Name: mammary transplantation of stromal cells and carcinoma cells in c57bl/6j mice
Uploaded: 2011-08-12T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice at JoVE.com

פרויקט זה מומן באמצעות מענק במספר NIH / NCI R00 CA127357 ואת אוניברסיטת קנזס Cancer Center הקרן.

1. בידוד החילוץ של קולגן התורם מעכברים C57BL/6J <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הקורבן בוגר בעכברים נורמליים נקבה C57BL/6J בשיטות IACUC אושרה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קציר זנבות ומשרים אתנול 70% במשך 45 דקות לעקר רקמות. יבש זנבות בנייר טישו, לעטוף בנייר אלומינ...

<ol>
	<li>Hayward, S., Haughney, P. C., Rosen, M. A., Greulich, K. M., Weier, H. U., Dahiya, R., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+adult+human+prostatic+epithelium+and+rat+urogenital+sinus+mesenchyme+in+a+tissue+recombination+model.">Interactions between adult human prostatic epithelium and rat urogenital sinus mesenchyme in a tissue recombination model.</a> Differentiation. 63, 131-131 (1998).</li><li>Cunha, G., Hom, Y. K., Young, P., Brody, J., Asch, B. B., Ip, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Mammary Gland Biology. , (2000).</li><li>Ethier, S. P., Ammerman, C. A., Dziubinski, M. L., Asch, B. B., Ip, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Mammary Gland Biology. , (2000).</li><li>Medina, D., Kittrell, F., Asch, B. B., Ip, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Mammary Gland Biology. , (2000).</li><li>Kalluri, R., Zeisberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+in+cancer.">Fibroblasts in cancer.</a> Nat Rev Cancer. 6, 392-401 (2006).</li><li>DeNardo, D. G., Johansson, M., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cells+as+mediators+of+solid+tumor+metastasis.">Immune cells as mediators of solid tumor metastasis.</a> Cancer Metastasis. 27, 11-18 (2008).</li><li>Naito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+differentiation+and+function+in+health+and+disease.">Macrophage differentiation and function in health and disease.</a> Pathol Int. 58, 143-155 (2008).</li><li>Firestein, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+T+cell+cometh:+interplay+between+adaptive+immunity+and+cytokine+networks+in+rheumatoid+arthritis.">The T cell cometh: interplay between adaptive immunity and cytokine networks in rheumatoid arthritis.</a> J Clin Invest. 114, 471-474 (2004).</li><li>Cheng, N., Chytil, A., Shyr, Y., Joly, A., Moses, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Hepatocyte+Growth+Factor+Signaling+by+Type+II+Transforming+Growth+Factor-{beta}+Receptor+Knockout+Fibroblasts+Promotes+Mammary+Tumorigenesis.">Enhanced Hepatocyte Growth Factor Signaling by Type II Transforming Growth Factor-{beta} Receptor Knockout Fibroblasts Promotes Mammary Tumorigenesis.</a> Cancer Res. 67, 4869-4877 (2007).</li><li>Qiu, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+expression+profiling+identifies+signatures+of+tumor+virulence+in+MMTV-PyMT-transgenic+mice:+correlation+to+human+disease.">Global expression profiling identifies signatures of tumor virulence in MMTV-PyMT-transgenic mice: correlation to human disease.</a> Cancer Res. 64, 5973-5981 (2004).</li><li>Schaffhausen, B. S., Roberts, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+from+polyoma+middle+T+antigen+on+signaling+and+transformation:+A+DNA+tumor+virus+contribution+to+the+war+on+cancer.">Lessons from polyoma middle T antigen on signaling and transformation: A DNA tumor virus contribution to the war on cancer.