Name: polarized translocation of fluorescent proteins in xenopus ectoderm in response to wnt signaling
Uploaded: 2011-05-26T15:00:00
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La recherche dans le laboratoire Sokol est parrainé par le Institues national de la santé.

1. Fécondation in vitro de Xenopus Oeufs <ol><li> Obtenir œufs de grenouilles femelles qui ont été injectés avec la gonadotrophine chorionique humaine (400 unités / grenouille) 12 heures avant l&#39;expérience. </li><li> Placez les oeufs dans une petite quantité (0,5-1 ml) de solution à 1 x Marc Ringer modifiée (ROR) 10 à les œufs et les féconder in vitro avec un petit morceau de testicule disséqués. Après 2-3 minutes, ajouter 0,1 x ROR pour couvrir toute ...

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	<li>Gurdon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+induction+---+molecular+aspects.">Embryonic induction --- molecular aspects.</a> Development. 99, 285-306 (1987).</li><li>Moody, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Developmental Genetics. , (2007).</li><li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt/beta-catenin+signaling+in+development+and+disease.">Wnt/beta-catenin signaling in development and disease.</a> Cell. 127, 469-480 (2006).</li><li>Klaus, A., Birchmeier, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+signalling+and+its+impact+on+development+and+cancer.">Wnt signalling and its impact on development and cancer.</a> Nat Rev Cancer. 8, 387-398 (2008).</li><li>Gordon, M. D., Nusse, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+signaling:+multiple+pathways,+multiple+receptors,+and+multiple+transcription+factors.">Wnt signaling: multiple pathways, multiple receptors, and multiple transcription factors.</a> J Biol Chem. 281, 22429-22433 (2006).</li><li>Schwarz-Romond, T., Asbrand, C., Bakkers, J., Kuhl, M., Schaeffer, H. J., Huelsken, J., Behrens, J., Hammerschmidt, M., Birchmeier, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ankyrin+repeat+protein+Diversin+recruits+Casein+kinase+Iepsilon+to+the+beta-catenin+degradation+complex+and+acts+in+both+canonical+Wnt+and+Wnt/JNK+signaling.">The ankyrin repeat protein Diversin recruits Casein kinase Iepsilon to the beta-catenin degradation complex and acts in both canonical Wnt and Wnt/JNK signaling.</a> Genes Dev. 16, 2073-2084 (2002).</li><li>Moeller, H., Jenny, A., Schaeffer, H. J., Schwarz-Romond, T., Mlodzik, M., Hammerschmidt, M., Birchmeier, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversin+regulates+heart+formation+and+gastrulation+movements+in+development.">Diversin regulates heart formation and gastrulation movements in development.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 15900-15905 (2006).</li><li>Itoh, K., Jenny, A., Mlodzik, M., Sokol, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centrosomal+localization+of+Diversin+and+its+relevance+to+Wnt+signaling.">Centrosomal localization of Diversin and its relevance to Wnt signaling.</a> J. Cell Sci. 122, 3791-3798 (2009).</li><li>Itoh, K., Jacob, J., Sokol, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+Xenopus+Frizzled+8+in+dorsal+development.">A role for Xenopus Frizzled 8 in dorsal development.</a> Mech Dev. 74, 145-157 (1998).</li><li>Newport, J., Kirschner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+major+developmental+transition+in+early+Xenopus+embryos:+I.+characterization+and+timing+of+cellular+changes+at+the+midblastula+stage.">A major developmental transition in early Xenopus embryos: I. characterization and timing of cellular changes at the midblastula stage.</a> Cell. 30, 675-686 (1982).</li><li>Itoh, K., Brott, B. K., Bae, G. U., Ratcliffe, M. J., Sokol, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+localization+is+required+for+Dishevelled+function+in+Wnt/beta-catenin+signaling.">Nuclear localization is required for Dishevelled function in Wnt/beta-catenin signaling.</a> J Biol. 4, 3-3 (2005).</li></ol>

Nous avons utilisé le protocole ci-dessus pour caractériser la localisation subcellulaire des Diversin. Dans des explants pôle animal, Diversin-DP a été détecté à côté du noyau et colocalisés avec g-tubuline, un marqueur centrosomale, dans cryocoupes (figure 1). Une fois la localisation subcellulaire d&#39;une protéine est identifiée, les constructions de suppression peuvent être générés pour établir quels domaines protéiques sont nécessaires et suffisants pour la localisation subcellulaire. En utili...

polarized translocation of fluorescent proteins in xenopus ectoderm in response to wnt signaling

Polarité cellulaire est une propriété fondamentale des cellules eucaryotes qui est dynamiquement régulée par des facteurs intrinsèques et extrinsèques au cours développement embryonnaire 1, 2. Une des voies de signalisation impliquées dans cette régulation est la voie Wnt, qui est utilisé à plusieurs reprises durant l&#39;embryogenèse et critique pour la maladie de l&#39;homme 3, 4, 5. De multiples composants moléculaires de cette voie de signalisation coordonnée réguler de manière spatialement limité, mais les mécanismes sous-jacents ne sont pas pleinement compris. Xenopus cellules embryonnaires épithéliales est un excellent système pour étudier la localisation subcellulaire des protéines de signalisation différents. Protéines de fusion fluorescentes sont exprimés dans les embryons de Xenopus par microinjection d&#39;ARN, des explants ectodermiques sont préparés et la localisation des protéines est évaluée par épifluorescence. Dans ce protocole expérimental, nous décrivons comment la localisation subcellulaire des Diversin, une protéine cytoplasmique qui a été impliquée dans la signalisation et la détermination de la polarité cellulaire 6, 7 est visualisée dans les cellules ectodermiques Xénope pour étudier la transduction du signal Wnt 8. Coexpression d&#39;un ligand Wnt ou d&#39;un récepteur Frizzled modifie la répartition des Diversin fusionné avec la protéine fluorescente rouge, DP, et il recrute à la membrane cellulaire de façon polarisée 8, 9. Ce protocole ex vivo devrait être un complément utile aux études in vitro des cellules mammaliennes cultivées, dans laquelle le contrôle spatial de la signalisation est différente de celle du tissu intact et est beaucoup plus difficile à analyser.

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Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

Xenopus embryonnaire ectoderme est devenu un modèle attractif pour les études de la polarité cellulaire. Un essai est décrit, dans lequel la distribution subcellulaire des protéines fluorescentes dans les cellules est évaluée ectoderme. Ce protocole aidera aborder les questions relatives au contrôle spatial de la signalisation.

Translocation polarisée des protéines fluorescentes dans les Xenopus</emEctoderme> en réponse à la signalisation Wnt

Cell polarity is a fundamental property of eukaryotic cells that is dynamically regulated by both intrinsic and extrinsic factors during embryonic ...

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JoVE Journal

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