Name: polarized translocation of fluorescent proteins in xenopus ectoderm in response to wnt signaling
Uploaded: 2011-05-26T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling at JoVE.com

Исследования в лаборатории Сокол спонсируется Национальным Institues здравоохранения.

1. Экстракорпоральное оплодотворение яйца из Xenopus <ol><li> Получить яйца самка лягушки, которые вводили хорионический гонадотропин человека (400 ед / лягушка) 12 часов до эксперимента. </li><li> Место яйца в небольшом количестве (0,5-1 мл) на 1 изменение х Марка раствор Рингера (MMR) 10 к ?...

<ol>
	<li>Gurdon, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+induction+---+molecular+aspects.">Embryonic induction --- molecular aspects.</a> Development. 99, 285-306 (1987).</li><li>Moody, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Principles of Developmental Genetics. , (2007).</li><li>Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt/beta-catenin+signaling+in+development+and+disease.">Wnt/beta-catenin signaling in development and disease.</a> Cell. 127, 469-480 (2006).</li><li>Klaus, A., Birchmeier, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+signalling+and+its+impact+on+development+and+cancer.">Wnt signalling and its impact on development and cancer.</a> Nat Rev Cancer. 8, 387-398 (2008).</li><li>Gordon, M. D., Nusse, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+signaling:+multiple+pathways,+multiple+receptors,+and+multiple+transcription+factors.">Wnt signaling: multiple pathways, multiple receptors, and multiple transcription factors.</a> J Biol Chem. 281, 22429-22433 (2006).</li><li>Schwarz-Romond, T., Asbrand, C., Bakkers, J., Kuhl, M., Schaeffer, H. J., Huelsken, J., Behrens, J., Hammerschmidt, M., Birchmeier, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ankyrin+repeat+protein+Diversin+recruits+Casein+kinase+Iepsilon+to+the+beta-catenin+degradation+complex+and+acts+in+both+canonical+Wnt+and+Wnt/JNK+signaling.">The ankyrin repeat protein Diversin recruits Casein kinase Iepsilon to the beta-catenin degradation complex and acts in both canonical Wnt and Wnt/JNK signaling.</a> Genes Dev. 16, 2073-2084 (2002).</li><li>Moeller, H., Jenny, A., Schaeffer, H. J., Schwarz-Romond, T., Mlodzik, M., Hammerschmidt, M., Birchmeier, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversin+regulates+heart+formation+and+gastrulation+movements+in+development.">Diversin regulates heart formation and gastrulation movements in development.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 15900-15905 (2006).</li><li>Itoh, K., Jenny, A., Mlodzik, M., Sokol, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Centrosomal+localization+of+Diversin+and+its+relevance+to+Wnt+signaling.">Centrosomal localization of Diversin and its relevance to Wnt signaling.</a> J. Cell Sci. 122, 3791-3798 (2009).</li><li>Itoh, K., Jacob, J., Sokol, Y. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+Xenopus+Frizzled+8+in+dorsal+development.">A role for Xenopus Frizzled 8 in dorsal development.</a> Mech Dev. 74, 145-157 (1998).</li><li>Newport, J., Kirschner, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+major+developmental+transition+in+early+Xenopus+embryos:+I.+characterization+and+timing+of+cellular+changes+at+the+midblastula+stage.">A major developmental transition in early Xenopus embryos: I. characterization and timing of cellular changes at the midblastula stage.</a> Cell. 30, 675-686 (1982).</li><li>Itoh, K., Brott, B. K., Bae, G. U., Ratcliffe, M. J., Sokol, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+localization+is+required+for+Dishevelled+function+in+Wnt/beta-catenin+signaling.">Nuclear localization is required for Dishevelled function in Wnt/beta-catenin signaling.</a> J Biol. 4, 3-3 (2005).</li></ol>

Мы использовали выше протокол, чтобы охарактеризовать субклеточные локализации Diversin. В эксплантатах животных полюса, Diversin-ППП был обнаружен рядом с ядром и colocalized с г-тубулина, centrosomal маркер, в cryosections (рис. 1). После субклеточные локализации белка определяется, удаление конструкции могут...

polarized translocation of fluorescent proteins in xenopus ectoderm in response to wnt signaling