</a> Virology. 384, 304-316 (2009).</li><li>Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+of+neural+cells+via+retrovirus-mediated+oncogene+transduction.">Immortalization of neural cells via retrovirus-mediated oncogene transduction.</a> Annu Rev Neurosci. 12, 47-65 (1989).</li><li>O'Hare, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+immortalization+of+freshly+isolated+human+mammary+fibroblasts+and+endothelial+cells.">Conditional immortalization of freshly isolated human mammary fibroblasts and endothelial cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 646-651 (2001).</li><li>Shay, J. W., Wright, W. E., Werbin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+molecular+mechanisms+of+human+cell+immortalization.">Defining the molecular mechanisms of human cell immortalization.</a> Biochim Biophys Acta. 1072, 1-7 (1991).</li><li>Gudjonsson, T., Villadsen, R., Ronnov-Jessen, L., Petersen, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+protocols+used+in+cell+culture+models+of+human+breast+morphogenesis.">Immortalization protocols used in cell culture models of human breast morphogenesis.</a> Cell Mol Life Sci. 61, 2523-2534 (2004).</li><li>Raschke, W. C., Baird, S., Ralph, P., Nakoinz, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+macrophage+cell+lines+transformed+by+Abelson+leukemia+virus.">Functional macrophage cell lines transformed by Abelson leukemia virus.</a> Cell. 15, 261-267 (1978).</li><li>Shen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+of+endothelial+cells+differentiated+from+mouse+embryonic+stem+cells.">Immortalization of endothelial cells differentiated from mouse embryonic stem cells.</a> Shi Yan Sheng Wu Xue Bao. 35, 218-228 (2002).</li><li>Wang, S. J., Greer, P., Auerbach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+propagation+of+yolk-sac-derived+endothelial+cells+from+a+hypervascular+transgenic+mouse+expressing+a+gain-of-function+fps/fes+proto-oncogene.">Isolation and propagation of yolk-sac-derived endothelial cells from a hypervascular transgenic mouse expressing a gain-of-function fps/fes proto-oncogene.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 32, 292-299 (1996).</li><li>Tiede, B. J., Owens, L. A., Li, F., DeCoste, C., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+for+non-invasive+single+marker+tracking+of+mammary+stem+cells+in+vivo+reveals+stem+cell+dynamics+throughout+pregnancy.">A novel mouse model for non-invasive single marker tracking of mammary stem cells in vivo reveals stem cell dynamics throughout pregnancy.</a> PLoS One. 4, e8035-e8035 (2009).</li><li>Guzman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracarotid+injection+of+fluorescence+activated+cell-sorted+CD49d-positive+neural+stem+cells+improves+targeted+cell+delivery+and+behavior+after+stroke+in+a+mouse+stroke+model.">Intracarotid injection of fluorescence activated cell-sorted CD49d-positive neural stem cells improves targeted cell delivery and behavior after stroke in a mouse stroke model.</a> Stroke. 39, 1300-1306 (2008).</li><li>Duda, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+transplantability+of+tumor-associated+stromal+cells.">Differential transplantability of tumor-associated stromal cells.</a> Cancer Res. 64, 5920-5924 (2004).</li></ol>

