Name: use of fluorescent immuno-chemistry for the detection of edwardsiella ictaluri in channel catfish (i. punctatus) samples
Uploaded: 2011-05-10T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish I. punctatus samples at JoVE.com

De auteurs willen de technische bijstand van Michelle Banes evenals dr. Petrie-Hanson, Dr Alen en Timothy Brown herkennen voor hun hulp het ontwikkelen en uitvoeren van de immunohistochemie. Dit project werd gefinancierd door USDA CRIS project # MISV-0801310 en door de Mississippi State University College of Veterinary Medicine.

<html> 1. Bacteriële uitdaging <ol><li> Groeien bacteriën &#39;s nachts bij 30 ° C in schudden Brain Heart Infusion bouillon. </li><li> Stop met water circulatie in de aquaria en voeg bouillon in de concentratie van 1 op de 100 (10 ml per liter, bijvoorbeeld). </li><li> Na een uur incubatie, start watercirculatie in de tanks te spoelen de resterende bacteriën. </li></ol> 2. Monsterneming <ol><li> Bemonsteringsduur en organen hangt af van het doel van de studie, maar in onze studie gebruikt...

<ol>
	<li>Plumb, J. A., Woo, P. T. K., Bruno, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fish Diseases and Disorders. , 479-479 (1998).</li><li>Roberts, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fish Pathology. , (2001).</li><li>Lawrence, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Louisiana State University. , (1997).</li><li>Nusbaum, K. E., Morrisson, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entry+of+35S-Labeled+Edwardsiella+ictaluri+into+Channel+Catfish.">Entry of 35S-Labeled Edwardsiella ictaluri into Channel Catfish.</a> Journal of Aquatic Animal Health. 8, 146-146 (1996).</li><li>Karsi, A., Menanteau-Ledouble, S., Lawrence, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+bioluminescent+Edwardsiella+ictaluri+for+noninvasive+disease+monitoring.">Development of bioluminescent Edwardsiella ictaluri for noninvasive disease monitoring.</a> FEMS Microbiology Letters. 260, 286-286 (2006).</li><li>Miyazaki, T., Plumb, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathology+of+Edwardsiella+ictaluri+in+channel+catfish,+Ictalurus+punctatus+(Rafinesque).">Histopathology of Edwardsiella ictaluri in channel catfish, Ictalurus punctatus (Rafinesque).</a> Journal of Fish Diseases. 8, 839-839 (1985).</li><li>Areechon, N., Plumb, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+Edwardsiella+ictaluri+in+Channel+Catfish,+Ictalurus+punctatus.">Pathogenesis of Edwardsiella ictaluri in Channel Catfish, Ictalurus punctatus.</a> Journal of the World Mariculture Society. 14, 249-249 (1983).</li><li>Dumpala, P. R., Lawrence, M. L., Karsi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteome+analysis+of+Edwardsiella+ictaluri.">Proteome analysis of Edwardsiella ictaluri.</a> Proteomics. 9, 1353-1353 (2009).</li><li>Thune, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signature-Tagged+Mutagenesis+of+Edwardsiella+ictaluri+Identifies+Virulence-Related+Genes,+Including+a+Salmonella+Pathogenicity+Island+2+Class+of+Type+III+Secretion+Systems.">Signature-Tagged Mutagenesis of Edwardsiella ictaluri Identifies Virulence-Related Genes, Including a Salmonella Pathogenicity Island 2 Class of Type III Secretion Systems.</a> Applied and Environmental Microbiology. 73, 7934-7934 (2007).</li><li>Karsi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+bioluminescence+mutant+screening+strategy+for+identification+of+bacterial+virulence+genes.">High-throughput bioluminescence mutant screening strategy for identification of bacterial virulence genes.</a> Applied and Environmental Microbiology. 75, 2166-2166 (2009).</li><li>Hook, E. W., Mandell, G. L., Douglas, G., Bennett, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles and Practices of Infectious Diseases. , 1700-1700 (1990).</li><li>Ainsworth, J., Capley, G., Waterstreet, P., Munson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+monoclonal+antibodies+in+the+indirect+fluorescent+antibody+technique+(IFA)+for+the+diagnosis+of+Edwardsiella+ictaluri.">Use of monoclonal antibodies in the indirect fluorescent antibody technique (IFA) for the diagnosis of Edwardsiella ictaluri.</a> Journal of Fish Diseases. 9, 439-439 (1986).</li></ol>

Dit protocol details een techniek voor de in situ visualisatie van de meerval pathogeen Edwardsiella ictaluri in histologische secties. Om het beste van onze kennis, is dit de eerste beschreven dergelijk protocol. De meest kritische stap, in onze ervaring, is het spoelen van de antilichamen zoals beschreven in de stap 4.4 van het huidige protocol, omdat onvoldoende wassen kan leiden tot valse positieve. Het grootste probleem met het interpretere...