Сотовые полярность фундаментальное свойство клеток эукариот, который динамически регулируется как внутренних и внешних факторов во время эмбрионального развития 1, 2. Один из сигнальных путей, участвующих в этом регулирование Wnt путь, который используется во много раз во время эмбриогенеза и критические для человека болезнь 3, 4, 5. Множественные молекулярные компоненты этого пути согласованно регулировать сигнализации в пространственно-ограниченной форме, но основные механизмы, полностью не поняты. Xenopus эмбриональных эпителиальных клеток является отличной системой для изучения субклеточных локализации различных сигнальных белков. Флуоресцентные белки слияния выражены у эмбрионов Xenopus путем микроинъекции РНК, эктодермального эксплантов готовятся и локализации белка оценивается epifluorescence. В этом протоколе исследования мы описываем, как субклеточные локализации Diversin, цитоплазматических белков, которые были причастны к сигнализации и клеточной полярности определения 6, 7 визуализируется в Xenopus эктодермальных клеток для изучения передачи сигналов Wnt 8. Коэкспрессия Wnt лиганда или Frizzled рецепторов изменяет распределение Diversin сливается с красного флуоресцентного белка, ППП, и новобранцы его клеточную мембрану в поляризованной моды 8, 9. Это бывший протокол естественных условиях должно быть полезным дополнением к лабораторные исследования в культивируемых клетках млекопитающих, в котором пространственные контроль сигнализации отличается от неповрежденной ткани и является гораздо более трудной для анализа.

Watch this Scientific Journal Video about Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling at JoVE.com

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

Xenopus эмбриональной эктодермы стала привлекательной моделью для исследования клеточной полярности. Анализа описывается, в котором субклеточных распределение флуоресцентных белков оценивается в эктодермы клеток. Этот протокол поможет решить вопросы, связанные с пространственным управления сигнализацией.

Поляризованные транслокации флуоресцентных белков в Xenopus Эктодермы в ответ на Wnt сигнализации

Cell polarity is a fundamental property of eukaryotic cells that is dynamically regulated by both intrinsic and extrinsic factors during embryonic ...

Research

JoVE Journal

Biology

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

Quantification of &gamma;H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

Quantification of ÃƒÅ½Ã‚Â³H2AX Foci in Response to Ionising Radiation

Количественная оценка γH2AX Очаги в ответ на ионизирующего излучения

DNA double-strand breaks (DSBs), which are induced by either endogenous metabolic processes or by exogenous sources, are one of the most critical DNA ...

Photoconversion of Purified Fluorescent Proteins and Dual-probe Optical Highlighting in Live Cells

Фотопревращения Очищенная флуоресцентных белков и двойного зонда Оптические Выделение в живых клетках

Photoconvertible fluorescent proteins (pc-FPs) are a class of fluorescent proteins with "optical highlighter" capability, meaning that the color of ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Зажим Patch и перфузии Методы изучения ионных каналов, выраженные в Xenopus Ооцитов

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Rapid Genetic Analysis of Epithelial-Mesenchymal Signaling During Hair Regeneration

Быстрое Генетический анализ эпителиальных мезенхимальных сигнализации во время регенерации волос

Hair follicle morphogenesis, a complex process requiring interaction between epithelia-derived keratinocytes and the underlying mesenchyme, is an ...

Intravital Microscopy for Imaging Subcellular Structures in Live Mice Expressing Fluorescent Proteins

Прижизненные микроскопия для визуализации субклеточных структур в живых мышей, экспрессирующих флуоресцентные белки

Here we describe a procedure to image subcellular structures in live rodents that is based on the use of confocal intravital microscopy. As a model organ, ...

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Facial Transplants in Xenopus laevis Embryos

Трансплантация лица в<em&gt; Xenopus Laevis</em&gt; Эмбрионы

Craniofacial birth defects occur in 1 out of every 700 live births, but etiology is rarely known due to limited understanding of craniofacial development. ...

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

<em&gt; Xenopus</em&gt; Ооцитов Cut открыть Вазелин Gap Напряжение-зажим Техника С флуорометрии

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...

Reconstitution Of &#946;-catenin Degradation In Xenopus Egg Extract

Reconstitution Of ÃƒÅ½Ã‚Â²-catenin Degradation In Xenopus Egg Extract

Восстановление β-катенина ухудшение<em&gt; Xenopus</em&gt; Яйцо Экстракт

Xenopus laevis egg extract is a well-characterized, robust system for studying the biochemistry of diverse cellular processes. Xenopus egg extract has ...

Quantification of Orofacial Phenotypes in Xenopus

Quantification of Orofacial Phenotypes in Xenopus

Количественная оценка Орофациальные фенотипов в<em&gt; Xenopus</em

Xenopus has become an important tool for dissecting the mechanisms governing craniofacial development and defects. A method to quantify orofacial ...

Measuring Glutathione-induced Feeding Response in Hydra

Измерение глутатион-индуцированной кормления ответ в Hydra

Hydra is among the most primitive organisms possessing a nervous system and chemosensation for detecting reduced glutathione (GSH) for capturing the prey. ...