Name: use of fluorescent immuno-chemistry for the detection of edwardsiella ictaluri in channel catfish (i. punctatus) samples
Uploaded: 2011-05-10T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish I. punctatus samples at JoVE.com

Författarna vill tolka tekniskt bistånd från Michelle Banes samt Dr Petrie-Hanson, Dr ålar och Timothy Brown för deras hjälp att utveckla och utföra immunohistokemi. Projektet har finansierats av USDA KRIS-projektet # MISV-0801310 och Mississippi State University College of Veterinary Medicine.

<html> 1. Bakteriell utmaning <ol><li> Växa bakterier över natten vid 30 ° C i skaka Brain buljong Heart Infusion. </li><li> Sluta vattencirkulation i akvarier och lägga buljong i koncentration av 1 på 100 (10 ml per liter, till exempel). </li><li> Efter en timmes inkubation, starta vattencirkulationen i tankarna att spola ut kvarvarande bakterier. </li></ol> 2. Provtagning <ol><li> Provtagning gånger och organ är beroende av syftet med studien, men i vår studie har vi använt följand...

<ol>
	<li>Plumb, J. A., Woo, P. T. K., Bruno, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fish Diseases and Disorders. , 479-479 (1998).</li><li>Roberts, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fish Pathology. , (2001).</li><li>Lawrence, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Louisiana State University. , (1997).</li><li>Nusbaum, K. E., Morrisson, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entry+of+35S-Labeled+Edwardsiella+ictaluri+into+Channel+Catfish.">Entry of 35S-Labeled Edwardsiella ictaluri into Channel Catfish.</a> Journal of Aquatic Animal Health. 8, 146-146 (1996).</li><li>Karsi, A., Menanteau-Ledouble, S., Lawrence, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+bioluminescent+Edwardsiella+ictaluri+for+noninvasive+disease+monitoring.">Development of bioluminescent Edwardsiella ictaluri for noninvasive disease monitoring.</a> FEMS Microbiology Letters. 260, 286-286 (2006).</li><li>Miyazaki, T., Plumb, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histopathology+of+Edwardsiella+ictaluri+in+channel+catfish,+Ictalurus+punctatus+(Rafinesque).">Histopathology of Edwardsiella ictaluri in channel catfish, Ictalurus punctatus (Rafinesque).</a> Journal of Fish Diseases. 8, 839-839 (1985).</li><li>Areechon, N., Plumb, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+Edwardsiella+ictaluri+in+Channel+Catfish,+Ictalurus+punctatus.">Pathogenesis of Edwardsiella ictaluri in Channel Catfish, Ictalurus punctatus.</a> Journal of the World Mariculture Society. 14, 249-249 (1983).</li><li>Dumpala, P. R., Lawrence, M. L., Karsi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteome+analysis+of+Edwardsiella+ictaluri.">Proteome analysis of Edwardsiella ictaluri.</a> Proteomics. 9, 1353-1353 (2009).</li><li>Thune, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signature-Tagged+Mutagenesis+of+Edwardsiella+ictaluri+Identifies+Virulence-Related+Genes,+Including+a+Salmonella+Pathogenicity+Island+2+Class+of+Type+III+Secretion+Systems.">Signature-Tagged Mutagenesis of Edwardsiella ictaluri Identifies Virulence-Related Genes, Including a Salmonella Pathogenicity Island 2 Class of Type III Secretion Systems.</a> Applied and Environmental Microbiology. 73, 7934-7934 (2007).</li><li>Karsi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+bioluminescence+mutant+screening+strategy+for+identification+of+bacterial+virulence+genes.">High-throughput bioluminescence mutant screening strategy for identification of bacterial virulence genes.</a> Applied and Environmental Microbiology. 75, 2166-2166 (2009).</li><li>Hook, E. W., Mandell, G. L., Douglas, G., Bennett, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles and Practices of Infectious Diseases. , 1700-1700 (1990).</li><li>Ainsworth, J., Capley, G., Waterstreet, P., Munson, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+monoclonal+antibodies+in+the+indirect+fluorescent+antibody+technique+(IFA)+for+the+diagnosis+of+Edwardsiella+ictaluri.">Use of monoclonal antibodies in the indirect fluorescent antibody technique (IFA) for the diagnosis of Edwardsiella ictaluri.</a> Journal of Fish Diseases. 9, 439-439 (1986).</li></ol>

Detta protokoll detaljer en teknik för in situ-visualisering av havskatt patogen Edwardsiella ictaluri i histologiska avsnitt. Så vitt vi vet är detta det första protokollet beskrivs. Det mest kritiska steget i vår erfarenhet, är sköljning av antikroppar som beskrivs i steg 4.4 i detta protokoll som otillräcklig tvättning kan resultera i falskt positiva. Det största problemet med att tolka resultaten med denna teknik är auto-fluoresce...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reagensets namn </th><th> Företag </th><th> Katalognummer </th></tr><tr><td> Brain Infusion buljong </td><td> Becton Dickinson </td><td> 237.200 </td></tr><tr><td> MS222 </td><td> Argent Labs </td><td></td></tr><tr><td> Hela musen Serum </td><td> Cappel </td><td> 55.989 </td></tr><tr><td> Get-anti-mus FITC </td><td> Södra Biotech </td><td> 1010-04 </td></tr><tr><td> Permafluor </td><td> Lab Vision </td><td> TA-030-FM </td></tr><tr><td> Kaliumklorid (KCl) </td><td> Sigma </td><td> P-4504 </td></tr><tr><td> Triton-X </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> X100-6X500ML </td></tr><tr><td> Bovint serumalbumin </td><td> Sigma </td><td> 85040C </td></tr><tr><td> Kaliumfosfat (KH 2 PO 4) </td><td> Sigma </td><td> P-5379 </td></tr><tr><td> Natriumbikarbonat (NaHCO 3) </td><td> Sigma </td><td> S-5761 </td></tr><tr><td> Natriumklorid (NaCal) </td><td> Sigma </td><td> S-9625 </td></tr><tr><td> Dinatriumvätefosfat (Na 2 HPO 4) </td><td> Sigma </td><td> S-9390 </td></tr></tbody></table>

use of fluorescent immuno-chemistry for the detection of edwardsiella ictaluri in channel catfish (i. punctatus) samples

