Name: seven steps to stellate cells
Uploaded: 2011-05-10T13:00:00
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Questo lavoro è stato finanziato dalla famiglia Smith Award per l&#39;eccellenza nella ricerca biomedica e NIH RO1 AI083426-01 (FW). Patrick Maschmeyer e Melanie Flach sono supportati da borse di dottorato da Boehringer Ingelheim Fondazione.

Topi C57BL / 6 dovrebbero essere usati a ~ 20 settimane di età o più. L&#39;utilizzo di topi maschi del peso 25-30g è raccomandato. La resa di cellule stellate può essere aumentata di alimentazione topi un A-arricchito di vitamina dieta per 2 mesi prima di isolamento delle cellule stellate. Circa 2x10 5 cellule stellate epatiche può essere purificato dal fegato di un C57BL / 6 del mouse, mentre la resa di cellule stellate da topi BALB / c è nettamente superiore. Il protocollo che segue è regolata a 5 t...

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	<li>Friedman, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+stellate+cells:+protean,+multifunctional,+and+enigmatic+cells+of+the+liver.">Hepatic stellate cells: protean, multifunctional, and enigmatic cells of the liver.</a> Physiol Rev. 88, 125-172 (2008).</li><li>Geerts, A. H. i. s. t. o. r. y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=heterogeneity,+developmental+biology,+and+functions+of+quiescent+hepatic+stellate+cells.">heterogeneity, developmental biology, and functions of quiescent hepatic stellate cells.</a> Semin Liver Dis. 21, 311-335 (2001).</li><li>Gressner, A. M. &. a. m. p. ;. a. m. p., Weiskirchen, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modern+pathogenetic+concepts+of+liver+fibrosis+suggest+stellate+cells+and+TGF-beta+as+major+players+and+therapeutic+targets.">Modern pathogenetic concepts of liver fibrosis suggest stellate cells and TGF-beta as major players and therapeutic targets.</a> J Cell Mol Med. 10, 76-99 (2006).</li><li>Reynaert, H., Thompson, M. G., Thomas, T., Geerts, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatic+stellate+cells:+role+in+microcirculation+and+pathophysiology+of+portal+hypertension.">Hepatic stellate cells: role in microcirculation and pathophysiology of portal hypertension.</a> Gut. 50, 571-581 (2002).</li><li>Winau, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ito+cells+are+liver-resident+antigen-presenting+cells+for+activating+T+cell+responses.">Ito cells are liver-resident antigen-presenting cells for activating T cell responses.</a> Immunity. 26, 117-129 (2007).</li><li>Minicis, S. D. e. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+profiles+during+hepatic+stellate+cell+activation+in+culture+and+in+vivo.">Gene expression profiles during hepatic stellate cell activation in culture and in vivo.</a> Gastroenterology. 132, 1937-1946 (2007).</li><li>Knittel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+liver+myofibroblasts+and+hepatic+stellate+cells+in+normal+and+diseased+rat+livers:+distinct+roles+of+(myo-)fibroblast+subpopulations+in+hepatic+tissue+repair.">Localization of liver myofibroblasts and hepatic stellate cells in normal and diseased rat livers: distinct roles of (myo-)fibroblast subpopulations in hepatic tissue repair.</a> Histochem Cell Biol. 112, 387-401 (1999).</li></ol>

Cellule stellate epatiche regolano essenziali processi fisiologici e fisiopatologici nel fegato. Inoltre, le cellule stellate possiedono proprietà presentanti l&#39;antigene, rendendoli una componente importante della risposta immunitaria epatica. Sebbene le cellule stellate epatiche costituiscono il 10-15% del numero totale di cellule nel fegato, l&#39;isolamento di queste cellule è impegnativo a causa della loro localizzazione nello spazio di Disse perisinusoidal. Qui vi presentiamo un m...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome di reagente </th><th> Azienda </th><th> Catalog No. </th></tr><tr><td> 70μm cella Filtro </td><td> BD </td><td> 352350 </td></tr><tr><td> CaCl 2 x 2H 2 O </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C3306 </td></tr><tr><td> Collagenasi P </td><td> Roche </td><td> 11249002001 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Gibco </td><td> 11960 </td></tr><tr><td> DNasi I </td><td> Roche </td><td> 10104159001 </td></tr><tr><td> DPBS </td><td> Cellgro </td><td> 21-031-cv </td></tr><tr><td> EGTA </td><td> Fluka </td><td> 3777 </td></tr><tr><td> Siero bovino fetale </td><td> Gibco </td><td> 16000 </td></tr><tr><td> Glucosio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G7528 </td></tr><tr><td> Gradiente di centrifugazione Tubi </td><td> Greiner Bio-One </td><td> 163160 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Gibco </td><td> 15630 </td></tr><tr><td> KCL </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P9541 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P9791 </td></tr><tr><td> L-Glutammina </td><td> Gibco </td><td> 25030 </td></tr><tr><td> MgCl 2 x 6H 2 O </td><td> Fluka </td><td> 63068 </td></tr><tr><td> MgSO 4 x 7H 2 O </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M2773 </td></tr><tr><td> Na 2 HPO 4 x 2H 2 O </td><td> Fluka </td><td> 71643 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S3014 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 x H 2 O </td><td> Fluka </td><td> 71507 </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> Fluka </td><td> 71628 </td></tr><tr><td> Nycodenz </td><td> Accudenz AG </td><td> AN7050/BLK </td></tr><tr><td> Penicillina / streptomicina </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td></tr><tr><td> Pompa peristaltica </td><td> Cole Parmer </td><td> HV-7523-70 </td></tr><tr><td> Rosso fenolo </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P4633 </td></tr><tr><td> E pronasi </td><td> Calbiochem </td><td> 7433-2 </td></tr><tr><td> Tubo di silicone </td><td> Masterflex </td><td> HV-96440-14 </td></tr><tr><td> Piruvato di sodio </td><td> Gibco </td><td> 11360 </td></tr><tr><td> Tessuto fiasco cultura (25cm 2) </td><td> BD </td><td> 353108 </td></tr><tr><td> Infusione Set alato </td><td> Terumo </td><td> 1SV27EL </td></tr></tbody></table>