התרומה התפקודית של fibroblasts בהתקדמות הגידול הוכח באמצעות מודלים השתלה, שבו קרצינומה fibroblasts הקשורים שיתוף המושתלים עם תאים שפירים אפיתל תוצאות החלב בתוך הגידול גדל הפולשנות 5. גישות השתלת קונבנציונלי יש מעורבים את השימוש של עכברים SCID או בעירום לשתף השתלת תאים סטר?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> הערות (אופציונלי) </th></tr><tr><td> C57BL/6N עכברים </td><td> הרלן </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> MMTV-PyVmT העכברים הטרנסגניים </td><td> ג&#39;קסון מעבדות </td><td> 002374 </td><td></td></tr><tr><td> סרום שור עוברית </td><td> דיג </td><td> SH3039603PR </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> VWR </td><td> 10000113873 </td><td></td></tr><tr><td> פניצילין / סטרפטומיצין </td><td> דיג </td><td> MT-30-001 </td><td></td></tr><tr><td> amphotericin </td><td> דיג </td><td> BP2645-20 </td><td></td></tr><tr><td> Amicon עמודות סינון ultracel 50k </td><td> Millipore </td><td> UFC905008 </td><td></td></tr><tr><td> צינורות עבור Beckman TI הרוטור </td><td> Beckman </td><td> 355618 </td><td></td></tr><tr><td> זנב עכברוש קולגן </td><td> דיג </td><td> CB 40236 </td><td></td></tr><tr><td> 10x EBSS </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> E7510-100 מ&quot;ל </td><td></td></tr><tr><td> טריפסין 1X, 0.25% בשנת סידן w / o HBSS ו מגנזיום </td><td> דיג </td><td> MT-25-050-CI </td><td></td></tr><tr><td> חומצה אצטית קרחונית </td><td> דיג </td><td> A491-212 </td><td></td></tr><tr><td> Coomasie כחול </td><td> דיג </td><td> BP101 25 </td><td></td></tr><tr><td> טריפסין </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> T3924-100 מ&quot;ל </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase </td><td> סיגמא AldrichC0130-50 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> hyalronidase </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> H3884 </td><td></td></tr><tr><td> DNase </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> D5025 </td><td></td></tr><tr><td> חלבון סטנדרטי קלידוסקופ </td><td> Biorad </td><td> 1610375 </td><td></td></tr><tr><td> שקופיות הזכוכית </td><td> דיג </td><td> 12545-78 </td><td></td></tr><tr><td> זכוכית coverslips </td><td> VWR </td><td> 101400-042 </td><td></td></tr><tr><td> Vimentin נוגדן S-20 </td><td> סנטה קרוז ביוטכנולוגיה </td><td> SC-7558 </td><td></td></tr><tr><td> α חלקה אקטין בשריר נוגדן </td><td> Abcam </td><td> ab5694 </td><td></td></tr><tr><td> CK14 נוגדן </td><td> סנטה קרוז ביוטכנולוגיה </td><td> SC-53253 </td><td></td></tr><tr><td> CK18 נוגדן </td><td> Abcam </td><td> ab668 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> D9542 </td><td></td></tr><tr><td> אנטי עכבר biotinylated </td><td> וקטור מעבדות </td><td> BA9200 </td><td> מופץ באמצעות פישר </td></tr><tr><td> אנטי עכבר Alexa-568 </td><td> Invitrogen </td><td> A10037 </td><td></td></tr><tr><td> אנטי עכבר Alexa-488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11001 </td><td></td></tr><tr><td> Streptavidin-Alexa-488 </td><td> Invitrogen </td><td> S11226 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> D21490 </td><td></td></tr><tr><td> להאריך antifade </td><td> Invitrogen </td><td> P-36930 </td><td></td></tr><tr><td> כירורגי מספריים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 91400-12 </td><td></td></tr><tr><td> באביב מספריים פיין </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 15000-02 </td><td></td></tr><tr><td> בלאנט מלקחיים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 11002-12 </td><td></td></tr><tr><td> # 5 מלקחיים קנס </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 11251-10 </td><td></td></tr><tr><td> כרומית גוט תפר </td><td> דיג </td><td> NC9326254 </td><td></td></tr><tr><td> זכוכית pipet פסטר </td><td> דיג </td><td> 22-042-815 </td><td></td></tr><tr><td> אתנול </td><td> דיג </td><td> A406P 4 </td><td></td></tr><tr><td> בבטאדין </td><td> דיג </td><td> NC9386574 </td><td></td></tr><tr><td> פצע קליפים </td><td> דיג </td><td> 12032-07 </td><td></td></tr><tr><td> פצע מצרך </td><td> דיג </td><td> 12031-07 </td><td></td></tr></tbody></table>