Medan Edwardsiella ictaluri är en viktig patogen för kanal havskatt Ictalurus punctatus och har upptäckts nästan tre decennier sedan 1,2 hittills det bästa av dessa författare kunskaper, har ingen metod tagits fram för att möjliggöra in situ-visualisering av bakterier i histologiska avsnitt. Även bakteriella lokalisering har bestämts in vivo i tidigare studier med platta räknas 3, radiometriska märkt 4, eller självlysande bakterier 5 har de flesta av dessa studier endast utförts på de grova orgel nivå, med ett undantag 6. Denna begränsning är särskilt oroande eftersom E. ictaluri har en komplex infektion cykel 1,7, och den har en mängd olika virulensfaktorer 8,9. Det komplexa samspelet mellan E. ictaluri med sin värd liknar i många avseenden Salmonella typhi 10, vilket är i samma taxonomiska familj. Här beskriver vi en teknik som möjliggör detektion av bakterier med hjälp av indirekta immunhistokemisk med den monoklonala antikroppen Ed9 beskrivs av Ainsworth et al. 11. Kortfattat är en blockerande serum tillämpas paraffininbäddad histologiska sektioner för att förhindra icke-specifik bidar. Sedan är de avsnitt inkuberas med den primära antikroppen: E. ictaluri specifik monoklonal antikropp Ed9. Överskott av antikroppar sköljs bort och FITC-märkta sekundära antikroppar tillsätts. Efter sköljning, är de sektioner monterade med ett fluorescerande specifik monteringsmedel. Detta gjorde det möjligt för detektion av E. ictaluri på plats i histologiska delar av vävnader kanal havskatt.

Watch this Scientific Journal Video about Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish I. punctatus samples at JoVE.com

Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish I. punctatus samples

Här beskriver vi ett förfarande för märkning av<em&gt; Edwardsiella ictaluri på plats</em&gt; I histologiska avsnitt från kanal havskatt<em&gt; Ictalurus punctatus</em&gt; Använda indirekta immunhistokemi med monoklonala antikroppar Ed9 som primär, och fluorescerande märkt FITC-antikroppar som en sekundär. Detta gjorde det möjligt för detektion av bakterien med fluorescerande mikroskopi.

Användning av fluorescerande Immuno-kemi för upptäckt av Edwardsiella ictaluri I kanal havskatt ( I. punctatus) Prover

While Edwardsiella ictaluri is a major pathogen of channel catfish Ictalurus punctatus and has been discovered nearly 
three decades ago 1,2, so far, to ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Use of Fluorescent Immuno-Chemistry for the detection of Edwardsiella ictaluri in channel catfish (I. punctatus) samples

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Kombination av självhäftande tejp grundad på provtagning och fluorescens På plats Hybridisering för snabb upptäckt av Salmonella På färskvaror

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Multiplex Detection of Bacteria in Complex Clinical and Environmental Samples using Oligonucleotide-coupled Fluorescent Microspheres

Multiplex detektion av bakterier i komplex klinisk och miljöprover med Oligonucleotide-kopplad fluorescerande mikrosfärer

Bacterial vaginosis (BV) is a recurring polymicrobial syndrome that is characterized by a change in the "normal" microbiota from Lactobacillus-dominated ...

Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

Upptäckt av fluorescerande nanopartiklar Interaktion med Primär Immun cellsubpopulationer med flödescytometri

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable ...

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

Användning av fluorescerande Target matriser för bedömning av T-cellssvar<em&gt; In vivo</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

Qualitative and Quantitative Assays for Detection and Characterization of Protein Antimicrobials

Kvalitativa och kvantitativa analyser för att upptäcka och karakterisering av protein Antimicrobials

Initial evaluations of large microbial libraries for potential producers of novel antimicrobial proteins require both qualitative and quantitative methods ...

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Magnetomrörare metod för detektion av<em&gt; Trichinella</em&gt; Larver i muskelprover

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

Snabb, säker och enkel manuell sängkanten nukleinsyra extraktion för påvisande av Virus i helblod

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

En hög genomströmning plattform för Screening av Salmonella spp. /Shigella spp.

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

Multiplexed Fluorescent Immunohistochemical Staining, Imaging, and Analysis in Histological Samples of Lymphoma

Multiplexade fluorescerande immunhistokemisk färgning, bildbehandling och analys i histologiska prover av lymfom

Immunohistochemical (IHC) methods for the in-situ analysis of protein expression by light microscopy are a powerful tool for both research and diagnostic ...

VirWaTest, A Point-of-Use Method for the Detection of Viruses in Water Samples

VirWaTest, en Point-of-use metod för detektion av virus i vattenprover

Viruses excreted by humans and animals may contaminate water sources and pose a risk to human health when this water is used for drinking, food ...