seven steps to stellate cells

Cellule stellate epatiche sono fegato residenti cellule simili a stelle morfologia e si trovano nello spazio di Disse tra fegato e cellule endoteliali sinusoidali 1,2 epatociti. Cellule stellate sono derivati ​​dai precursori del midollo osseo e memorizzare fino a 80% del totale del corpo di vitamina A 1, 2. Dopo l&#39;attivazione, le cellule stellate differenziarsi in miofibroblasti per produrre la matrice extracellulare, contribuendo così alla fibrosi epatica 3. Sulla base delle loro capacità di contrarsi, le cellule stellate myofibroblastic in grado di regolare il tono vascolare associata a ipertensione portale 4. Recentemente, abbiamo dimostrato che le cellule stellate epatiche sono cellule che presentano l&#39;antigene potenti e possono attivare le cellule NKT così come convenzionali linfociti T 5. Qui vi presentiamo un metodo efficiente per la preparazione delle cellule stellate epatiche dal fegato di topo. Grazie alla loro localizzazione perisinusoidal, l&#39;isolamento delle cellule stellate epatiche è un processo multi-step. Al fine di rendere accessibile a cellule stellate isolamento dallo spazio di Disse, fegati mouse sono perfusi in situ con l&#39;pronasi E enzimi digestivi e Collagenasi perfusione P. In seguito, il tessuto epatico viene sottoposto ad ulteriore trattamento enzimatico con pronasi Collagenasi E e P vitro. Successivamente, il metodo sfrutta la massiccia quantità di vitamina A-la memorizzazione gocce lipidiche nelle cellule stellate epatiche. Questa funzione consente la separazione delle cellule stellate da altri tipi di cellule epatiche per centrifugazione su una pendenza dell&#39;8% Nycodenz. Il protocollo qui descritto produce una popolazione altamente pura e omogenea delle cellule stellate. Purezza delle preparazioni può essere valutata dalla colorazione per il marcatore molecola di proteina gliale fibrillare acida (GFAP), prima dell&#39;analisi al microscopio a fluorescenza e citometria a flusso. Inoltre, microscopia luce rivela l&#39;apparizione unica di cellule epatiche stellate a forma di stella che ospitano grandi quantità di goccioline lipidiche. Nel loro insieme, vi presentiamo un protocollo dettagliato per l&#39;isolamento efficiente delle cellule stellate epatiche, comprese le immagini rappresentative del loro aspetto morfologico e di espressione GFAP che contribuiscono a definire l&#39;entità delle cellule stellate.

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Seven Steps to Stellate Cells

Qui si descrive un metodo per l&#39;isolamento delle cellule stellate epatiche dal fegato di topo. Per la purificazione delle cellule stellate, fegati mouse sono digeriti<em&gt; In situ</em&gt; E<em&gt; In vitro</em&gt; Da pronasi-collagenasi trattamento prima centrifugazione a gradiente di densità. Questa tecnica produce elevata purezza cellule stellate epatiche.

Sette passi per Stellate Cellule

Hepatic stellate cells are liver-resident  cells of star-like morphology and are located in the space of Disse between  liver sinusoidal endothelial cells ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Assessing Stomatal Response to Live Bacterial Cells using Whole Leaf Imaging

Valutazione della risposta stomatica a Live cellule batteriche utilizzando Imaging Whole Leaf

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