Name: non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry
Uploaded: 2011-05-02T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-surgical Intratracheal Instillation of Mice with Analysis of Lungs and Lung Draining Lymph Nodes by Flow Cytometry at JoVE.com

1. قبل العملية ، وإعداد وجمع المواد التالية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يرجى الرجوع إلى الصورة في الشكل 1A) و 1b) لبناء منصة خشبية لكبح جماح الماوس أثناء العملية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مزيج الهضم لالغدد الليمفاوية -- HBSS + 1.25mg/ml كولاجيناز TypeIV أو 2.5...

<ol>
	<li>Grayson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controls+for+lung+dendritic+cell+maturation+and+migration+during+respiratory+viral+infection.">Controls for lung dendritic cell maturation and migration during respiratory viral infection.</a> J Immunol. 179, 1438-1438 (2007).</li><li>GeurtsvanKessel, C. H., Lambrecht, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Division+of+labor+between+dendritic+cell+subsets+of+the+lung.">Division of labor between dendritic cell subsets of the lung.</a> Mucosal Immunol. 1, 442-442 (2008).</li><li>Bar-Haim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrelationship+between+dendritic+cell+trafficking+and+Francisella+tularensis+dissemination+following+airway+infection.">Interrelationship between dendritic cell trafficking and Francisella tularensis dissemination following airway infection.</a> PLoS Pathog. 4, e1000211-e1000211 (2008).</li><li>Kim, T. S., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+dendritic+cell+subsets+differ+in+their+capacity+to+support+the+induction+of+virus-specific+cytotoxic+CD8++T+cell+responses.">Respiratory dendritic cell subsets differ in their capacity to support the induction of virus-specific cytotoxic CD8+ T cell responses.</a> PLoS One. 4, e4204-e4204 (2009).</li><li>Bakocevic, N., Worbs, T., Davalos-Misslitz, A., Forster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell-dendritic+cell+interaction+dynamics+during+the+induction+of+respiratory+tolerance+and+immunity.">T cell-dendritic cell interaction dynamics during the induction of respiratory tolerance and immunity.</a> J Immunol. 184, 1317-1317 (2010).</li><li>Thomas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+particle+size+on+the+pathology+and+efficacy+of+vaccination+in+a+murine+model+of+inhalational+anthrax.">Influence of particle size on the pathology and efficacy of vaccination in a murine model of inhalational anthrax.</a> J Med Microbiol. , (2010).</li><li>Kiyono, H., Fukuyama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NALT-+versus+Peyer's-patch-mediated+mucosal+immunity.">NALT- versus Peyer's-patch-mediated mucosal immunity.</a> Nat Rev Immunol. 4, 699-699 (2004).</li><li>Parungo, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+drainage+of+the+peritoneal+space:+a+pattern+dependent+on+bowel+lymphatics.">Lymphatic drainage of the peritoneal space: a pattern dependent on bowel lymphatics.</a> Ann Surg Oncol. 14, 286-286 (2007).</li><li>Jakubzick, C., Helft, J., Kaplan, T. J., Randolph, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+methods+to+study+pulmonary+dendritic+cell+migration+reveals+distinct+capacities+of+DC+subsets+to+acquire+soluble+versus+particulate+antigen.">Optimization of methods to study pulmonary dendritic cell migration reveals distinct capacities of DC subsets to acquire soluble versus particulate antigen.</a> J Immunol Methods. 337, 121-121 (2008).</li><li>Higgins, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relative+levels+of+M-CSF+and+GM-CSF+influence+the+specific+generation+of+macrophage+populations+during+infection+with+Mycobacterium+tuberculosis.">Relative levels of M-CSF and GM-CSF influence the specific generation of macrophage populations during infection with Mycobacterium tuberculosis.</a> J Immunol. 180, 4892-4892 (2008).</li><li>Kool, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alum+adjuvant+boosts+adaptive+immunity+by+inducing+uric+acid+and+activating+inflammatory+dendritic+cells.">Alum adjuvant boosts adaptive immunity by inducing uric acid and activating inflammatory dendritic cells.</a> J Exp Med. 205, 869-869 (2008).</li><li>Costa, D. L., Lehmann, J. R., Harold, W. M., Drew, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transoral+tracheal+intubation+of+rodents+using+a+fiberoptic+laryngoscope.">Transoral tracheal intubation of rodents using a fiberoptic laryngoscope.</a> Lab Anim Sci. 36, 256-256 (1986).</li><li>Takahashi, S., Patrick, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+lymphatic+drainage+to+individual+thoracic+and+cervical+lymph+nodes+in+the+rat.">Patterns of lymphatic drainage to individual thoracic and cervical lymph nodes in the rat.</a> Lab Anim. 21, 31-31 (1987).</li><li>Broeck, W. V. a. n. d. e. n., Derore, A., Simoens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+nomenclature+of+murine+lymph+nodes:+Descriptive+study+and+nomenclatory+standardization+in+BALB/cAnNCrl+mice.">Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: Descriptive study and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice.</a> J Immunol Methods. 312, 12-12 (2006).</li></ol>

