Name: mammary transplantation of stromal cells and carcinoma cells in c57bl/6j mice
Uploaded: 2011-08-12T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice at JoVE.com

Этот проект был профинансирован через НИЗ / NCI номер гранта R00 CA127357 и Канзасского университета онкологический центр фонда.

1. Выделение и извлечение доноров коллагена от мышей C57BL/6J <ol><li> Жертва зрелых нормальных самок мышей C57BL/6J с использованием утвержденных IACUC методами. </li><li> Урожай хвосты и замочить в 70% этаноле в течение 45 минут для стерилизации тканей. Сухие хвосты с папиросную бумагу, завернуть в алюми...

<ol>
	<li>Hayward, S., Haughney, P. C., Rosen, M. A., Greulich, K. M., Weier, H. U., Dahiya, R., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+adult+human+prostatic+epithelium+and+rat+urogenital+sinus+mesenchyme+in+a+tissue+recombination+model.">Interactions between adult human prostatic epithelium and rat urogenital sinus mesenchyme in a tissue recombination model.</a> Differentiation. 63, 131-131 (1998).</li><li>Cunha, G., Hom, Y. K., Young, P., Brody, J., Asch, B. B., Ip, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Mammary Gland Biology. , (2000).</li><li>Ethier, S. P., Ammerman, C. A., Dziubinski, M. L., Asch, B. B., Ip, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Mammary Gland Biology. , (2000).</li><li>Medina, D., Kittrell, F., Asch, B. B., Ip, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Mammary Gland Biology. , (2000).</li><li>Kalluri, R., Zeisberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+in+cancer.">Fibroblasts in cancer.</a> Nat Rev Cancer. 6, 392-401 (2006).</li><li>DeNardo, D. G., Johansson, M., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cells+as+mediators+of+solid+tumor+metastasis.">Immune cells as mediators of solid tumor metastasis.</a> Cancer Metastasis. 27, 11-18 (2008).</li><li>Naito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+differentiation+and+function+in+health+and+disease.">Macrophage differentiation and function in health and disease.</a> Pathol Int. 58, 143-155 (2008).</li><li>Firestein, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+T+cell+cometh:+interplay+between+adaptive+immunity+and+cytokine+networks+in+rheumatoid+arthritis.">The T cell cometh: interplay between adaptive immunity and cytokine networks in rheumatoid arthritis.</a> J Clin Invest. 114, 471-474 (2004).</li><li>Cheng, N., Chytil, A., Shyr, Y., Joly, A., Moses, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Hepatocyte+Growth+Factor+Signaling+by+Type+II+Transforming+Growth+Factor-{beta}+Receptor+Knockout+Fibroblasts+Promotes+Mammary+Tumorigenesis.">Enhanced Hepatocyte Growth Factor Signaling by Type II Transforming Growth Factor-{beta} Receptor Knockout Fibroblasts Promotes Mammary Tumorigenesis.</a> Cancer Res. 67, 4869-4877 (2007).</li><li>Qiu, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+expression+profiling+identifies+signatures+of+tumor+virulence+in+MMTV-PyMT-transgenic+mice:+correlation+to+human+disease.">Global expression profiling identifies signatures of tumor virulence in MMTV-PyMT-transgenic mice: correlation to human disease.</a> Cancer Res. 64, 5973-5981 (2004).</li><li>Schaffhausen, B. S., Roberts, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+from+polyoma+middle+T+antigen+on+signaling+and+transformation:+A+DNA+tumor+virus+contribution+to+the+war+on+cancer.">Lessons from polyoma middle T antigen on signaling and transformation: A DNA tumor virus contribution to the war on cancer.