Name: in vivo laser axotomy in c. elegans
Uploaded: 2011-05-19T12:00:00
Duration: 9 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Laser Axotomy in C. elegans at JoVE.com

ويتم تمويل عمل في مختبر Hammarlund بواسطة : المعاهد الوطنية للصحة منح NS066082 R01 - 01 وT32GM007223 ، ومؤسسة بيكمان ، والمؤسسة الطبية إليسون.

<ol>
	<li>Hammarlund, M., Nix, P., Hauth, L., Jorgensen, E. M., Bastiani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axon+regeneration+requires+a+conserved+MAP+kinase+pathway.">Axon regeneration requires a conserved MAP kinase pathway.</a> Science. 323, 802-806 (2009).</li><li>Ghosh-Roy, A., Wu, Z., Goncharov, A., Jin, Y., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+and+Cyclic+AMP+Promote+Axonal+Regeneration+in+Caenorhabditis+elegans+and+Require+DLK-1+Kinase.">Calcium and Cyclic AMP Promote Axonal Regeneration in Caenorhabditis elegans and Require DLK-1 Kinase.</a> Journal of Neuroscience. 30, 3175-3183 (2010).</li><li>Wu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caenorhabditis+elegans+neuronal+regeneration+is+influenced+by+life+stage,+ephrin+signaling,+and+synaptic+branchi+ng.">Caenorhabditis elegans neuronal regeneration is influenced by life stage, ephrin signaling, and synaptic branchi ng.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104, 15132-15137 (2007).</li><li>Yan, D., Wu, Z., Chisholm, A. D., Jin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+DLK-1+Kinase+Promotes+mRNA+Stability+and+Local+Translation+in+C.+elegans+Synapses+and+Axon+Regeneration.">The DLK-1 Kinase Promotes mRNA Stability and Local Translation in C. elegans Synapses and Axon Regeneration.</a> Cell. 138, 1005-1018 (2009).</li><li>Yanik, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosurgery:+Functional+regeneration+after+laser+axotomy.">Neurosurgery: Functional regeneration after laser axotomy.</a> Nature. 432, 822-822 (2004).</li><li>Gabel, C. V., Antoine, F., Chuang, C., Samuel, A. D. T., Chang, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+nanosecond+laser+axotomy:+cavitation+dynamics+and+vesicle+transport.">In vivo nanosecond laser axotomy: cavitation dynamics and vesicle transport.</a> Optics Express. 16, 9884-9894 (2008).</li><li>Rao, G. N., Kulkarni, S. S., Koushika, S. P., Rau, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+nanosecond+laser+axotomy:+cavitation+dynamics+and+vesicle+transport.">In vivo nanosecond laser axotomy: cavitation dynamics and vesicle transport.</a> Optics Express. 16, 9884-9894 (2008).</li><li>Wood, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Nematode+Caenorhabditis+Elegans.">The Nematode Caenorhabditis Elegans.</a> , (1988).</li><li>McLntire, S. L., Jorgensen, E., Kaplan, J., Horvitz, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+GABAergic+nervous+system+of+Caenorhabditis+elegans.">The GABAergic nervous system of Caenorhabditis elegans.</a> Nature. 364, 337-341 (1993).</li><li>Bourgeois, F., Ben-Yakar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femtosecond+laser+nanoaxotomy+properties+and+their+effect+on+axonal+recovery+in.">Femtosecond laser nanoaxotomy properties and their effect on axonal recovery in.</a> C. elegans. Optics Express. 15, 8521-8531 (2007).</li><li>Chung, S., Mazur, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femtosecond+laser+ablation+of+neurons+in+C.+elegans+for+behavioral+studies.">Femtosecond laser ablation of neurons in C. elegans for behavioral studies.</a> Applied Physics A: Materials Science &#38; Processing. 96, 335-341 (2009).</li><li>Steinmeyer, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Construction+of+a+femtosecond+laser+microsurgery+system.">Construction of a femtosecond laser microsurgery system.</a> Nature Protocols. 5, 395-407 (2010).</li><li>Wang, Z., Jin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+axon+regeneration.+Current+Opinion+in+Neurobiology.">Genetic dissection of axon regeneration. Current Opinion in Neurobiology.</a> , (2010).</li><li>Huang, X., Cheng, H. -. J., Tessier-Lavigne, M., Jin, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAX-1,+a+Novel+PH/MyTH4/FERM+Domain+Cytoplasmic+Protein+Implicated+in+Netrin-Mediated+Axon+Repulsion.">MAX-1, a Novel PH/MyTH4/FERM Domain Cytoplasmic Protein Implicated in Netrin-Mediated Axon Repulsion.