Name: mammary transplantation of stromal cells and carcinoma cells in c57bl/6j mice
Uploaded: 2011-08-12T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice at JoVE.com

Este proyecto fue financiado por el NIH / NCI número de concesión R00 CA127357 y la Universidad de Kansas Centro de Cáncer de Dotación.

1. El aislamiento y la extracción de colágeno de donantes de ratones C57BL/6J <ol><li> Sacrificio de los ratones normales madura mujer C57BL/6J utilizando métodos aprobados IACUC. </li><li> Cosecha de las colas y de inmersión en etanol al 70% durante 45 minutos para esterilizar tejidos. Seca la cola con papel de seda, envuelva en papel aluminio. Tienda de las colas de -20 ° C hasta que se necesite. </li><li> Coloque la cola en un ambiente estéril, como una campana de flujo laminar. Con la tijera, dividir la piel...

<ol>
	<li>Hayward, S., Haughney, P. C., Rosen, M. A., Greulich, K. M., Weier, H. U., Dahiya, R., Cunha, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+between+adult+human+prostatic+epithelium+and+rat+urogenital+sinus+mesenchyme+in+a+tissue+recombination+model.">Interactions between adult human prostatic epithelium and rat urogenital sinus mesenchyme in a tissue recombination model.</a> Differentiation. 63, 131-131 (1998).</li><li>Cunha, G., Hom, Y. K., Young, P., Brody, J., Asch, B. B., Ip, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Mammary Gland Biology. , (2000).</li><li>Ethier, S. P., Ammerman, C. A., Dziubinski, M. L., Asch, B. B., Ip, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Mammary Gland Biology. , (2000).</li><li>Medina, D., Kittrell, F., Asch, B. B., Ip, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Mammary Gland Biology. , (2000).</li><li>Kalluri, R., Zeisberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblasts+in+cancer.">Fibroblasts in cancer.</a> Nat Rev Cancer. 6, 392-401 (2006).</li><li>DeNardo, D. G., Johansson, M., Coussens, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+cells+as+mediators+of+solid+tumor+metastasis.">Immune cells as mediators of solid tumor metastasis.</a> Cancer Metastasis. 27, 11-18 (2008).</li><li>Naito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+differentiation+and+function+in+health+and+disease.">Macrophage differentiation and function in health and disease.</a> Pathol Int. 58, 143-155 (2008).</li><li>Firestein, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+T+cell+cometh:+interplay+between+adaptive+immunity+and+cytokine+networks+in+rheumatoid+arthritis.">The T cell cometh: interplay between adaptive immunity and cytokine networks in rheumatoid arthritis.</a> J Clin Invest. 114, 471-474 (2004).</li><li>Cheng, N., Chytil, A., Shyr, Y., Joly, A., Moses, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Hepatocyte+Growth+Factor+Signaling+by+Type+II+Transforming+Growth+Factor-{beta}+Receptor+Knockout+Fibroblasts+Promotes+Mammary+Tumorigenesis.">Enhanced Hepatocyte Growth Factor Signaling by Type II Transforming Growth Factor-{beta} Receptor Knockout Fibroblasts Promotes Mammary Tumorigenesis.</a> Cancer Res. 67, 4869-4877 (2007).</li><li>Qiu, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+expression+profiling+identifies+signatures+of+tumor+virulence+in+MMTV-PyMT-transgenic+mice:+correlation+to+human+disease.">Global expression profiling identifies signatures of tumor virulence in MMTV-PyMT-transgenic mice: correlation to human disease.</a> Cancer Res. 64, 5973-5981 (2004).