Name: seven steps to stellate cells
Uploaded: 2011-05-10T13:00:00
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Ce travail a été financé par le Prix de la famille Smith pour l&#39;excellence en recherche biomédicale et les NIH RO1 AI083426-01 (FW). Patrick Maschmeyer et Melanie Flach sont soutenus par des bourses de doctorat de la Fondation de Boehringer Ingelheim.

Souris C57BL / 6 doit être utilisé à ~ 20 semaines d&#39;âge ou plus âgés. L&#39;utilisation de souris mâles pesant 25-30g est recommandée. Le rendement des cellules étoilées peut être augmentée par l&#39;alimentation des souris de la vitamine A régime enrichi pour 2 mois avant l&#39;isolement de cellules étoilées. Environ 2x10 5 cellules étoilées du foie peut être purifié à partir du foie d&#39;un C57BL / 6 de la souris, alors que le rendement des cellules étoilées du souris Balb / c es...

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	<li>Friedman, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+stellate+cells:+protean,+multifunctional,+and+enigmatic+cells+of+the+liver.">Hepatic stellate cells: protean, multifunctional, and enigmatic cells of the liver.</a> Physiol Rev. 88, 125-172 (2008).</li><li>Geerts, A. H. i. s. t. o. r. y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=heterogeneity,+developmental+biology,+and+functions+of+quiescent+hepatic+stellate+cells.">heterogeneity, developmental biology, and functions of quiescent hepatic stellate cells.</a> Semin Liver Dis. 21, 311-335 (2001).</li><li>Gressner, A. M. &. a. m. p. ;. a. m. p., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modern+pathogenetic+concepts+of+liver+fibrosis+suggest+stellate+cells+and+TGF-beta+as+major+players+and+therapeutic+targets.">Modern pathogenetic concepts of liver fibrosis suggest stellate cells and TGF-beta as major players and therapeutic targets.</a> J Cell Mol Med. 10, 76-99 (2006).</li><li>Reynaert, H., Thompson, M. G., Thomas, T., Geerts, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+stellate+cells:+role+in+microcirculation+and+pathophysiology+of+portal+hypertension.">Hepatic stellate cells: role in microcirculation and pathophysiology of portal hypertension.</a> Gut. 50, 571-581 (2002).</li><li>Winau, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ito+cells+are+liver-resident+antigen-presenting+cells+for+activating+T+cell+responses.">Ito cells are liver-resident antigen-presenting cells for activating T cell responses.</a> Immunity. 26, 117-129 (2007).</li><li>Minicis, S. D. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiles+during+hepatic+stellate+cell+activation+in+culture+and+in+vivo.">Gene expression profiles during hepatic stellate cell activation in culture and in vivo.</a> Gastroenterology. 132, 1937-1946 (2007).</li><li>Knittel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+liver+myofibroblasts+and+hepatic+stellate+cells+in+normal+and+diseased+rat+livers:+distinct+roles+of+(myo-)fibroblast+subpopulations+in+hepatic+tissue+repair.">Localization of liver myofibroblasts and hepatic stellate cells in normal and diseased rat livers: distinct roles of (myo-)fibroblast subpopulations in hepatic tissue repair.</a> Histochem Cell Biol. 112, 387-401 (1999).</li></ol>

Cellules étoilées du foie réguler essentielles des processus physiologiques et physiopathologiques dans le foie. Par ailleurs, les cellules étoilées possèdent des propriétés présentant un antigène, les rendant une composante importante de la réponse immunitaire hépatique. Bien que les cellules étoilées hépatiques comprennent 10-15% du nombre total de cellules dans le foie, l&#39;isolement de ces cellules est difficile en raison de leur localisation dans l&#39;espace de Disse périsinusoïdales. <p cla...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom de réactif </th><th> Société </th><th> Catalogue No. </th></tr><tr><td> Passoire cellulaire 70μm </td><td> BD </td><td> 352350 </td></tr><tr><td> CaCl 2 x 2 H 2 O </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C3306 </td></tr><tr><td> Collagénase P </td><td> Roche </td><td> 11249002001 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Gibco </td><td> 11960 </td></tr><tr><td> DNase I </td><td> Roche </td><td> 10104159001 </td></tr><tr><td> DPBS </td><td> Cellgro </td><td> 21 à 031 cv- </td></tr><tr><td> EGTA </td><td> Fluka </td><td> 3777 </td></tr><tr><td> Sérum de veau fœtal </td><td> Gibco </td><td> 16000 </td></tr><tr><td> Le glucose </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G7528 </td></tr><tr><td> Tubes centrifugation en gradient </td><td> Greiner Bio-One </td><td> 163160 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Gibco </td><td> 15630 </td></tr><tr><td> KCL </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P9541 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P9791 </td></tr><tr><td> L-Glutamine </td><td> Gibco </td><td> 25030 </td></tr><tr><td> MgCl 2 x 6 H 2 O </td><td> Fluka </td><td> 63068 </td></tr><tr><td> MgSO 4 7H 2 O x </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M2773 </td></tr><tr><td> Na 2 HPO 4 x 2H 2 O </td><td> Fluka </td><td> 71643 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S3014 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 x H 2 O </td><td> Fluka </td><td> 71507 </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> Fluka </td><td> 71628 </td></tr><tr><td> Nycodenz </td><td> Accudenz AG </td><td> AN7050/BLK </td></tr><tr><td> Pénicilline / streptomycine </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td></tr><tr><td> Pompe péristaltique </td><td> Cole Parmer </td><td> HV-7523-70 </td></tr><tr><td> Rouge de phénol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P4633 </td></tr><tr><td> Pronase E </td><td> Calbiochem </td><td> 7433-2 </td></tr><tr><td> Tube de silicone </td><td> Masterflex </td><td> HV-96440-14 </td></tr><tr><td> Pyruvate de sodium </td><td> Gibco </td><td> 11360 </td></tr><tr><td> Flacon de culture tissulaire (25cm 2) </td><td> BD </td><td> 353108 </td></tr><tr><td> Ensemble de perfusion Winged </td><td> Terumo </td><td> 1SV27EL </td></tr></tbody></table>

