Name: mammary transplantation of stromal cells and carcinoma cells in c57bl/6j mice
Uploaded: 2011-08-12T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice at JoVE.com

Ce projet a été financé par le NIH / NCI numéro de subvention R00 CA127357 et l&#39;Université du Kansas cancer dotation Center.

1. L&#39;isolement et l&#39;extraction de collagène donneur de souris C57BL/6J <ol><li> Sacrifice maturité normale des souris femelles C57BL/6J utilisant des méthodes approuvées IACUC. </li><li> Récolter les queues et les tremper dans de l&#39;éthanol à 70% pendant 45 minutes pour stériliser les tissus. Sécher les queues avec du papier absorbant, l&#39;envelopper dans du papier d&#39;aluminium. Stocker les queues de -20 ° C jusqu&#39;à ce que nécessaire. </li><li> Placer les queues dans un environnement st...

<ol>
	<li>Hayward, S., Haughney, P. C., Rosen, M. A., Greulich, K. M., Weier, H. U., Dahiya, R., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+adult+human+prostatic+epithelium+and+rat+urogenital+sinus+mesenchyme+in+a+tissue+recombination+model.">Interactions between adult human prostatic epithelium and rat urogenital sinus mesenchyme in a tissue recombination model.</a> Differentiation. 63, 131-131 (1998).</li><li>Cunha, G., Hom, Y. K., Young, P., Brody, J., Asch, B. B., Ip, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Mammary Gland Biology. , (2000).</li><li>Ethier, S. P., Ammerman, C. A., Dziubinski, M. L., Asch, B. B., Ip, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Mammary Gland Biology. , (2000).</li><li>Medina, D., Kittrell, F., Asch, B. B., Ip, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Mammary Gland Biology. , (2000).</li><li>Kalluri, R., Zeisberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+in+cancer.">Fibroblasts in cancer.</a> Nat Rev Cancer. 6, 392-401 (2006).</li><li>DeNardo, D. G., Johansson, M., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cells+as+mediators+of+solid+tumor+metastasis.">Immune cells as mediators of solid tumor metastasis.</a> Cancer Metastasis. 27, 11-18 (2008).</li><li>Naito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+differentiation+and+function+in+health+and+disease.">Macrophage differentiation and function in health and disease.</a> Pathol Int. 58, 143-155 (2008).</li><li>Firestein, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+T+cell+cometh:+interplay+between+adaptive+immunity+and+cytokine+networks+in+rheumatoid+arthritis.">The T cell cometh: interplay between adaptive immunity and cytokine networks in rheumatoid arthritis.</a> J Clin Invest. 114, 471-474 (2004).</li><li>Cheng, N., Chytil, A., Shyr, Y., Joly, A., Moses, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Hepatocyte+Growth+Factor+Signaling+by+Type+II+Transforming+Growth+Factor-{beta}+Receptor+Knockout+Fibroblasts+Promotes+Mammary+Tumorigenesis.">Enhanced Hepatocyte Growth Factor Signaling by Type II Transforming Growth Factor-{beta} Receptor Knockout Fibroblasts Promotes Mammary Tumorigenesis.</a> Cancer Res. 67, 4869-4877 (2007).</li><li>Qiu, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+expression+profiling+identifies+signatures+of+tumor+virulence+in+MMTV-PyMT-transgenic+mice:+correlation+to+human+disease.">Global expression profiling identifies signatures of tumor virulence in MMTV-PyMT-transgenic mice: correlation to human disease.</a> Cancer Res. 64, 5973-5981 (2004).</li><li>Schaffhausen, B. S., Roberts, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+from+polyoma+middle+T+antigen+on+signaling+and+transformation:+A+DNA+tumor+virus+contribution+to+the+war+on+cancer.">Lessons from polyoma middle T antigen on signaling and transformation: A DNA tumor virus contribution to the war on cancer.</a> Virology. 384, 304-316 (2009).</li><li>Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+of+neural+cells+via+retrovirus-mediated+oncogene+transduction.">Immortalization of neural cells via retrovirus-mediated oncogene transduction.</a> Annu Rev Neurosci. 12, 47-65 (1989).</li><li>O'Hare, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+immortalization+of+freshly+isolated+human+mammary+fibroblasts+and+endothelial+cells.">Conditional immortalization of freshly isolated human mammary fibroblasts and endothelial cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 646-651 (2001).</li><li>Shay, J. W., Wright, W. E., Werbin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+molecular+mechanisms+of+human+cell+immortalization.">Defining the molecular mechanisms of human cell immortalization.</a> Biochim Biophys Acta. 1072, 1-7 (1991).</li><li>Gudjonsson, T., Villadsen, R., Ronnov-Jessen, L., Petersen, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+protocols+used+in+cell+culture+models+of+human+breast+morphogenesis.">Immortalization protocols used in cell culture models of human breast morphogenesis.</a> Cell Mol Life Sci. 61, 2523-2534 (2004).</li><li>Raschke, W. C., Baird, S., Ralph, P., Nakoinz, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+macrophage+cell+lines+transformed+by+Abelson+leukemia+virus.">Functional macrophage cell lines transformed by Abelson leukemia virus.</a> Cell. 15, 261-267 (1978).</li><li>Shen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+of+endothelial+cells+differentiated+from+mouse+embryonic+stem+cells.">Immortalization of endothelial cells differentiated from mouse embryonic stem cells.</a> Shi Yan Sheng Wu Xue Bao. 35, 218-228 (2002).</li><li>Wang, S. J., Greer, P., Auerbach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+propagation+of+yolk-sac-derived+endothelial+cells+from+a+hypervascular+transgenic+mouse+expressing+a+gain-of-function+fps/fes+proto-oncogene.">Isolation and propagation of yolk-sac-derived endothelial cells from a hypervascular transgenic mouse expressing a gain-of-function fps/fes proto-oncogene.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 32, 292-299 (1996).</li><li>Tiede, B. J., Owens, L. A., Li, F., DeCoste, C., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+for+non-invasive+single+marker+tracking+of+mammary+stem+cells+in+vivo+reveals+stem+cell+dynamics+throughout+pregnancy.">A novel mouse model for non-invasive single marker tracking of mammary stem cells in vivo reveals stem cell dynamics throughout pregnancy.</a> PLoS One. 4, e8035-e8035 (2009).</li><li>Guzman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracarotid+injection+of+fluorescence+activated+cell-sorted+CD49d-positive+neural+stem+cells+improves+targeted+cell+delivery+and+behavior+after+stroke+in+a+mouse+stroke+model.">Intracarotid injection of fluorescence activated cell-sorted CD49d-positive neural stem cells improves targeted cell delivery and behavior after stroke in a mouse stroke model.</a> Stroke. 39, 1300-1306 (2008).</li><li>Duda, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+transplantability+of+tumor-associated+stromal+cells.">Differential transplantability of tumor-associated stromal cells.</a> Cancer Res. 64, 5920-5924 (2004).</li></ol>