</a> Virology. 384, 304-316 (2009).</li><li>Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+of+neural+cells+via+retrovirus-mediated+oncogene+transduction.">Immortalization of neural cells via retrovirus-mediated oncogene transduction.</a> Annu Rev Neurosci. 12, 47-65 (1989).</li><li>O'Hare, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+immortalization+of+freshly+isolated+human+mammary+fibroblasts+and+endothelial+cells.">Conditional immortalization of freshly isolated human mammary fibroblasts and endothelial cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 646-651 (2001).</li><li>Shay, J. W., Wright, W. E., Werbin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+molecular+mechanisms+of+human+cell+immortalization.">Defining the molecular mechanisms of human cell immortalization.</a> Biochim Biophys Acta. 1072, 1-7 (1991).</li><li>Gudjonsson, T., Villadsen, R., Ronnov-Jessen, L., Petersen, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+protocols+used+in+cell+culture+models+of+human+breast+morphogenesis.">Immortalization protocols used in cell culture models of human breast morphogenesis.</a> Cell Mol Life Sci. 61, 2523-2534 (2004).</li><li>Raschke, W. C., Baird, S., Ralph, P., Nakoinz, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+macrophage+cell+lines+transformed+by+Abelson+leukemia+virus.">Functional macrophage cell lines transformed by Abelson leukemia virus.</a> Cell. 15, 261-267 (1978).</li><li>Shen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+of+endothelial+cells+differentiated+from+mouse+embryonic+stem+cells.">Immortalization of endothelial cells differentiated from mouse embryonic stem cells.</a> Shi Yan Sheng Wu Xue Bao. 35, 218-228 (2002).</li><li>Wang, S. J., Greer, P., Auerbach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+propagation+of+yolk-sac-derived+endothelial+cells+from+a+hypervascular+transgenic+mouse+expressing+a+gain-of-function+fps/fes+proto-oncogene.">Isolation and propagation of yolk-sac-derived endothelial cells from a hypervascular transgenic mouse expressing a gain-of-function fps/fes proto-oncogene.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 32, 292-299 (1996).</li><li>Tiede, B. J., Owens, L. A., Li, F., DeCoste, C., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+for+non-invasive+single+marker+tracking+of+mammary+stem+cells+in+vivo+reveals+stem+cell+dynamics+throughout+pregnancy.">A novel mouse model for non-invasive single marker tracking of mammary stem cells in vivo reveals stem cell dynamics throughout pregnancy.</a> PLoS One. 4, e8035-e8035 (2009).</li><li>Guzman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracarotid+injection+of+fluorescence+activated+cell-sorted+CD49d-positive+neural+stem+cells+improves+targeted+cell+delivery+and+behavior+after+stroke+in+a+mouse+stroke+model.">Intracarotid injection of fluorescence activated cell-sorted CD49d-positive neural stem cells improves targeted cell delivery and behavior after stroke in a mouse stroke model.</a> Stroke. 39, 1300-1306 (2008).</li><li>Duda, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+transplantability+of+tumor-associated+stromal+cells.">Differential transplantability of tumor-associated stromal cells.</a> Cancer Res. 64, 5920-5924 (2004).</li></ol>

