Name: non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry
Uploaded: 2011-05-02T17:00:00
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1. प्रक्रिया से पहले तैयार करते हैं, और निम्नलिखित मदों को इकट्ठा <ol><li> चित्रा 1a में छवि देखें) और 1b एक लकड़ी के मंच के निर्माण प्रक्रिया के दौरान माउस को नियंत्रित करने के लिए). </li><li> HBSS + 1.25mg/ml Collagenase TypeIV या 2.5 मिलीग्?...

<ol>
	<li>Grayson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controls+for+lung+dendritic+cell+maturation+and+migration+during+respiratory+viral+infection.">Controls for lung dendritic cell maturation and migration during respiratory viral infection.</a> J Immunol. 179, 1438-1438 (2007).</li><li>GeurtsvanKessel, C. H., Lambrecht, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Division+of+labor+between+dendritic+cell+subsets+of+the+lung.">Division of labor between dendritic cell subsets of the lung.</a> Mucosal Immunol. 1, 442-442 (2008).</li><li>Bar-Haim, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrelationship+between+dendritic+cell+trafficking+and+Francisella+tularensis+dissemination+following+airway+infection.">Interrelationship between dendritic cell trafficking and Francisella tularensis dissemination following airway infection.</a> PLoS Pathog. 4, e1000211-e1000211 (2008).</li><li>Kim, T. S., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Respiratory+dendritic+cell+subsets+differ+in+their+capacity+to+support+the+induction+of+virus-specific+cytotoxic+CD8++T+cell+responses.">Respiratory dendritic cell subsets differ in their capacity to support the induction of virus-specific cytotoxic CD8+ T cell responses.</a> PLoS One. 4, e4204-e4204 (2009).</li><li>Bakocevic, N., Worbs, T., Davalos-Misslitz, A., Forster, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell-dendritic+cell+interaction+dynamics+during+the+induction+of+respiratory+tolerance+and+immunity.">T cell-dendritic cell interaction dynamics during the induction of respiratory tolerance and immunity.</a> J Immunol. 184, 1317-1317 (2010).</li><li>Thomas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+particle+size+on+the+pathology+and+efficacy+of+vaccination+in+a+murine+model+of+inhalational+anthrax.">Influence of particle size on the pathology and efficacy of vaccination in a murine model of inhalational anthrax.</a> J Med Microbiol. , (2010).</li><li>Kiyono, H., Fukuyama, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NALT-+versus+Peyer's-patch-mediated+mucosal+immunity.">NALT- versus Peyer's-patch-mediated mucosal immunity.</a> Nat Rev Immunol. 4, 699-699 (2004).</li><li>Parungo, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic+drainage+of+the+peritoneal+space:+a+pattern+dependent+on+bowel+lymphatics.">Lymphatic drainage of the peritoneal space: a pattern dependent on bowel lymphatics.</a> Ann Surg Oncol. 14, 286-286 (2007).</li><li>Jakubzick, C., Helft, J., Kaplan, T. J., Randolph, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+methods+to+study+pulmonary+dendritic+cell+migration+reveals+distinct+capacities+of+DC+subsets+to+acquire+soluble+versus+particulate+antigen.">Optimization of methods to study pulmonary dendritic cell migration reveals distinct capacities of DC subsets to acquire soluble versus particulate antigen.</a> J Immunol Methods. 337, 121-121 (2008).</li><li>Higgins, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relative+levels+of+M-CSF+and+GM-CSF+influence+the+specific+generation+of+macrophage+populations+during+infection+with+Mycobacterium+tuberculosis.">Relative levels of M-CSF and GM-CSF influence the specific generation of macrophage populations during infection with Mycobacterium tuberculosis.</a> J Immunol. 180, 4892-4892 (2008).</li><li>Kool, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alum+adjuvant+boosts+adaptive+immunity+by+inducing+uric+acid+and+activating+inflammatory+dendritic+cells.">Alum adjuvant boosts adaptive immunity by inducing uric acid and activating inflammatory dendritic cells.</a> J Exp Med. 205, 869-869 (2008).</li><li>Costa, D. L., Lehmann, J. R., Harold, W. M., Drew, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transoral+tracheal+intubation+of+rodents+using+a+fiberoptic+laryngoscope.">Transoral tracheal intubation of rodents using a fiberoptic laryngoscope.</a> Lab Anim Sci. 36, 256-256 (1986).</li><li>Takahashi, S., Patrick, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+lymphatic+drainage+to+individual+thoracic+and+cervical+lymph+nodes+in+the+rat.">Patterns of lymphatic drainage to individual thoracic and cervical lymph nodes in the rat.</a> Lab Anim. 21, 31-31 (1987).</li><li>Broeck, W. V. a. n. d. e. n., Derore, A., Simoens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy+and+nomenclature+of+murine+lymph+nodes:+Descriptive+study+and+nomenclatory+standardization+in+BALB/cAnNCrl+mice.">Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: Descriptive study and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice.</a> J Immunol Methods. 312, 12-12 (2006).</li></ol>

हम इस प्रोटोकॉल का उपयोग किया है बेसिलस anthracis spores के फेफड़ों से LDLNs तस्करी अध्ययन. इसी तरह के अनुप्रयोगों के लिए, फेफड़ों के लिए दिया कणों की संख्या सावधानी से चुना जाना चाहिए ताकि इंजेक्शन सामग्री प्रव?...