</li><li>Schaffhausen, B. S., Roberts, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+from+polyoma+middle+T+antigen+on+signaling+and+transformation:+A+DNA+tumor+virus+contribution+to+the+war+on+cancer.">Lessons from polyoma middle T antigen on signaling and transformation: A DNA tumor virus contribution to the war on cancer.</a> Virology. 384, 304-316 (2009).</li><li>Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+of+neural+cells+via+retrovirus-mediated+oncogene+transduction.">Immortalization of neural cells via retrovirus-mediated oncogene transduction.</a> Annu Rev Neurosci. 12, 47-65 (1989).</li><li>O'Hare, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditional+immortalization+of+freshly+isolated+human+mammary+fibroblasts+and+endothelial+cells.">Conditional immortalization of freshly isolated human mammary fibroblasts and endothelial cells.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 98, 646-651 (2001).</li><li>Shay, J. W., Wright, W. E., Werbin, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+molecular+mechanisms+of+human+cell+immortalization.">Defining the molecular mechanisms of human cell immortalization.</a> Biochim Biophys Acta. 1072, 1-7 (1991).</li><li>Gudjonsson, T., Villadsen, R., Ronnov-Jessen, L., Petersen, O. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+protocols+used+in+cell+culture+models+of+human+breast+morphogenesis.">Immortalization protocols used in cell culture models of human breast morphogenesis.</a> Cell Mol Life Sci. 61, 2523-2534 (2004).</li><li>Raschke, W. C., Baird, S., Ralph, P., Nakoinz, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+macrophage+cell+lines+transformed+by+Abelson+leukemia+virus.">Functional macrophage cell lines transformed by Abelson leukemia virus.</a> Cell. 15, 261-267 (1978).</li><li>Shen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immortalization+of+endothelial+cells+differentiated+from+mouse+embryonic+stem+cells.">Immortalization of endothelial cells differentiated from mouse embryonic stem cells.</a> Shi Yan Sheng Wu Xue Bao. 35, 218-228 (2002).</li><li>Wang, S. J., Greer, P., Auerbach, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+propagation+of+yolk-sac-derived+endothelial+cells+from+a+hypervascular+transgenic+mouse+expressing+a+gain-of-function+fps/fes+proto-oncogene.">Isolation and propagation of yolk-sac-derived endothelial cells from a hypervascular transgenic mouse expressing a gain-of-function fps/fes proto-oncogene.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 32, 292-299 (1996).</li><li>Tiede, B. J., Owens, L. A., Li, F., DeCoste, C., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+for+non-invasive+single+marker+tracking+of+mammary+stem+cells+in+vivo+reveals+stem+cell+dynamics+throughout+pregnancy.">A novel mouse model for non-invasive single marker tracking of mammary stem cells in vivo reveals stem cell dynamics throughout pregnancy.</a> PLoS One. 4, e8035-e8035 (2009).</li><li>Guzman, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracarotid+injection+of+fluorescence+activated+cell-sorted+CD49d-positive+neural+stem+cells+improves+targeted+cell+delivery+and+behavior+after+stroke+in+a+mouse+stroke+model.">Intracarotid injection of fluorescence activated cell-sorted CD49d-positive neural stem cells improves targeted cell delivery and behavior after stroke in a mouse stroke model.</a> Stroke. 39, 1300-1306 (2008).</li><li>Duda, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+transplantability+of+tumor-associated+stromal+cells.">Differential transplantability of tumor-associated stromal cells.</a> Cancer Res. 64, 5920-5924 (2004).</li></ol>