mammary transplantation of stromal cells and carcinoma cells in c57bl/6j mice

ההשפעה של תאים סטרומה, כולל fibroblasts על התקדמות הגידול החלב תועד היטב באמצעות מודלים העכבר, בעיקר באמצעות השתלה של תאים סטרומה ותאי אפיתל של בלוטת החלב של עכברים. מודלים השתלת נוכחי לעתים קרובות כרוכות בשימוש בעכברים immunocompromised בשל רקע גנטי שונה של תאים סטרומה ותאי אפיתל. מטריצות תאיים משמשים לעתים קרובות כדי להטביע את שני סוגי תאים שונים עבור תאים תאים אינטראקציות עקבי, אבל כרוכות בשימוש Matrigel או קולגן עכברוש הזנב, אשר מצעים immunogenic. חוסר בתאי T פונקציונלי מעכברים החיסון מונע הערכה מדויקת של תאים סטרומה על התקדמות הגידול החלב in vivo, עם השלכות חשובות על פיתוח התרופה ויעילותה. יתר על כן, העכברים immunocompromised הם יקרים, קשה להתרבות דורשים תנאים טיפול מיוחד. כדי להתגבר על מכשולים אלה, פיתחנו גישה orthotopically השתלת תאים סטרומה ותאי אפיתל לעכברים מרקע גנטי זהה לגרום להיווצרות גידול עקבי. מערכת זו כוללת איסוף נורמלי, קרצינומה fibroblasts הקשורים, PyVmT בתאי סרטן השד ו קולגן מעכברים התורם C57BL/6J. התאים המוטבעים אז קולגן המושתלים בתוך בלוטות החלב של הנקבה מפשעתי עכברים C57BL/6J. השתלה של תאים PyVmT לבד בצורה מוחשית השתלת גידולים ימים 30-40 פוסט. ניתוח Endpoint ב 60 ימים מציין כי שיתוף השתלת עם fibroblasts משפר את צמיחת הגידול החלב לעומת התאים המושתלים PyVmT לבד. בעוד תאים מטריצה ​​מעכברים C57BL/6J שימשו במחקרים אלה, בידוד של תאים מטריקס גישה השתלת ניתן להחיל כלפי עכברים מרקע גנטי שונה הוכחת צדדיות. לסיכום, מערכת זו יכולה לשמש כדי לחקור אינטראקציות מולקולריות בין תאים סטרומה ותאי אפיתל, וגם מתגבר על מגבלות קריטי מודלים העכבר immunocompromised.

Watch this Scientific Journal Video about Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice at JoVE.com

Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice

בדו&quot;ח זה, אנחנו מדגימים מערכת לבודד התורם התרבות תאים מבלוטת החלב העכבר, ו orthotopically השתלת תאים אלה בעכברים הנמען לנתח סטרומה: אינטראקציות אפיתל במהלך התפתחות הגידול החלב.

השתלה של תאים סטרומה החלב ותאי קרצינומה של עכברים C57BL/6J

The influence of stromal cells, including fibroblasts on mammary tumor progression has been well documented through the use of mouse models, in particular ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

הדור ניסויית של קרצינומה-Associated Fibroblasts (CAFs) מ Fibroblasts החלב אנוש

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Human Internal Mammary Artery (IMA) Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

Human Internal Mammary Artery IMA Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

האדם הפנימי החלב (הר&quot;י) עורק השתלת סטנט: דגם האדם ללמוד פיתוח restenosis ב-סטנט

Preclinical in vivo research models to investigate pathobiological and pathophysiological processes in the development of intimal hyperplasia after vessel ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

בידוד, אפיון והשוואתי התמיינות של תאי גזע אנושיים שיניים זולות נגזרה שיניים קבועות על ידי שימוש בשתי שיטות שונות

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

דור של תת עורי וintrahepatic אדם xenografts קרצינומה hepatocellular בעכברים עם מערכת חיסון חלשים

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Coculture System with an Organotypic Brain Slice and 3D Spheroid of Carcinoma Cells

מערכת Coculture עם מוח פרוס Organotypic ו3D אליפטית של קרצינומה של תאים

Patients with cerebral metastasis of carcinomas have a poor prognosis. However, the process at the metastatic site has barely been investigated, in ...

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Nephrectomy דוגמנות קרצינומה ספונטני גרורתי של תאי כליות (mRCC) בעכברים בעקבות

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

הזרקת orthotopic של תאי סרטן השד לחלב שומן Pad של עכברים לחקר התפתחות גידול.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Evaluation of Stem Cell Properties in Human Ovarian Carcinoma Cells Using Multi and Single Cell-based Spheres Assays

הערכה של מאפייני תא גזע בקרצינומה של תאי השחלות אדם באמצעות Multi ומבחני Spheres מבוסס תא בודדים

Years of research indicates that ovarian cancers harbor a heterogeneous mixture of cells including a subpopulation of so-called &#8220;cancer stem ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

לומד סרטן לבלב גזע מאפייני תא לפיתוח טיפול חדש אסטרטגיות

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

Heterotopic צוואר הרחם לב השתלה בעכברים

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...