seven steps to stellate cells

Cellules étoilées du foie sont le foie-résident des cellules de morphologie en forme d&#39;étoile et sont situés dans l&#39;espace de Disse entre les cellules endothéliales sinusoïdales du foie et de 1,2 hépatocytes. Cellules étoilées sont dérivées à partir de précurseurs de moelle osseuse et de stocker jusqu&#39;à 80% de la vitamine A totale du corps 1, 2. Lors de l&#39;activation des cellules étoilées se différencier en myofibroblastes pour produire la matrice extracellulaire, contribuant ainsi à 3 fibrose hépatique. Basé sur leur capacité à se contracter, les cellules étoilées myofibroblastique peut réguler le tonus vasculaire associée à l&#39;hypertension portale 4. Récemment, nous avons démontré que les cellules étoilées du foie sont des cellules présentant l&#39;antigène puissants et peuvent activer les cellules NKT ainsi que les lymphocytes T conventionnels 5. Nous présentons ici une méthode pour la préparation efficace des cellules étoilées du foie à partir du foie de souris. En raison de leur localisation périsinusoïdales, l&#39;isolement de cellules étoilées du foie est un processus multi-étapes. Afin de rendre accessibles les cellules étoilées à l&#39;isolement de l&#39;espace de Disse, foies de souris sont perfusées in situ avec le E enzymes digestives pronase et la collagénase P. perfusion Après, le tissu hépatique est soumis à un traitement enzymatique supplémentaire avec pronase E et P dans la collagénase vitro. Par la suite, la méthode tire parti de l&#39;énorme quantité de gouttelettes lipidiques de vitamine A-stockage dans les cellules étoilées du foie. Cette fonctionnalité permet la séparation des cellules étoilées du foie d&#39;autres types de cellules par centrifugation sur un gradient de 8% Nycodenz. Le protocole décrit ici donne une population très pure et homogène de cellules étoilées. Pureté de la préparation peut être évaluée par coloration de la molécule marqueur protéique fibrillaire gliale acide (GFAP), avant l&#39;analyse par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux. En outre, la microscopie optique révèle l&#39;aspect unique de la forme d&#39;étoile cellules étoilées du foie qui abritent de grandes quantités de gouttelettes lipidiques. Pris ensemble, nous présentons un protocole détaillé pour l&#39;isolement efficace des cellules étoilées du foie, y compris des images représentatives de leur aspect morphologique et d&#39;expression GFAP qui aident à définir l&#39;entité de cellules étoilées.

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Seven Steps to Stellate Cells

Nous décrivons ici une méthode pour l&#39;isolement de cellules étoilées du foie à partir du foie de souris. Pour la purification de cellules étoilées, les foies de souris sont digérés<em&gt; In situ</em&gt; Et<em&gt; In vitro</em&gt; Par la pronase-collagénase traitement préalable à la centrifugation en gradient de densité. Cette technique rendements très pure cellules étoilées du foie.

Sept étapes pour Stellate Cellules

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

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Assessing Stomatal Response to Live Bacterial Cells using Whole Leaf Imaging

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Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

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The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

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Une méthode mise à jour EPA 1623 qui utilise tangentielle débit à fibres creuses d&#39;ultrafiltration et de chaleur étapes de dissociation pour la détection de voie d&#39;eau<em&gt; Cryptosporidium</em&gt; Et<em&gt; Giardia spp.</em

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