La contribución funcional de los fibroblastos en la progresión tumoral se ha demostrado a través de modelos de trasplante, en el que el carcinoma de fibroblastos asociados co-trasplante con resultados benignos de mama células epiteliales en un mayor crecimiento del tumor y la invasión 5. Los enfoques convencionales de trasplante han involucrado el uso de ratones SCID o desnudo a las células de trasplante de co-estromales y epiteliales de diferentes orígenes genéticos del ratón o de diferentes especie...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre del reactivo </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentarios (opcional) </th></tr><tr><td> C57BL/6N ratones </td><td> Harlan </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> MMTV-PyVmT ratones transgénicos </td><td> Jackson laboratorios </td><td> 002374 </td><td></td></tr><tr><td> De suero fetal bovino </td><td> Pescador </td><td> SH3039603PR </td><td></td></tr><tr><td> DMEM </td><td> VWR </td><td> 10000113873 </td><td></td></tr><tr><td> Penicilina / estreptomicina </td><td> Pescador </td><td> MT-30-001 </td><td></td></tr><tr><td> anfotericina </td><td> pescador </td><td> BP2645-20 </td><td></td></tr><tr><td> Amicon columnas de filtración Ultracel 50k </td><td> Millipore </td><td> UFC905008 </td><td></td></tr><tr><td> Tubos de rotor Beckman TI </td><td> Beckman </td><td> 355618 </td><td></td></tr><tr><td> Rata cola de colágeno </td><td> Pescador </td><td> CB 40236 </td><td></td></tr><tr><td> EBSS 10x </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7510-100ML </td><td></td></tr><tr><td> Tripsina 1X, un 0,25% en HBSS w / o calcio y magnesio </td><td> Pescador </td><td> MT-25-050-CI </td><td></td></tr><tr><td> Ácido acético glacial </td><td> Pescador </td><td> A491-212 </td><td></td></tr><tr><td> Coomasie azul </td><td> Pescador </td><td> BP101 25 </td><td></td></tr><tr><td> Tripsina </td><td> Sigma Aldrich </td><td> T3924-100ml </td><td></td></tr><tr><td> Colagenasa A </td><td> Sigma AldrichC0130-50 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> hyalronidase </td><td> Sigma Aldrich </td><td> H3884 </td><td></td></tr><tr><td> DNasa </td><td> Sigma Aldrich </td><td> D5025 </td><td></td></tr><tr><td> Kaleidoscope estándar de proteínas </td><td> Biorad </td><td> 1610375 </td><td></td></tr><tr><td> Portaobjetos de vidrio </td><td> Pescador </td><td> 12545-78 </td><td></td></tr><tr><td> Cubreobjetos de vidrio </td><td> VWR </td><td> 101400-042 </td><td></td></tr><tr><td> Vimentina anticuerpos S-20 </td><td> Santa Cruz de Biotecnología </td><td> SC-7558 </td><td></td></tr><tr><td> α-actina de músculo liso </td><td> Abcam </td><td> ab5694 </td><td></td></tr><tr><td> CK14 anticuerpos </td><td> Santa Cruz de Biotecnología </td><td> sc-53253 </td><td></td></tr><tr><td> CK18 anticuerpos </td><td> Abcam </td><td> ab668 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td> Sigma Aldrich </td><td> D9542 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-ratón biotinilado </td><td> Vector de laboratorios </td><td> BA9200 </td><td> Distribuido a través de Fisher </td></tr><tr><td> Anti-ratón-alexa-568 </td><td> Invitrogen </td><td> A10037 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-ratón-alexa-488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11001 </td><td></td></tr><tr><td> Estreptavidina-alexa-488 </td><td> Invitrogen </td><td> S11226 </td><td></td></tr><tr><td> DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> D21490 </td><td></td></tr><tr><td> Prolongar Antifade </td><td> Invitrogen </td><td> P-36930 </td><td></td></tr><tr><td> Tijeras quirúrgicas </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 91400-12 </td><td></td></tr><tr><td> Tijeras finas primavera </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 15000-02 </td><td></td></tr><tr><td> Blunt fórceps </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 11002-12 </td><td></td></tr><tr><td> # 5 pinzas finas </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 11251-10 </td><td></td></tr><tr><td> Intestino sutura crómica </td><td> Pescador </td><td> NC9326254 </td><td></td></tr><tr><td> Pipeta Pasteur de vidrio </td><td> Pescador </td><td> 22-042-815 </td><td></td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Pescador </td><td> A406P 4 </td><td></td></tr><tr><td> betadine </td><td> pescador </td><td> NC9386574 </td><td></td></tr><tr><td> Clips de la herida </td><td> Pescador </td><td> 12032-07 </td><td></td></tr><tr><td> Herida de primera necesidad </td><td> Pescador </td><td> 12031-07 </td><td></td></tr></tbody></table>