وقد استخدمت ونحن على هذا البروتوكول لدراسة الاتجار من عصيات الجمرة الخبيثة من الرئتين إلى LDLNs. لتطبيقات مماثلة ، يجب أن يكون عدد جزيئات تسليمها الى الرئتين يتم اختيارها بعناية بحيث يمكن الكشف عن مواد تحقن في LDLNs بواسطة التدفق الخلوي. لدينا أيضا استخدمت بنجاح هذه ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات (اختياري) </th></tr><tr><td> 70μm خلية stariner </td><td> دينار بحريني </td><td></td><td></td></tr><tr><td> النيلين الأزرق </td><td> الصياد </td><td> A967 - 25 </td><td></td></tr><tr><td> تغذية الحيوان إبرة </td><td> وشركة أبناء بوبر </td><td> 7920 </td><td></td></tr><tr><td> كولاجيناز </td><td> سيغما </td><td> C2139 </td><td></td></tr><tr><td> كولاجيناز TypeIV </td><td> ورثينجتون </td><td></td><td></td></tr><tr><td> كولاجيناز D </td><td> روش </td><td> 11088974103 </td><td></td></tr><tr><td> DPBS </td><td> Invitrogen </td><td> 14190 </td><td></td></tr><tr><td> Fluoresbrite YG المجهرية (0.5μm) </td><td> Polysciences ، المؤتمر الوطني العراقي </td><td> 17152 </td><td></td></tr><tr><td> HBSS دون كلوريد الكالسيوم وكلوريد المغنيسيوم </td><td> Invitrogen </td><td> 14170 </td><td></td></tr><tr><td> الكيتامين حمض الهيدروكلوريك (100mg/ml) </td><td> هوسبيرا المؤتمر الوطني العراقي </td><td></td><td></td></tr><tr><td> المنظار بليد </td><td> PennCentury ، المؤتمر الوطني العراقي </td><td> لموديل LS - 1 </td><td> الرجوع إلى <a href="http://www.penncentury.com">www.penncentury.com</a> </td></tr><tr><td> الألياف البصرية خفيفة الوزن منظار الحنجرة </td><td> WelchAllyn </td><td> 80814 </td><td></td></tr><tr><td> نيون الخرز الأحمر (0.5μm) </td><td> Invitrogen </td><td> F8812 </td><td> الملكية الفكرية للحقن </td></tr><tr><td> زيلازين (100mg/ml) </td><td> مختبرات لويد </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry

الخلايا البلعمية السنخية مثل الضامة ، والخلايا الجذعية الرئة (أقل البلدان نموا) عينة من مولدات المضادات باستمرار المسافات السنخية في الرئتين. أقل البلدان نموا ، على وجه الخصوص ، ومن المعروف أن تهاجر إلى العقد اللمفية استنزاف الرئة (LDLNs) حيث يقدمون مستضدات استنشاقها لخلايا T المبادرة استجابة مناسبة في مأمن من مجموعة متنوعة من immunogens 1،2. لنموذج التفاعلات بين الرئتين ومولدات المضادات الجوية في الفئران ، ويمكن أن تدار الأنف مستضدات 1،3،4 ، intratracheally 5 أو 6 كما الهباء. تسليم كل مسار ينطوي على مهارات فنية متميزة والقيود التي يجب النظر فيها قبل تصميم التجربة. على سبيل المثال ، والتعرض للرذاذ الأنف والرئتين لمستضدات يسلم على حد سواء ، والجهاز التنفسي العلوي. وبالتالي يمكن الوصول إلى مستضدات الأنسجة اللمفاوية المرتبطة الأنف (NALT) 7 ، تعقيد يحتمل تفسير النتائج. بالإضافة إلى ذلك ، قد البلع ، والعطس ومعدل التنفس من الفأرة يؤدي أيضا إلى عدم الاتساق في جرعات تسليمها. رغم أنه قد يكون من المفضل اشتراك في الجهاز التنفسي العلوي لبعض الدراسات والتجارب التي يمكن أن تعقد مع التركيز على الأحداث بدأت تحديدا في الرئتين. في هذا الإعداد ، داخل الرغامى (عليه) هو الطريق الأفضل لأنها توفر مواد الاختبار مباشرة إلى الرئتين ويتجاوز NALT. العديد من بروتوكولات الحقن أنها تنطوي على التنبيب إما أعمى من القصبة الهوائية من خلال تجويف الفم أو التعرض الجراحية من القصبة الهوائية للوصول إلى الرئتين. هنا ، نحن تصف ، بما يتفق بسيطة وغير الجراحية لأنها طريقة تقطير. هو تصور فتح القصبة الهوائية باستخدام المنظار ، ويتم بعد ذلك إدخال إبرة عازمة بالتزقيم مباشرة في القصبة الهوائية للتربة من تسليم. وصفنا أيضا إجراءات للحصاد وتجهيز LDLNs والرئتين لتحليل الاتجار المستضد بواسطة التدفق الخلوي.