La contribution fonctionnelle des fibroblastes dans la progression tumorale a été démontrée par des modèles de transplantation, dans lequel le carcinome fibroblastes associés co-transplantés avec bénignes mammaires des résultats des cellules épithéliales dans la croissance tumorale et l&#39;invasivité accrue 5. Approches de transplantation conventionnelle ont impliqué l&#39;utilisation de souris SCID ou nude à la co-transplantation de cellules stromales et épithéliales de différentes origines...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th><th> Commentaires (optionnel) </th></tr><tr><td> Souris C57BL/6N </td><td> Harlan </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> MMTV-PyVmT souris transgéniques </td><td> Laboratoires Jackson </td><td> 002374 </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de veau fœtal </td><td> Fisher </td><td> SH3039603PR </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> VWR </td><td> 10000113873 </td><td></td></tr><tr><td> Pénicilline / streptomycine </td><td> Fisher </td><td> MT-30-001 </td><td></td></tr><tr><td> amphotéricine </td><td> Fisher </td><td> BP2645-20 </td><td></td></tr><tr><td> Amicon de filtration colonnes Ultracel 50k </td><td> Millipore </td><td> UFC905008 </td><td></td></tr><tr><td> Tubes pour Beckman TI du rotor </td><td> Beckman </td><td> 355618 </td><td></td></tr><tr><td> Collagène de queue de rat </td><td> Fisher </td><td> CB 40236 </td><td></td></tr><tr><td> EBSS 10x </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E7510-100ML </td><td></td></tr><tr><td> Trypsine 1X, 0,25% dans HBSS w / o de calcium et de magnésium </td><td> Fisher </td><td> MT-25-050-CI </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;acide acétique glacial </td><td> Fisher </td><td> A491-212 </td><td></td></tr><tr><td> Coomasie bleue </td><td> Fisher </td><td> BP101 25 </td><td></td></tr><tr><td> Trypsine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T3924-100ml </td><td></td></tr><tr><td> Une collagénase </td><td> Sigma AldrichC0130-50 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> hyalronidase </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H3884 </td><td></td></tr><tr><td> DNase </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D5025 </td><td></td></tr><tr><td> Standard de protéines Kaléidoscope </td><td> Biorad </td><td> 1610375 </td><td></td></tr><tr><td> Lames de verre </td><td> Fisher </td><td> 12545-78 </td><td></td></tr><tr><td> Verre lamelles </td><td> VWR </td><td> 101400-042 </td><td></td></tr><tr><td> Vimentine anticorps S-20 </td><td> Santa Cruz Biotechnology </td><td> SC-7558 </td><td></td></tr><tr><td> α-actine musculaire lisse d&#39;anticorps </td><td> Abcam </td><td> ab5694 </td><td></td></tr><tr><td> CK14 d&#39;anticorps </td><td> Santa Cruz Biotechnology </td><td> sc-53253 </td><td></td></tr><tr><td> CK18 d&#39;anticorps </td><td> Abcam </td><td> ab668 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D9542 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-souris biotinylé </td><td> Laboratoires Vecteur </td><td> BA9200 </td><td> Distribués au travers de Fisher </td></tr><tr><td> Anti-souris-alexa-568 </td><td> Invitrogen </td><td> A10037 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-souris-alexa-488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11001 </td><td></td></tr><tr><td> Streptavidine alexa-488 </td><td> Invitrogen </td><td> S11226 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> D21490 </td><td></td></tr><tr><td> Prolongez Antifade </td><td> Invitrogen </td><td> P-36930 </td><td></td></tr><tr><td> Ciseaux chirurgicaux </td><td> Outils Fine Science </td><td> 91400-12 </td><td></td></tr><tr><td> Ciseaux beau printemps </td><td> Outils Fine Science </td><td> 15000-02 </td><td></td></tr><tr><td> Blunt pince </td><td> Outils Fine Science </td><td> 11002-12 </td><td></td></tr><tr><td> # 5 pinces fines </td><td> Outils Fine Science </td><td> 11251-10 </td><td></td></tr><tr><td> De suture chromique Gut </td><td> Fisher </td><td> NC9326254 </td><td></td></tr><tr><td> Pasteur en verre pipette </td><td> Fisher </td><td> 22-042-815 </td><td></td></tr><tr><td> Éthanol </td><td> Fisher </td><td> A406P 4 </td><td></td></tr><tr><td> bétadine </td><td> Fisher </td><td> NC9386574 </td><td></td></tr><tr><td> Clips des plaies </td><td> Fisher </td><td> 12032-07 </td><td></td></tr><tr><td> Base des plaies </td><td> Fisher </td><td> 12031-07 </td><td></td></tr></tbody></table>