Функциональный вклад фибробластов в опухолевой прогрессии была продемонстрирована на основе моделей трансплантации, в которых рак связаны фибробластов совместно с пересаженной доброкачественные эпителиальные клетки результатов в увеличении роста опухоли и инвазивности 5. Тр...

<table border="1"><tbody><tr><th> Название реагента </th><th> Компания </th><th> Номер в каталоге </th><th> Комментарии (необязательно) </th></tr><tr><td> C57BL/6N мышей </td><td> Харлан </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> MMTV-PyVmT трансгенных мышей </td><td> Джексон лабораторий </td><td> 002374 </td><td></td></tr><tr><td> Эмбриональной телячьей сыворотки </td><td> Рыболов </td><td> SH3039603PR </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> VWR </td><td> 10000113873 </td><td></td></tr><tr><td> Пенициллин / стрептомицин </td><td> Рыболов </td><td> MT-30-001 </td><td></td></tr><tr><td> амфотерицин </td><td> рыболов </td><td> BP2645-20 </td><td></td></tr><tr><td> Amicon фильтрации столбцов ultracel 50k </td><td> Millipore </td><td> UFC905008 </td><td></td></tr><tr><td> Трубы для Бекман TI ротора </td><td> Бекман </td><td> 355618 </td><td></td></tr><tr><td> Коллаген крысиного хвоста </td><td> Рыболов </td><td> CB 40236 </td><td></td></tr><tr><td> 10x EBSS </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7510-100мл </td><td></td></tr><tr><td> Трипсин 1X, 0,25% в HBSS без кальция и магния </td><td> Рыболов </td><td> МТ-25-050-CI </td><td></td></tr><tr><td> Ледяная уксусная кислота </td><td> Рыболов </td><td> A491-212 </td><td></td></tr><tr><td> Coomasie синий </td><td> Рыболов </td><td> BP101 25 </td><td></td></tr><tr><td> Трипсин </td><td> Sigma Aldrich </td><td> T3924-100мл </td><td></td></tr><tr><td> Коллагеназа </td><td> Sigma AldrichC0130-50 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> hyalronidase </td><td> Sigma Aldrich </td><td> H3884 </td><td></td></tr><tr><td> ДНКазы </td><td> Sigma Aldrich </td><td> D5025 </td><td></td></tr><tr><td> Стандартный калейдоскоп белка </td><td> Biorad </td><td> 1610375 </td><td></td></tr><tr><td> Стекло слайдов </td><td> Рыболов </td><td> 12545-78 </td><td></td></tr><tr><td> Стекла покровные </td><td> VWR </td><td> 101400-042 </td><td></td></tr><tr><td> Виментин антител S-20 </td><td> Санта-Крус биотехнологии </td><td> SC-7558 </td><td></td></tr><tr><td> α-актин гладких мышц антител </td><td> Abcam </td><td> ab5694 </td><td></td></tr><tr><td> CK14 антител </td><td> Санта-Крус биотехнологии </td><td> SC-53253 </td><td></td></tr><tr><td> CK18 антител </td><td> Abcam </td><td> ab668 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td> Sigma Aldrich </td><td> D9542 </td><td></td></tr><tr><td> Анти-мышь биотинилированного </td><td> Векторные лабораторий </td><td> BA9200 </td><td> Распределенные по Фишеру </td></tr><tr><td> Анти-мышь-Alexa-568 </td><td> Invitrogen </td><td> A10037 </td><td></td></tr><tr><td> Анти-мышь-Alexa-488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11001 </td><td></td></tr><tr><td> Стрептавидин-Alexa-488 </td><td> Invitrogen </td><td> S11226 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> D21490 </td><td></td></tr><tr><td> Продлите antifade </td><td> Invitrogen </td><td> P-36930 </td><td></td></tr><tr><td> Хирургические ножницы </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 91400-12 </td><td></td></tr><tr><td> Изобразительное ножницы весны </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 15000-02 </td><td></td></tr><tr><td> Блант щипцы </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 11002-12 </td><td></td></tr><tr><td> # 5 тонких щипцов </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 11251-10 </td><td></td></tr><tr><td> Шовный Gut хромовой </td><td> Рыболов </td><td> NC9326254 </td><td></td></tr><tr><td> Стекло Пастера пипетки </td><td> Рыболов </td><td> 22-042-815 </td><td></td></tr><tr><td> Этанол </td><td> Рыболов </td><td> A406P 4 </td><td></td></tr><tr><td> бетадин </td><td> рыболов </td><td> NC9386574 </td><td></td></tr><tr><td> Рана клипы </td><td> Рыболов </td><td> 12032-07 </td><td></td></tr><tr><td> Рана основных </td><td> Рыболов </td><td> 12031-07 </td><td></td></tr></tbody></table>