Watch this Scientific Journal Video about Non-surgical Intratracheal Instillation of Mice with Analysis of Lungs and Lung Draining Lymph Nodes by Flow Cytometry at JoVE.com

Non-surgical Intratracheal Instillation of Mice with Analysis of Lungs and Lung Draining Lymph Nodes by Flow Cytometry

نحن لتوضيح غير الجراحية تسليم مواد الاختبار في الرئتين من الفئران تخدير عن طريق القصبة الهوائية. هذا الأسلوب يسمح الرئة التعرض لمسببات الأمراض البكتيرية والفيروسية ، السيتوكينات ، والأجسام المضادة ، والخرز ، والمواد الكيميائية ، أو الأصباغ. ونحن كذلك وصف حصاد وتجهيز الرئتين والعقد اللمفاوية استنزاف الرئة (LDLNs) لالتدفق الخلوي.

غير الجراحية التقطير داخل الرغامى من الفئران مع تحليل الرئتين والعقد الليمفاوية والرئة التي تصريف التدفق الخلوي

Phagocytic cells such as alveolar macrophages and lung dendritic cells (LDCs) continuously sample antigens from the alveolar spaces in the 
lungs. LDCs, ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Studying Interactions of Staphylococcus aureus with Neutrophils by Flow Cytometry and Time Lapse Microscopy

Studying Interactions of Staphylococcus aureus with Neutrophils by Flow Cytometry and Time Lapse Microscopy

دراسة تفاعلات<em&gt; المكورات العنقودية الذهبية</em&gt; مع العدلات بواسطة التدفق الخلوي والوقت الفاصل بين المجهري

We present methods to study the effect of phenol soluble modulins (PSMs)  and other toxins produced and secreted by Staphylococcus  aureus on neutrophils. ...

Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

الكشف عن جسيمات متناهية الصغر نيون التفاعل مع مجموعات سكانية فرعية خلية المناعة الأولية من قبل التدفق الخلوي

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

مقايسة على أساس CFSE لدراسة الهجرة من الجلد الفئران الخلايا الجذعية في تصريف الغدد الليمفاوية خلال العدوى مع<em&gt; المتفطرة البقرية</em&gt; عصيات كالميت غيران

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

Intracellular Staining and Flow Cytometry to Identify Lymphocyte Subsets within Murine Aorta, Kidney and Lymph Nodes in a Model of Hypertension

بين الخلايا تلطيخ والتدفق الخلوي لتحديد الخلايا الليمفاوية مجموعات فرعية ضمن الفئران الأورطي، الكلى والغدد الليمفاوية في نموذج من ارتفاع ضغط الدم

It is now well known that T lymphocytes play a critical role in the development of several cardiovascular diseases1,2,3,4,5. For example, studies from our ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

قياس T خلية Alloreactivity عن طريق التصوير التدفق الخلوي

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Collection and Processing of Lymph Nodes from Large Animals for RNA Analysis: Preparing for Lymph Node Transcriptomic Studies of Large Animal Species

جمع وتجهيز العقد الليمفاوية من الحيوانات الكبيرة لتحليل الحمض النووي الريبي: التحضير للدراسات ترانسكريبتوميك العقدة الليمفاوية للأنواع الحيوانية الكبيرة

Large animals (both livestock and wildlife) serve as important reservoirs of zoonotic pathogens, including Brucella, Mycobacterium bovis, Salmonella, and ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

العزلة والثقافة في المختبر من البلاعم السنخية مورين والبشرية

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Characterization of Human Monocyte Subsets by Whole Blood Flow Cytometry Analysis

وصف مجموعات فرعية الوحيدات البشرية بالدم كله يتدفق التحليل الخلوي

Monocytes are key contributors in various inflammatory disorders and alterations to these cells, including their subset proportions and functions, can ...

Determination of Regulatory T Cell Subsets in Murine Thymus, Pancreatic Draining Lymph Node and Spleen Using Flow Cytometry

تحديد المجموعات الفرعية التنظيمية تي الخلية في الغدة الصعترية مورين، البنكرياس تصب العقدة الليمفاوية والطحال باستخدام التدفق الخلوي

Our immune system consists of a number and variety of immune cells including regulatory T cells (Treg) cells. Treg cells can be divided into two subsets, ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

إعداد نخاع العظام كله لتحليل الكتلة الخلايا من الخلايا العدلية النسب

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...