mammary transplantation of stromal cells and carcinoma cells in c57bl/6j mice

L&#39;influence de cellules stromales, y compris les fibroblastes sur la progression de la tumeur mammaire a été bien documenté par l&#39;utilisation de modèles de souris, en particulier grâce à la transplantation de cellules stromales et les cellules épithéliales de la glande mammaire de souris. Modèles de transplantation actuels impliquent souvent l&#39;utilisation de la souris immunodéprimées en raison de la génétique de différentes origines cellules stromales et les cellules épithéliales. Matrices extracellulaires sont souvent utilisés pour intégrer les deux types cellulaires différents pour cohérentes interactions cellule-cellule, mais impliquent l&#39;utilisation de Matrigel ou de collagène de queue de rat, qui sont des substrats immunogène. Le manque de cellules T fonctionnelles des souris immunodéprimées empêche une évaluation précise des cellules stromales sur la progression de la tumeur mammaire in vivo, avec des implications importantes sur le développement de médicaments et d&#39;efficacité. Par ailleurs, les souris immunodéprimées sont coûteux, difficiles à reproduire et exigent des conditions de soins spéciaux. Pour surmonter ces obstacles, nous avons développé une approche de la transplantation orthotopique de cellules stromales et les cellules épithéliales des souris de la même bagage génétique pour induire la formation de tumeurs cohérente. Ce système implique la récolte normale, le carcinome fibroblastes associés, PyVmT cellules de carcinome mammaire et du collagène de souris C57BL/6J donateurs. Les cellules sont ensuite intégrés dans le collagène et transplantées dans les glandes mammaires inguinales des souris C57BL/6J femelles. La transplantation de cellules PyVmT seuls forment des tumeurs palpables greffe 30-40 jours après. Analyse Endpoint moins 60 jours indique que la co-transplantation avec des fibroblastes améliore la croissance des tumeurs mammaires par rapport aux cellules transplantées PyVmT seul. Alors que les cellules et la matrice de souris C57BL/6J ont été utilisées dans ces études, l&#39;isolement de cellules et la matrice et l&#39;approche de transplantation peuvent être appliquées sur des souris de différentes origines génétiques démontrant la polyvalence. En résumé, ce système peut être utilisé pour étudier les interactions moléculaires entre les cellules stromales et les cellules épithéliales, et surmonte les limitations critiques dans les modèles murins immunodéprimés.

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Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice

Dans ce rapport, nous démontrons un système pour isoler les cellules du donneur et de la culture de la glande mammaire de la souris, et la transplantation orthotopique ces cellules dans des souris bénéficiaires d&#39;analyser stromales: interactions épithéliales pendant le développement de tumeurs mammaires.

Transplantation mammaires de cellules stromales et les cellules de carcinome chez les souris C57BL/6J

The influence of stromal cells, including fibroblasts on mammary tumor progression has been well documented through the use of mouse models, in particular ...

Research

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Medicine

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