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th><th> टिप्पणियां (वैकल्पिक) </th></tr><tr><td> 70μm सेल stariner </td><td> BD </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Aniline ब्लू </td><td> मछुआ </td><td> A967-25 </td><td></td></tr><tr><td> पशु दूध पिलाने की सुई </td><td> पॉपर और संस इंक </td><td> 7920 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase </td><td> सिग्मा </td><td> C2139 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase TypeIV </td><td> Worthington </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Collagenase डी </td><td> रॉश </td><td> 11088974103 </td><td></td></tr><tr><td> DPBS </td><td> Invitrogen </td><td> 14190 </td><td></td></tr><tr><td> Fluoresbrite YG microspheres (0.5μm) </td><td> Polysciences, इंक </td><td> 17152 </td><td></td></tr><tr><td> कैल्शियम क्लोराइड और मैग्नीशियम क्लोराइड बिना HBSS </td><td> Invitrogen </td><td> 14170 </td><td></td></tr><tr><td> Ketamine एचसीएल (100mg/ml) </td><td> Hospira इंक </td><td></td><td></td></tr><tr><td> फेफड़ाओं को सुनने का एक यंत्र ब्लेड </td><td> PennCentury इंक, </td><td> मॉडल के लिए LS-1 </td><td> का संदर्भ लें <a href="http://www.penncentury.com">www.penncentury.com</a> </td></tr><tr><td> हल्के फाइबर ऑप्टिक फेफड़ाओं को सुनने का एक यंत्र </td><td> WelchAllyn </td><td> 80814 </td><td></td></tr><tr><td> लाल प्रतिदीप्त मोती (0.5μm) </td><td> Invitrogen </td><td> F8812 </td><td> आईपी ​​इंजेक्शन के लिए </td></tr><tr><td> Xylazine (100mg/ml) </td><td> लॉयड प्रयोगशालाओं </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry

वायुकोशीय मैक्रोफेज और फेफड़ों के वृक्ष के समान कोशिकाओं (एलडीसी) के रूप में ऐसे Phagocytic कोशिकाओं को फेफड़ों में वायुकोशीय स्थान से लगातार प्रतिजनों नमूना. एलडीसी, विशेष रूप में, के लिए फेफड़ों draining लिम्फ नोड्स (LDLNs) जहां वे टी कोशिकाओं की शुरुआत एक उपयुक्त immunogens 1,2 की एक किस्म के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के लिए साँस एंटीजन मौजूद हैं. को विस्थापित करने के लिए जाना जाता है चूहों में फेफड़ों और हवाई प्रतिजनों के बीच बातचीत मॉडल करने के लिए, प्रतिजनों 1,3,4 intranasally प्रशासित किया जा सकता है, intratracheally 5 या 6 एयरोसौल्ज़ के रूप में . प्रत्येक मार्ग द्वारा डिलिवरी विशिष्ट तकनीकी कौशल और सीमाओं कि एक प्रयोग डिजाइन करने से पहले विचार किया जाना चाहिए शामिल है. उदाहरण के लिए, intranasal और aerosolized जोखिम दोनों फेफड़ों और ऊपरी श्वास पथ के लिए प्रतिजनों उद्धार. इसलिए प्रतिजनों नाक जुड़े lymphoid ऊतक (NALT) 7 का उपयोग कर सकते हैं, संभावित परिणामों की व्याख्या उलझी. इसके अलावा, निगल, छींकने, और माउस के साँस लेने की दर भी दिया खुराक में विसंगतियों के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. हालांकि ऊपरी श्वास नलिका के भागीदारी कुछ अध्ययनों के लिए पसंद किया जा सकता है, यह विशेष रूप से फेफड़ों में शुरू की घटनाओं पर ध्यान केंद्रित प्रयोगों को जटिल बना सकता है. इस सेटिंग में, intratracheal मार्ग (यह) बेहतर है के रूप में यह परीक्षण सामग्री सीधे फेफड़ों में और उद्धार NALT नजरअंदाज. कई लोग इसे इंजेक्शन प्रोटोकॉल मौखिक गुहा या ट्रेकिआ की शल्य चिकित्सा जोखिम फेफड़ों का उपयोग ट्रेकिआ के माध्यम से या तो अंधे इंटुबैषेण शामिल है. इस के साथ साथ, हम यह टपकाना के लिए एक सरल, संगत, गैर सर्जिकल विधि का वर्णन. ट्रेकिआ के उद्घाटन के एक फेफड़ाओं को सुनने का एक यंत्र का उपयोग करते हुए कल्पना और एक तुला gavage सुई तो ट्रेकिआ में सीधे डाला innoculum उद्धार. हम भी कटाई और LDLNs और प्रतिजन तस्करी के प्रवाह cytometry द्वारा विश्लेषण के लिए फेफड़ों के प्रसंस्करण के लिए प्रक्रियाओं का वर्णन.