</a> Neuron. 34, 563-576 (2002).</li><li>McIntire, S. L., Reimer, R. J., Schuske, K., Edwards, R. H., Jorgensen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+the+vesicular+GABA+transporter.">Identification and characterization of the vesicular GABA transporter.</a> Nature. 389, 870-876 (1997).</li><li>Fang-Yen, C., Gabel, C. V., Samuel, A. D. T., Bargmann, C. I., Avery, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laser microsurgery in C. elegans in Methods in Cell Biology: Caenorhabditis elegans: Modern Biological Analysis of an Organism. , .</li><li>Guo, S. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Femtosecond+laser+nanoaxotomy+lab-on-a-chip+for+in+vivo+nerve+regeneration+studies.">Femtosecond laser nanoaxotomy lab-on-a-chip for in vivo nerve regeneration studies.</a> Nature Methods. 5, 531-533 (2008).</li><li>Zeng, F., Rohde, C. B., Yanik, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sub-cellular+precision+on-chip+small-animal+immobilization,+multi-photon+imaging+and+femtosecond-laser+manipulation.">Sub-cellular precision on-chip small-animal immobilization, multi-photon imaging and femtosecond-laser manipulation.</a> Lab on a Chip. 8, 653-656 (2008).</li><li>Rohde, C. B., Zeng, F., Gonzalez-Rubio, R., Angel, M., Yanik, M. F., F, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+system+for+on-chip+high-throughput+whole-animal+sorting+and+screening+at+subcellular+resolution.">Microfluidic system for on-chip high-throughput whole-animal sorting and screening at subcellular resolution.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104, 13891-13895 (2007).</li><li>Hulme, S. E., Shevkoplyas, S. S., Apfeld, J., Fontana, W., Whitesides, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfabricated+array+of+clamps+for+immobilizing+and+imaging+C.+elegans.">A microfabricated array of clamps for immobilizing and imaging C. elegans.</a> Lab on a Chip. 7, 1515-1523 (2007).</li><li>Ben-Yakar, A., Chronis, N., Lu, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidics+for+the+analysis+of+behavior,+nerve+regeneration,+and+neural+cell+biology+in+C.+elegans.">Microfluidics for the analysis of behavior, nerve regeneration, and neural cell biology in C. elegans.</a> Current Opinion in Neurobiology. 19, 561-567 (2009).</li><li>Samara, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+in+vivo+femtosecond+laser+neurosurgery+screen+reveals+small-molecule+enhancer+of+regeneration.">Large-scale in vivo femtosecond laser neurosurgery screen reveals small-molecule enhancer of regeneration.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. , (2010).</li><li>Nelson, F. K., Riddle, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+study+of+the+Caenorhabditis+elegans+secretory-excretory+system+using+laser+microsurgery.">Functional study of the Caenorhabditis elegans secretory-excretory system using laser microsurgery.</a> Journal of Experimental Zoology. 231, 45-56 (1984).</li><li>Sulston, J. E., White, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+and+cell+autonomy+during+postembryonic+development+of+Caenorhabditis+elegans.">Regulation and cell autonomy during postembryonic development of Caenorhabditis elegans.</a> Developmental Biology. 78, 577-597 (1980).</li><li>Kimble, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+cell+lineage+following+laser+ablation+of+cells+in+the+somatic+gonad+of+Caenorhabditis+elegans.">Alterations in cell lineage following laser ablation of cells in the somatic gonad of Caenorhabditis elegans.</a> Developmental Biology. 87, 286-300 (1981).</li><li>Allen, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-synapse+ablation+and+long-term+imaging+in+live+C.+elegans.">Single-synapse ablation and long-term imaging in live C. elegans.</a> Journal of Neuroscience Methods. 173, 20-26 (2008).</li><li>Pujol, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+Innate+Immune+Responses+to+Infection+and+Wounding+in+the+C.+elegans+Epidermis.">Distinct Innate Immune Responses to Infection and Wounding in the C. elegans Epidermis.</a> Current biology. CB 18, 481-489 (2008).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