<table border="1"><tbody><tr><th> Naam van het serum </th><th> Vennootschap </th><th> Catalogus nummer </th></tr><tr><td> Brain Infusion bouillon </td><td> Becton Dickinson </td><td> 237200 </td></tr><tr><td> MS222 </td><td> Argent Labs </td><td></td></tr><tr><td> Hele muis Serum </td><td> Cappel </td><td> 55989 </td></tr><tr><td> Geit anti-muis FITC </td><td> Zuid-Biotech </td><td> 1010-1004 </td></tr><tr><td> Permafluor </td><td> Lab Vision </td><td> Ta-030-FM </td></tr><tr><td> Kaliumchloride (KCl) </td><td> Sigma </td><td> P-4504 </td></tr><tr><td> Triton-X </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> X100-6X500ML </td></tr><tr><td> Bovine Serum Albumine </td><td> Sigma </td><td> 85040C </td></tr><tr><td> Kaliumfosfaat (KH 2 PO 4) </td><td> Sigma </td><td> P-5379 </td></tr><tr><td> Natriumbicarbonaat (NaHCO 3) </td><td> Sigma </td><td> S-5761 </td></tr><tr><td> Natriumchloride (NaCal) </td><td> Sigma </td><td> S-9625 </td></tr><tr><td> Dibasisch (Na 2 HPO 4) </td><td> Sigma </td><td> S-9390 </td></tr></tbody></table>

use of fluorescent immuno-chemistry for the detection of edwardsiella ictaluri in channel catfish (i. punctatus) samples

Terwijl Edwardsiella ictaluri is een belangrijke ziekteverwekker van kanaal meerval Ictalurus punctatus en heeft ontdekt bijna drie decennia geleden 1,2, tot nu toe, om de beste van deze auteurs de kennis, is geen methode ontwikkeld om voor het laten in situ visualisatie van de bacteriën in histologische secties. Terwijl de bacteriële lokalisatie is vastgesteld in vivo in eerdere studies met plaattellingen 3, radiometrische gelabeld 4 of 5 bioluminescente bacteriën, zijn de meeste van deze studies is alleen uitgevoerd op de bruto-orgel niveau, met een uitzondering 6. Deze beperking is van bijzonder belang, omdat E. ictaluri heeft een complexe infectie cyclus 1,7, en het heeft een aantal virulentiefactoren 8,9. De complexe interactie van E. ictaluri met zijn gastheer is in veel opzichten vergelijkbaar met Salmonella typhi 10, die in dezelfde taxonomische familie. Hier beschrijven we een techniek waardoor de detectie van bacteriën met behulp van indirecte immuno-histochemie met behulp van het monoklonale antilichaam Ed9 beschreven door Ainsworth et al.. 11. In het kort, is een blokkerende serum toegepast op paraffine ingebedde histologische secties van niet-specifieke afwachtende voorkomen. Vervolgens worden de secties geïncubeerd met het primaire antilichaam: E. ictaluri specifieke monoklonale antilichaam Ed9. Overtollige antilichamen zijn weggespoeld en de FITC gemerkte secundaire antilichamen worden toegevoegd. Na het spoelen, zijn de secties gemonteerd met een fluorescerende specifieke montage-medium. Dit toegestaan ​​voor de detectie van E. ictaluri in situ in histologische secties van het kanaal meerval weefsels.

Watch this Scientific Journal Video about Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish I. punctatus samples at JoVE.com

Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish I. punctatus samples

Hier beschrijven we een procedure om de etikettering van<em&gt; Edwardsiella ictaluri in situ</em&gt; In histologische secties van kanaal meerval<em&gt; Ictalurus punctatus</em&gt; Met behulp van indirecte immunohistochemie met monoklonale antilichamen Ed9 als een primaire, en fluorescerende FITC gelabelde antilichamen als een secundaire. Dit toegestaan ​​voor de detectie van de bacterie met behulp van fluorescentie microscopie.

Het gebruik van TL-Immuno-Chemie voor de detectie van Edwardsiella ictaluri In kanaal meerval ( I. punctatus) Monsters

While Edwardsiella ictaluri is a major pathogen of channel catfish Ictalurus punctatus and has been discovered nearly 
three decades ago 1,2, so far, to ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish (I. punctatus) samples

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combinatie van Adhesive-tape-gebaseerde Sampling en fluorescentie In situ Hybridisatie voor snelle detectie van Salmonella Op Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Multiplex Detection of Bacteria in Complex Clinical and Environmental Samples using Oligonucleotide-coupled Fluorescent Microspheres

Multiplex detectie van bacteriën in complexe klinische en Milieu monsters met behulp van oligonucleotide-coupled Fluorescent Microsferen

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated ...

Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

Detectie van TL Nanoparticle Interacties met Primary Immune celtypes door flowcytometrie

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

Het gebruik van TL-Target Arrays voor het beoordelen van de T-cel responsen<em&gt; In vivo</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Qualitative and Quantitative Assays for Detection and Characterization of Protein Antimicrobials

Kwalitatieve en Kwantitatieve Testen voor detectie en karakterisering van proteïne Antimicrobials

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods ...

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Magneetroerder werkwijze voor de detectie van<em&gt; Trichinella</em&gt; Larven in Muscle Samples

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

Snelle, veilige en eenvoudige handleiding bed nucleïnezuur extractie voor de opsporing van Virus in monsters van volbloed

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

Een High-throughput Platform voor de Screening van Salmonella spp. /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

Multiplexed Fluorescent Immunohistochemical Staining, Imaging, and Analysis in Histological Samples of Lymphoma

Multiplexed fluorescerende immunohistochemische kleuring, Imaging en analyse in histologische monsters van lymfoom

Immunohistochemical (IHC) methods for the in-situ analysis of protein expression by light microscopy are a powerful tool for both research and diagnostic ...

VirWaTest, A Point-of-Use Method for the Detection of Viruses in Water Samples

VirWaTest, een gebruiksmethode voor het opsporen van virussen in water monsters

Viruses excreted by humans and animals may contaminate water sources and pose a risk to human health when this water is used for drinking, food ...