Name: use of fluorescent immuno-chemistry for the detection of edwardsiella ictaluri in channel catfish (i. punctatus) samples
Uploaded: 2011-05-10T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish I. punctatus samples at JoVE.com

המחברים מבקשים להכיר סיוע טכני של הקללות מישל וכן ד&quot;ר פטרי, הנסון, צלופחים ד&quot;ר טימותי בראון על עזרתם בפיתוח וביצוע אימונוהיסטוכימיה. פרויקט זה מומן על ידי משרד החקלאות Cris הפרויקט # MISV-0801310 ועל ידי מדינת מיסיסיפי מאוניברסיטת קולג&#39; לרפואה וטרינרית.

<html> 1. חיידקי אתגר <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חיידקים לגדול בין לילה ב 30 מעלות צלזיוס רועד הלב והמוח מרק עירוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפסק זרימת המים באקווריומים ולהוסיף מרק בריכוז של 1 ל 100 (10 מ&quot;ל לליטר, למשל). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאח...

<ol>
	<li>Plumb, J. A., Woo, P. T. K., Bruno, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fish Diseases and Disorders. , 479-479 (1998).</li><li>Roberts, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fish Pathology. , (2001).</li><li>Lawrence, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Louisiana State University. , (1997).</li><li>Nusbaum, K. E., Morrisson, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entry+of+35S-Labeled+Edwardsiella+ictaluri+into+Channel+Catfish.">Entry of 35S-Labeled Edwardsiella ictaluri into Channel Catfish.</a> Journal of Aquatic Animal Health. 8, 146-146 (1996).</li><li>Karsi, A., Menanteau-Ledouble, S., Lawrence, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+bioluminescent+Edwardsiella+ictaluri+for+noninvasive+disease+monitoring.">Development of bioluminescent Edwardsiella ictaluri for noninvasive disease monitoring.</a> FEMS Microbiology Letters. 260, 286-286 (2006).</li><li>Miyazaki, T., Plumb, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathology+of+Edwardsiella+ictaluri+in+channel+catfish,+Ictalurus+punctatus+(Rafinesque).">Histopathology of Edwardsiella ictaluri in channel catfish, Ictalurus punctatus (Rafinesque).</a> Journal of Fish Diseases. 8, 839-839 (1985).</li><li>Areechon, N., Plumb, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+Edwardsiella+ictaluri+in+Channel+Catfish,+Ictalurus+punctatus.">Pathogenesis of Edwardsiella ictaluri in Channel Catfish, Ictalurus punctatus.</a> Journal of the World Mariculture Society. 14, 249-249 (1983).</li><li>Dumpala, P. R., Lawrence, M. L., Karsi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteome+analysis+of+Edwardsiella+ictaluri.">Proteome analysis of Edwardsiella ictaluri.</a> Proteomics. 9, 1353-1353 (2009).</li><li>Thune, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signature-Tagged+Mutagenesis+of+Edwardsiella+ictaluri+Identifies+Virulence-Related+Genes,+Including+a+Salmonella+Pathogenicity+Island+2+Class+of+Type+III+Secretion+Systems.">Signature-Tagged Mutagenesis of Edwardsiella ictaluri Identifies Virulence-Related Genes, Including a Salmonella Pathogenicity Island 2 Class of Type III Secretion Systems.</a> Applied and Environmental Microbiology. 73, 7934-7934 (2007).</li><li>Karsi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+bioluminescence+mutant+screening+strategy+for+identification+of+bacterial+virulence+genes.">High-throughput bioluminescence mutant screening strategy for identification of bacterial virulence genes.</a> Applied and Environmental Microbiology. 75, 2166-2166 (2009).</li><li>Hook, E. W., Mandell, G. L., Douglas, G., Bennett, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles and Practices of Infectious Diseases. , 1700-1700 (1990).</li><li>Ainsworth, J., Capley, G., Waterstreet, P., Munson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+monoclonal+antibodies+in+the+indirect+fluorescent+antibody+technique+(IFA)+for+the+diagnosis+of+Edwardsiella+ictaluri.">Use of monoclonal antibodies in the indirect fluorescent antibody technique (IFA) for the diagnosis of Edwardsiella ictaluri.</a> Journal of Fish Diseases. 9, 439-439 (1986).</li></ol>

זה פרוטוקול פרטים טכניקה של הדמיית באתרו של הפתוגן שפמנון Edwardsiella ictaluri בסעיפים היסטולוגית. למיטב ידיעתנו, זהו פרוטוקול כזה הראשון שתיאר. השלב הקריטי ביותר, שעל פי ניסיוננו, היא שטיפה של נוגדנים כפי שמתואר בשלב 4.4 של ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th></tr><tr><td> המוח מרק עירוי </td><td> בקטון דיקינסון </td><td> 237200 </td></tr><tr><td> MS222 </td><td> ארג Labs </td><td></td></tr><tr><td> עכבר שלמים סרום </td><td> Cappel </td><td> 55989 </td></tr><tr><td> אנטי עכבר עיזים FitC </td><td> דרום ביוטק </td><td> 1010-1004 </td></tr><tr><td> Permafluor </td><td> מעבדת חזון </td><td> Ta-030-FM </td></tr><tr><td> אשלגן כלורי (KCl) </td><td> סיגמא </td><td> P-4504 </td></tr><tr><td> Triton-X </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> X100-6X500ML </td></tr><tr><td> שור סרום אלבומין </td><td> סיגמא </td><td> 85040C </td></tr><tr><td> אשלגן זרחתי (KH 2 PO 4) </td><td> סיגמא </td><td> P-5379 </td></tr><tr><td> סודיום ביקרבונט (NaHCO 3) </td><td> סיגמא </td><td> S-5761 </td></tr><tr><td> נתרן כלורי (NaCal) </td><td> סיגמא </td><td> S-9625 </td></tr><tr><td> סודיום פוספט dibasic (Na 2 HPO 4) </td><td> סיגמא </td><td> S-9390 </td></tr></tbody></table>

use of fluorescent immuno-chemistry for the detection of edwardsiella ictaluri in channel catfish (i. punctatus) samples