وقد استخدمت مجموعة متنوعة من نظم الليزر لقطع neurites في C. وقد درست ايليجانس ، والعديد من الدراسات أدائها بالتفصيل 3،7،10،11. MicroPoint الليزر المستخدمة في بروتوكول لدينا هو نظام تسليم المفتاح هو أن من السهل اقامة وصيانة ويتوفر بتكلفة منخفضة للباحثين بالمقارنة مع نظام الليزر TI - الياقوت. بالمقارنة مع نظام TI - الياقوت ، ومع ذلك ، فمن المتوقع أن الليزر MicroPoint أن تسبب أضرارا لأكبر مساحة ، والذي قد يكون غير ملائم لبعض التطبيقات. إذا كان المطلوب هو نظام TI - الياقوت ، بروتوكولا ممتازة لبناء مثل هذا النظام غير متوفر 12. يمكن تنفيذ البروتوكول الحالي على مجموعة متنوعة من الخلايا العصبية في C. ايليجانس ، ومع ذلك ، نلاحظ أن من المتوقع أن الاختلافات في قدرات التجدد بين أنواع متميزة من الخلايا العصبية 13. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن تؤثر على خلفيات مختلفة وراثيا نجاح التجدد. على الرغم من أن النسبة المئوية لتجديد الخلايا العصبية GABA يتماشى إلى حد ما بين مختلف السلالات المعدلة وراثيا علامة ، لاحظنا زيادة طفيفة في العام التجدد في juIs76 14 مقابل 15 oxIs12 الديدان. الاختلافات بين الخلايا العصبية من علامات اللمس كما وصفت 2. نحن نفضل أن شل الديدان مع microbeads بدلا من المسكنات مثل حبات نتيجة في أسرع وأكثر اتساقا تجميد 16. وهذا هو أيضا من المفيد ونحن قادرون على مراقبة التجدد خالية من أي آثار محتملة ، بسبب الخلط تخدير 17. بديل مخدر خالية طريقة لتجميد هو استخدام أجهزة ميكروفلويديك. وقد تم استخدام axotomy على microfluidics لوصف على نطاق واسع 17-22. نجد أن تتفق مع الاستخدام ، يتم تغيير وظائف الليزر أفضل عندما الكومارين 440 في الخلية صبغ مرة واحدة كل أسبوع بعد إجراء المبين في دليل MicroPoint. إذا لزم الأمر ، يمكن استخدام شريط التمرير لزيادة توهين السلطة ، ولكن هذا قد يكون مؤشرا لصبغ القديمة أو اختلال بالليزر. أيضا ، فإن الخلية صبغ له عمر محدود ، وسوف تحتاج في نهاية المطاف إلى إعادة بناء أو استبدالها (انظر استكشاف أخطاء). قد يكون من الصعب على المناورة في neurite الهدف تحت مرمى تلك العلامة تركيز الليزر ، وخاصة إذا ما شلت غير كامل الحيوان. نجد أن مرحلة دليل ليس الأمثل لهذا الغرض ، على الرغم من أنها صالحة للاستعمال بالتأكيد. مرحلة عصا التحكم التي تسيطر عليها بمحركات أكثر دقة ، ونجد أن استخدام البرمجيات التي تدعم الصور مع سحب الماوس لتحريك الآلية المرحلة هو أفضل. عناصر نيكون يوفر هذه الميزة والموصوفة في هذا البروتوكول ، ولكن الحزمة Micromanager مجانا ، فضلا عن غيرها من البرامج والتصوير ، وربما وظيفة مماثلة. وهناك طريقة مختلفة لاستهداف غرامة لنقل التركيز الليزر ، بدلا من الحيوان. A - الجلفانومتر شعاع التوجيه الآلية المتاحة بوصفها إضافات إلى ليزر MicroPoint ، إذا كان يفضل هذا النهج. إلى جانب تطبيقها لدراسة تجديد الخلايا العصبية ، ويمكن استخدام الليزر ليجتذ أنواع الخلايا الأخرى ، مثل العضلات والجلد ، أو خلايا متخصصة ، أو لعرقلة المشابك العصبية المحددة 23-27. وعلاوة على ذلك ، يمكن التحقيق المسارات التي تنظم تنكس الخلايا العصبية التي ترافق الإصابة أو المرض مع هذا النظام. على هذا النحو ، فإن استخدام الليزر نابض الاستمرار في إلقاء الضوء على العوامل الوراثية في كل خلية والتغيرات البيولوجية التي تسهل تجديد الخلايا العصبية والعمليات الأخرى ذات الصلة. المشاكل : ووصف وهنا بعض المشاكل المشتركة والحلول المرتبطة بها. <ol type="a" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الليزر ليس القطع بشكل صحيح. وهذا هو المرجح لأن الليزر هو إما للخروج من التركيز (انظر القسم 2) ، أو الصبغة في الخلية الصبغة يحتاج إلى استبدال (انظر MicroPoint يدوي). بدلا من ذلك ، قد صبغ الخلية تحتاج إلى استبدال أو إعادة بنائها. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الديدان تتحرك على لوحة agarose. عموما هذه هي علامة على أن لوحة agarose رطبة جدا. نجد أن الحاجة إلى منصات أن تترك لمدة 30 ثانية تقريبا قبل أن يتم وضعها على هذه الديدان للتحايل على هذه المشكلة. يمكنك أيضا محاولة استخدام أصغر الحجم (0.05 ميكرون) microbeads. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الانتعاش من الديدان أمر صعب وغير فعال. يمكن أن يكون سبب ذلك عن طريق إزالة ساترة غير صحيحة أو بواسطة وسادة agarose الجافة. إذا لوحة جافة جدا ، فقد لاحظت أن محاور تطوير مظهر مطرز. في بعض الحالات ، وهذا هو لأنه لم توضع الديدان على لوحة كافية بعد فترة وجيزة صدر فيه. بدلا من ذلك ، قد يكون المخزون القديم من حل agarose لها تركيز أعلى من 3 ٪ بعد ذوبان المتكررة. </li></ol>

