग के लिए अनुमति देता है वर्णित है. इस अध्ययन में देर gastrulation चरण में zebrafish भ्रूण के घेर परत में Fucosylated glycans imaged थे.

Zebrafish भ्रूण में मेटाबोलिक लेबल और Bioorthogonal क्लिक करें रसायन विज्ञान के द्वारा इमेजिंग glycans

Imaging glycans in vivo has recently been enabled using a bioorthogonal chemical reporter strategy by treating cells or organisms with azide- or ...

Research

JoVE Journal

Biology

Two-photon axotomy and time-lapse confocal imaging in live zebrafish embryos

दो photon axotomy और लाइव zebrafish भ्रूण में समय चूक confocal इमेजिंग

Zebrafish have long been utilized to study the cellular and molecular mechanisms of development by time-lapse imaging of the living transparent embryo.  ...

Generating Chimeric Zebrafish Embryos by Transplantation

ट्रांसप्लांटेशन द्वारा chimeric Zebrafish भ्रूण उत्पन्न

One of the most powerful tools used to gain insight into complex developmental processes is the analysis of chimeric embryos. A chimera is defined as an ...

Transplantation of GFP-expressing Blastomeres for Live Imaging of Retinal and Brain Development in Chimeric Zebrafish Embryos

के ट्रांसप्लांटेशन GFP chimeric Zebrafish भ्रूण में रेटिना और मस्तिष्क के विकास के लाइव इमेजिंग के लिए Blastomeres व्यक्त

Cells change extensively in their locations and property during embryogenesis. These changes are regulated by the interactions between the cells and their ...

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

जहाँ रहते इमेजिंग सेल आकार बदलें ड्रोसोफिला भ्रूण

The developing Drosophila melanogaster embryo undergoes a number of cell shape changes that are highly amenable to live confocal imaging.  Cell shape ...

Metabolic Pathway Confirmation and Discovery Through 13C-labeling of Proteinogenic Amino Acids

Metabolic Pathway Confirmation and Discovery Through 13C-labeling of Proteinogenic Amino Acids

मेटाबोलिक मार्ग पुष्टिकरण और के माध्यम से डिस्कवरी<sup13> Proteinogenic एमिनो एसिड की सी लेबलिंग

Microbes have complex metabolic pathways that can be investigated using biochemistry and functional genomics methods. One important technique to examine ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

मेटाबोलिक लेबल और फ्लो के साथ कोशिका चक्र प्रगति कैनेटीक्स मापने

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Metabolic Profile Analysis of Zebrafish Embryos

Zebrafish भ्रूण के चयापचय प्रोफ़ाइल विश्लेषण

A growing goal in the field of metabolism is to determine the impact of genetics on different aspects of mitochondrial function. Understanding these ...

Metabolic Labeling of Leucine Rich Repeat Kinases 1 and 2 with Radioactive Phosphate

Leucine रिच के चयापचय लेबल रेडियोधर्मी फास्फेट के साथ Kinases 1 और 2 दोहराएँ

Leucine rich repeat kinases 1 and 2 (LRRK1 and LRRK2) are paralogs which share a similar domain organization, including a serine-threonine kinase domain, ...

Analysis of Oxidative Stress in Zebrafish Embryos

Zebrafish भ्रूण में oxidative तनाव का विश्लेषण

High levels of reactive oxygen species (ROS) may cause a change of cellular redox state towards oxidative stress condition. This situation causes ...

Semi-automated Imaging of Tissue-specific Fluorescence in Zebrafish Embryos

Zebrafish भ्रूण में ऊतक विशेष प्रतिदीप्ति की अर्द्ध स्वचालित इमेजिंग

Zebrafish embryos are a powerful tool for large-scale screening of small molecules. Transgenic zebrafish that express fluorescent reporter proteins are ...