בעוד Edwardsiella ictaluri הוא הפתוגן העיקרי של שפמנון ערוץ Ictalurus punctatus כבר גילו כמעט שלושה עשורים לפני 1,2, עד כה, לפי מיטב הידע של הסופרים האלה, השיטה לא פותחה כדי לאפשר ב להדמיה מקומית של חיידקים בסעיפים היסטולוגית. בעוד לוקליזציה חיידקי נקבע in vivo במחקרים קודמים באמצעות ספירת צלחת 3, 4 שכותרתו רדיומטרי, או חיידקים bioluminescent 5, רוב המחקרים בוצעו רק ברמה איבר ברוטו, עם חריג אחד 6. הגבלה זו מדאיג במיוחד כי א ictaluri יש מחזור זיהום 1,7 מורכבות, ויש לה מגוון גורמים ארסיות 8,9. האינטראקציה המורכבת של E. ictaluri עם המארח שלו הוא דומה במובנים רבים Salmonella typhi 10, אשר בתוך המשפחה הטקסונומית. כאן אנו מתארים טכניקה המאפשרת זיהוי של חיידקים באמצעות עקיפה חיסונית histochemistry באמצעות נוגדן חד שבטי Ed9 שתואר על ידי Ainsworth et al. 11. בקצרה, סרום חסימת מוחל בסעיפים פרפין מוטבע היסטולוגית כדי למנוע הלא ספציפית ממתין. ואז, הסעיפים מודגרת עם הנוגדן עיקריים: א ictaluri נוגדן חד שבטי ספציפי Ed9. נוגדנים הם עודף ושטף ממנו את הנוגדנים FitC משני שכותרתו מתווספים. לאחר השטיפה, הקטעים הם רכובים עם פלורסנט בינוני הרכבה ספציפיות. זה איפשר זיהוי של E. ictaluri באתרו בסעיפים היסטולוגית של הרקמות שפמנון הערוץ.

Watch this Scientific Journal Video about Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish I. punctatus samples at JoVE.com

Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish I. punctatus samples

כאן אנו מתארים את הליך המאפשר תיוג<em&gt; Edwardsiella ictaluri באתרו</em&gt; בסעיפים היסטולוגית של שפמנון ערוץ<em&gt; Ictalurus punctatus</em&gt; באמצעות אימונוהיסטוכימיה עקיף עם נוגדנים חד שבטיים Ed9 כמו נוגדנים הראשוני, פלורסנט שכותרתו FitC כמו משנית. זה איפשר זיהוי של החיידק באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

השימוש פלורסנט חיסונית-לכימיה לצורך זיהוי של Edwardsiella ictaluri ב שפמנון ערוץ ( א punctatus) דגימות

While Edwardsiella ictaluri is a major pathogen of channel catfish Ictalurus punctatus and has been discovered nearly 
three decades ago 1,2, so far, to ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish (I. punctatus) samples

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

שילוב של הדגימה דבק קלטת מבוססי פלואורסצנטי באתרו הכלאה עבור איתור מהיר של סלמונלה על תוצרת טרייה

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Multiplex Detection of Bacteria in Complex Clinical and Environmental Samples using Oligonucleotide-coupled Fluorescent Microspheres

Multiplex זיהוי של חיידקים דוגמאות מורכבות קלינית הסביבה באמצעות oligonucleotide מצמידים פלורסנט microspheres

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated ...

Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

איתור של פלורסנט אינטראקציות Nanoparticle עם אוכלוסיות ראשוניות של תא חיסון על ידי זרימת cytometry

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

השימוש במערכי יעד פלורסנט להערכה של תגובות תא T<em&gt; בvivo</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Qualitative and Quantitative Assays for Detection and Characterization of Protein Antimicrobials

מבחנים איכותיים וכמוני עבור זיהוי ואפיון של antimicrobials החלבון

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods ...

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

סטירר שיטה מגנטית לצורך זיהוי של<em&gt; Trichinella</em&gt; זחלים בדגימות שריר

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

חילוץ מהיר, בטוח, ופשוט ידנית המיטה חומצת גרעין איתור וירוס בדגימות דם מלא

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

פלטפורמה תפוקה גבוהה להקרנה של סלמונלה spp /שיגלה spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

Multiplexed Fluorescent Immunohistochemical Staining, Imaging, and Analysis in Histological Samples of Lymphoma

מרובבת פלורסנט נוגדן, הדמיה, וניתוח בדגימות היסטולוגית של לימפומה

Immunohistochemical (IHC) methods for the in-situ analysis of protein expression by light microscopy are a powerful tool for both research and diagnostic ...

VirWaTest, A Point-of-Use Method for the Detection of Viruses in Water Samples

וירוטסט, נקודת שימוש לאיתור וירוסים בדגימות מים

Viruses excreted by humans and animals may contaminate water sources and pose a risk to human health when this water is used for drinking, food ...