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> البوليستيرين الخرز 0.05 ميكرون </td><td> Polysciences ، وشركة </td><td> 08691 </td><td></td></tr><tr><td> البوليستيرين الخرز 0.10 ميكرون </td><td> Polysciences ، وشركة </td><td> 00876 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose GPG / جنيه </td><td> الأمريكية Bioanalytical </td><td> 00972 </td><td> نقي جدا </td></tr><tr><td> الصقر البوليستيرين مل 14 جولة القاع الأنبوبة </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 352057 </td><td> 17 × 100 ملم الطراز ، nonpyrogenic </td></tr><tr><td> الحرارية العلمية عادي الشرائح المجهر precleaned </td><td> ايري الشركة العلمية </td><td> 420 - 004T </td><td> 3 &quot;س 1&quot; س 1 ملم </td></tr><tr><td> تغطية زلات </td><td> VWR </td><td> 48366 205 </td><td> 18 ملم × 18 ملم رقم 1 1 / 2 </td></tr><tr><td> KIMTECH Kimwipes العلوم </td><td> كيمبرلي كلارك </td><td> 34155 </td><td></td></tr><tr><td> دينار بحريني فالكون 100 × 15mm طبق بيتري ستايل </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 351029 </td><td></td></tr><tr><td> شريط فارغ 3/4w س 500L </td><td> TimeMed </td><td> T - 512 </td><td></td></tr><tr><td> الغمر النفط </td><td> نيكون </td><td></td><td> نوع A ، الثانية = 1.515 </td></tr><tr><td> EG1285 أو CZ1200 </td><td> جيم ايليجانس مركز الوراثية </td><td> http://www.cbs.umn.edu/CGC/strains/ </td><td></td></tr><tr><td> OptiScan الثاني </td><td> العلم المسبق </td><td></td><td></td></tr><tr><td> شيكل ، أو وصول عناصر برازيلي </td><td> نيكون </td><td></td><td></td></tr><tr><td> نظام ليزر تذرية MicroPoint </td><td> الضوئية العلمية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> مجمع المجهر </td><td> نيكون </td><td> كسوف 80i </td><td></td></tr><tr><td> هاماماتسو الكاميرا </td><td> الضوئيات هاماماتسو </td><td> نموذج C8484 - 05G01 </td><td></td></tr><tr><td> Dell من Precision T3400 PC مع انتل كور ديو 2 </td><td> ديل </td><td></td><td></td></tr><tr><td> التشغيل Windows XP Professional </td><td></td><td> مايكروسوفت </td><td> الإصدار 2002 ، سلسلة حزمة 3 </td></tr><tr><td> المزدوج الجاف حمام حاضنة </td><td> فيشر العلمية </td><td></td><td> الضوابط التناظرية </td></tr><tr><td> 4X خطة موضوعية فلور </td><td> نيكون </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 100X خطة النفط VC آبو الهدف </td><td> نيكون </td><td></td><td></td></tr><tr><td> دومون # 5 / 45 ملقط </td><td> دومون </td><td> 11251-35 </td><td> Dumoxel نصائح القياسية ، ويمكن أيضا استخدام # 7 </td></tr><tr><td> تشريح مجهر </td><td> نيكون </td><td> SMZ800 </td><td> NI - 150 مع اضاءة عالية الكثافة </td></tr></tbody></table>