mammary transplantation of stromal cells and carcinoma cells in c57bl/6j mice

Влиянием стромальных клеток, включая фибробласты на молочные прогрессии опухоли были хорошо документированы с помощью мыши моделей, в частности, путем трансплантации стромальных клеток и клеток эпителия молочной железы мышей. Современные модели трансплантации часто связаны с использованием иммунитетом мышей из-за различных генетических особенностей, характерных для клетки стромы и эпителиальных клеток. Внеклеточной матрицы часто используется для внедрения двух различных типов клеток для последовательного межклеточных взаимодействий, но связаны с использованием Матригель или крысы хвост коллагена, которые иммуногенных субстратов. Отсутствие функциональной Т-клеток от мышей иммунитетом предотвращает точную оценку стромальных клеток опухоли молочной железы на прогрессию в живом организме, что имеет важные последствия на развитие и эффективность лекарств. Более того, ослабленным иммунитетом мышей являются дорогостоящими, трудно породы и требуют особых условий ухода. Чтобы преодолеть эти препятствия, мы разработали подход к orthotopically трансплантации стромальных клеток и эпителиальных клеток мышам с того же генетического фона, чтобы вызвать последовательное формирование опухоли. Эта система включает в себя уборка нормальная, рак связаны фибробластов, PyVmT клетки молочной железы рак и коллаген-доноров мышам C57BL/6J. Затем клетки встроенных в коллагене и пересадить в паховых молочных желез самок мышей C57BL/6J. Трансплантация PyVmT клетки только форма ощутимой опухоли 30-40 дней после пересадки. Endpoint анализ на 60 дней показывает, что совместное трансплантации фибробластов усиливает рост опухоли молочной сравнению с PyVmT клетки трансплантировали в одиночку. Хотя клетки и матрицы от мышей C57BL/6J были использованы в этих исследованиях, изоляции клеток и матричных и трансплантации подход может быть применен к мышей от различных генетических фоны демонстрируя универсальность. Таким образом, эта система может быть использована для исследования молекулярных взаимодействий между клетками стромы и эпителиальных клеток, и преодолевает ограничения критических с ослабленным иммунитетом модели мыши.

Watch this Scientific Journal Video about Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice at JoVE.com

Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice

В этом докладе, мы демонстрируем системы, чтобы изолировать и культуры донорских клеток от мышей молочной железы, и orthotopically трансплантации этих клеток мышам-получателей, чтобы проанализировать стромальных: эпителиальных взаимодействий в молочных развития опухоли.

Молочные трансплантации стромальных клеток и клетки карциномы у мышей C57BL/6J

The influence of stromal cells, including fibroblasts on mammary tumor progression has been well documented through the use of mouse models, in particular ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Экспериментальные Генерация Карцинома-Associated Фибробласты (CAFS) из молочной железы человека Фибробласты

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Human Internal Mammary Artery (IMA) Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

Human Internal Mammary Artery IMA Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

Человека внутренней грудной артерии (IMA) трансплантации и стентирование: модель человека для изучения развития в-стент рестеноз

Preclinical in vivo research models to investigate pathobiological and pathophysiological processes in the development of intimal hyperplasia after vessel ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Выделение, характеристика и сравнительный Дифференциация по правам зубных стволовых клеток, полученных из целлюлозы постоянных зубов с помощью двух различных методов

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

Генерация подкожного и Внутрипеченочный гепатоцеллюлярной карциномы человека ксенотрансплантатов в иммунодефицитных мышей

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Coculture System with an Organotypic Brain Slice and 3D Spheroid of Carcinoma Cells

Сокультивирования система с Органотипической мозга Slice и 3D Сфероид клеток карциномы

Patients with cerebral metastasis of carcinomas have a poor prognosis. However, the process at the metastatic site has barely been investigated, in ...

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Моделирование Спонтанное раке почки (МСКЦ) у мышей после Нефрэктомия

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Ортотопическая инъекции клеток рака молочной железы в молочной жировой ткани мышей для изучения роста опухоли.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Evaluation of Stem Cell Properties in Human Ovarian Carcinoma Cells Using Multi and Single Cell-based Spheres Assays

Оценка стволовых клеток Недвижимость в человека рака яичников клеток с использованием много- и отдельных клеток на основе сферах Анализы

Years of research indicates that ovarian cancers harbor a heterogeneous mixture of cells including a subpopulation of so-called &#8220;cancer stem ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Изучение рака поджелудочной железы стволовых клеток Характеристики для разработки новых стратегий лечения

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

Гетеротопическая шейки Трансплантация сердца у мышей

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...