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Non-surgical Intratracheal Instillation of Mice with Analysis of Lungs and Lung Draining Lymph Nodes by Flow Cytometry

हम ट्रेकिआ के माध्यम से anesthetized चूहों के फेफड़ों में गैर सर्जिकल परीक्षण सामग्री के वितरण का वर्णन. इस विधि फेफड़ों बैक्टीरियल और वायरल रोगज़नक़ों, साइटोकिन्स, एंटीबॉडी, मोती, रसायन, या रंजक के लिए जोखिम देता है. हम आगे और कटाई का वर्णन प्रवाह cytometry के लिए और फेफड़ों फेफड़ों draining लिम्फ नोड्स (LDLNs) के प्रसंस्करण.

गैर शल्य चिकित्सा फेफड़े और फेफड़े Draining लिम्फ नोड्स के प्रवाह cytometry द्वारा विश्लेषण के साथ चूहे की Intratracheal टपकाना

Phagocytic cells such as alveolar macrophages and lung dendritic cells (LDCs) continuously sample antigens from the alveolar spaces in the 
lungs. LDCs, ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Studying Interactions of Staphylococcus aureus with Neutrophils by Flow Cytometry and Time Lapse Microscopy

Studying Interactions of Staphylococcus aureus with Neutrophils by Flow Cytometry and Time Lapse Microscopy

की बातचीत का अध्ययन<em&gt; स्ताफ्य्लोकोच्चुस</em&gt; फ्लो और समय चूक माइक्रोस्कोपी द्वारा न्यूट्रोफिल साथ

We present methods to study the effect of phenol soluble modulins (PSMs)  and other toxins produced and secreted by Staphylococcus  aureus on neutrophils. ...

Detection of Fluorescent Nanoparticle Interactions with Primary Immune Cell Subpopulations by Flow Cytometry

फ्लो द्वारा प्राथमिक प्रतिरक्षा सेल subpopulations साथ फ्लोरोसेंट Nanoparticle बातचीत का पता लगाने

Engineered nanoparticles are endowed with very promising properties for therapeutic and diagnostic purposes. This work describes a fast and reliable ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

Draining लिम्फ नोड्स में Murine त्वचा वृक्ष के समान कोशिकाओं के प्रवास का अध्ययन करने के साथ संक्रमण के दौरान एक CFSE आधारित परख<em&gt; माइकोबैक्टीरियम बोविस</em&gt; Bacille Calmette-Guérin

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

Intracellular Staining and Flow Cytometry to Identify Lymphocyte Subsets within Murine Aorta, Kidney and Lymph Nodes in a Model of Hypertension

Intracellular धुंधला और फ्लो का उच्च रक्तचाप के एक मॉडल में murine महाधमनी, किडनी और लिम्फ नोड्स के भीतर लिम्फोसाइट सबसेट की पहचान करने के लिए

It is now well known that T lymphocytes play a critical role in the development of several cardiovascular diseases1,2,3,4,5. For example, studies from our ...

Measurement of T Cell Alloreactivity Using Imaging Flow Cytometry

टी सेल Alloreactivity का मापन इमेजिंग फ्लो का उपयोग करना

The measurement of immunological reactivity to donor antigens in transplant recipients is likely to be crucial for the successful reduction or withdrawal ...

Collection and Processing of Lymph Nodes from Large Animals for RNA Analysis: Preparing for Lymph Node Transcriptomic Studies of Large Animal Species

आरएनए विश्लेषण के लिए बड़े जानवरों से लिम्फ नोड्स के संग्रह और प्रसंस्करण: बड़े पशु प्रजातियों के लिम्फ नोड Transcriptomic अध्ययन के लिए तैयारी

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Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

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Monocytes are key contributors in various inflammatory disorders and alterations to these cells, including their subset proportions and functions, can ...

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मूरीन थाइमस, अग्नाशय Draining लिम्फ नोड और प्लीहा प्रवाह cytometry का उपयोग में नियामक टी सेल सबसेट का निर्धारण

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Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

न्यूट्रोफिल-लाइनेज सेल के मास साइटोमेट्री विश्लेषण के लिए पूरे अस्थि मज्जा की तैयारी

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...