in vivo laser axotomy in c. elegans

الخلايا العصبية التواصل مع الخلايا الأخرى عبر محاور عصبية والتشعبات ، وتمديد غشاء نحيلة التي تحتوي على التخصصات ما قبل أو ما بعد متشابك. في حالة تلف الخلايا العصبيه بسبب الاصابة أو المرض ، فإنه قد تتجدد. العوامل الذاتية وخلية خارجي تؤثر على قدرة الخلايا العصبية على تجديد واستعادة وظيفة. في الآونة الأخيرة ، والديدان الخيطية C. كما برز ايليجانس كائن نموذجا ممتازا لتحديد الجينات ويشير المسارات التي تؤثر على الخلايا العصبية تجديد 1-6. الطريقة الرئيسية للشروع في تجديد الخلايا العصبية في C. ايليجانس هو الليزر بوساطة القطع ، أو axotomy. خلال axotomy ، هو قطعت عملية fluorescently باستخدام الخلايا العصبية التي تحمل علامات عالية الطاقة البقول. في البداية ، وتجديد الخلايا العصبية في C. تم فحص ايليجانس باستخدام الليزر الفيمتو ثانية تضخيم 5. ومع ذلك ، فقد أظهرت دراسات لاحقة التجديد التي يمكن استخدامها ليزر نابض التقليدية لقطع بدقة الخلايا العصبية في الجسم الحي ، واستثارة رد فعل مماثل التجدد 1،3،7. نقدم بروتوكول للأداء في الجسم الحي ليزر في axotomy الدودة باستخدام MicroPoint نابض الليزر ، ونظام تسليم المفتاح الذي يتوفر بسهولة والتي تم استخدامها على نطاق واسع لاجتثاث الخلايا المستهدفة. وصفنا محاذاة الليزر ، وتركيب والديدان ، وقطع الخلايا العصبية محددة ، وتقييم التجديد اللاحقة. يوفر النظام القدرة على خفض أعداد كبيرة من الخلايا العصبية في الديدان متعددة خلال تجربة واحدة. وبالتالي ، ليزر axotomy على النحو الموصوف هنا هو وجود نظام فعال لبدء وتحليل عملية التجدد.

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Laser Axotomy in C. elegans at JoVE.com

In vivo Laser Axotomy in C. elegans

بروتوكول لخفض الخلايا العصبية في<em&gt; C. ايليجانس</em&gt; مع تقدم ليزر نابض MicroPoint. نحن تصف وضع النظام ، شل حركة الديدان ، وقطع الخلايا العصبية المسماة. وتشمل مزايا نظام منخفض التكلفة نسبيا ، والقدرة على قطع العمليات العصبية أو خلايا يجتذ<em&gt; في الجسم الحي</em&gt;.

في Axotomy الليزر المجراة في C. ايليجانس

Neurons communicate with other cells via axons and dendrites, slender membrane extensions that contain pre- or post-synaptic specializations. If a neuron ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In vivo Laser Axotomy in C. elegans

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

ترنسفكأيشن من خلايا الشبكية بواسطة الماوس العقدة في الجسم الحي Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

الفلورسنت وصفها الوراء يسمح لخارج الخلية المستهدفة واحدة وحدة التسجيل من الخلايا العصبية التي تم تحديدها<em&gt; في الجسم الحي</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Functional Neuroimaging Using Ultrasonic Blood-brain Barrier Disruption and Manganese-enhanced MRI

تصوير الأعصاب وظيفية عن طريق الموجات فوق الصوتية تعطيل حاجز الدم في الدماغ والتصوير بالرنين المغناطيسي المنغنيز معززة لل

Although mice are the dominant model system for studying the genetic and molecular underpinnings of neuroscience, functional neuroimaging in mice remains ...

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

Automated Quantification of Synaptic Fluorescence in C. elegans

الآلي الكمي من الإسفار متشابك في<em&gt; C. ايليجانس</em

Synapse strength refers to the amplitude of postsynaptic responses to presynaptic neurotransmitter release events, and has a major impact on overall ...

C. elegans Tracking and Behavioral Measurement

C. elegans Tracking and Behavioral Measurement

C. ايليجانس تتبع وقياس السلوكية

We have developed instrumentation, image processing, and data analysis techniques to quantify the locomotory behavior of C. elegans as it crawls on the ...

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

A Molecular Readout of Long-term Olfactory Adaptation in C. elegans

A قراءات الجزيئية من التكيف على المدى الطويل في الشم<em&gt; C. ايليجانس</em

During sustained stimulation most sensory neurons will adapt their response by decreasing their sensitivity to the signal. The adaptation response helps ...

In vivo Neuronal Calcium Imaging in C. elegans

In vivo Neuronal Calcium Imaging in C. elegans

الكالسيوم في الجسم الحي التصوير الخلايا العصبية في C. ايليجانس

The nematode worm C. elegans is an ideal model organism  for relatively simple, low cost neuronal imaging in vivo. Its small transparent body and simple, ...

Visualizing Neuroblast Cytokinesis During C. elegans Embryogenesis

Visualizing Neuroblast Cytokinesis During C. elegans Embryogenesis

تصور أرومة عصبية خلال الانقسام السيتوبلازمي<em&gt; C. ايليجانس</em&gt; مرحلة التطور الجنيني

This protocol describes the use of fluorescence microscopy to image dividing cells within developing Caenorhabditis elegans embryos. In particular, this ...

Laser Nanosurgery of Cerebellar Axons In Vivo

Laser Nanosurgery of Cerebellar Axons In Vivo

الليزر Nanosurgery من مخيخي محاور عصبية<em&gt; في فيفو</em

Only a few neuronal populations in the central nervous system (CNS) of adult mammals show local regrowth upon dissection of their axon. In order to ...

In Vivo Imaging of Dauer-specific Neuronal Remodeling in C. elegans

In Vivo Imaging of Dauer-specific Neuronal Remodeling in C. elegans

في فيفو التصوير من داور محددة العصبية في إعادة عرض C. ايليجانس

The mechanisms controlling stress-induced phenotypic plasticity in animals are frequently complex and difficult to study in vivo. A classic example of ...