mammary transplantation of stromal cells and carcinoma cells in c57bl/6j mice

La influencia de las células del estroma, incluyendo los fibroblastos en la progresión del tumor de mama ha sido bien documentada a través de la utilización de modelos de ratón, en particular a través del trasplante de células del estroma y las células epiteliales en la glándula mamaria de ratones. Los modelos actuales del trasplante a menudo incluyen el uso de ratones inmunodeficientes, debido a los diferentes orígenes genéticos de las células del estroma y células epiteliales. Matrices extracelulares se utilizan a menudo para integrar los dos tipos diferentes de células de consistente interacciones célula-célula, sino que implican el uso de Matrigel o colágeno cola de rata, que son sustratos inmunogénica. La falta de funcionamiento las células T de ratones inmunodeficientes impide una evaluación precisa de las células del estroma en la progresión del tumor mamario en vivo, con importantes implicaciones en el desarrollo de fármacos y su eficacia. Por otra parte, los ratones inmunodeprimidos son costosos, difíciles de reproducir y requiere condiciones especiales de atención. Para superar estos obstáculos, hemos desarrollado un método para el trasplante de células del estroma ortotópicamente y las células epiteliales en ratones a partir de los mismos antecedentes genéticos para inducir la formación de tumores consistente. Este sistema consiste en la recolección normal, carcinoma de los fibroblastos asociados, PyVmT células de carcinoma de mama y el colágeno de donantes ratones C57BL/6J. Las células son entonces integrados en el colágeno y trasplantados en las glándulas mamarias de las mujeres inguinal ratones C57BL/6J. El trasplante de células PyVmT hablar de formar tumores palpables 30-40 días después del trasplante. Análisis de seguridad de 60 días indica que la co-trasplante con los fibroblastos aumenta el crecimiento del tumor de mama en comparación con las células trasplantadas PyVmT solo. Mientras que las células y la matriz de ratones C57BL/6J fueron utilizados en estos estudios, el aislamiento de células y la matriz y el enfoque del trasplante puede ser aplicado a ratones de diferentes bases genéticas que demuestran la versatilidad. En resumen, este sistema puede ser usado para investigar las interacciones moleculares entre las células del estroma y las células epiteliales, y supera las limitaciones críticas en modelos de ratones inmunodeficientes.

Watch this Scientific Journal Video about Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice at JoVE.com

Mammary Transplantation of Stromal Cells and Carcinoma Cells in C57BL/6J Mice

En este informe, demuestran un sistema para aislar y cultivar células de donantes de la glándula mamaria de ratón, y ortotópicamente trasplante de estas células en ratones receptores para analizar estroma: interacciones epiteliales durante el desarrollo de tumores mamarios.

El trasplante de células del estroma mamario y células de carcinoma en los ratones C57BL/6J

The influence of stromal cells, including fibroblasts on mammary tumor progression has been well documented through the use of mouse models, in particular ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Generación experimental de carcinoma asociada a los fibroblastos (CAF) a partir de fibroblastos humanos mamarios

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Investigación

Medicina

Human Internal Mammary Artery (IMA) Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

Human Internal Mammary Artery IMA Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

Humanos mamaria interna arteria (IMA) de Trasplantes y colocación de un stent: un modelo humano para estudiar el desarrollo de la reestenosis intra-stent

Preclinical in vivo research models to investigate pathobiological and pathophysiological processes in the development of intimal hyperplasia after vessel ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Diferenciación de aislamiento, caracterización y comparativo de las células madre derivadas de la Pulpa Dental de los dientes permanentes mediante dos métodos diferentes

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Generation of Subcutaneous and Intrahepatic Human Hepatocellular Carcinoma Xenografts in Immunodeficient Mice

Generación de subcutánea e intrahepática hepatocelular carcinoma humano xenoinjertos en ratones inmunodeficientes

In  vivo experimental models of hepatocellular carcinoma (HCC) that recapitulate  the human disease provide a valuable platform for research into disease  ...

Coculture System with an Organotypic Brain Slice and 3D Spheroid of Carcinoma Cells

Sistema Coculture con un cerebro rebanada organotípicos y 3D esferoide de células de carcinoma

Patients with cerebral metastasis of carcinomas have a poor prognosis. However, the process at the metastatic site has barely been investigated, in ...

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma (mRCC) in Mice Following Nephrectomy

Modeling Spontaneous Metastatic Renal Cell Carcinoma mRCC in Mice Following Nephrectomy

Modelado espontánea metastásico Carcinoma de células renales (CCR metastásico) en ratones después de la nefrectomía

One of the key challenges to improved testing of new experimental therapeutics in renal cell carcinoma (RCC) is the development of models that faithfully ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Inyección ortotópico de células de cáncer de mama en el Mamaria Fat Pad de ratones para estudiar el crecimiento del tumor.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Evaluation of Stem Cell Properties in Human Ovarian Carcinoma Cells Using Multi and Single Cell-based Spheres Assays

Evaluación de las propiedades de células madre en células de carcinoma de ovario humano utilizando multi e individuales basados ​​en células Esferas ensayos

Years of research indicates that ovarian cancers harbor a heterogeneous mixture of cells including a subpopulation of so-called &#8220;cancer stem ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

El estudio de cáncer de páncreas Tallo Características de las células para el desarrollo de nuevas estrategias de tratamiento

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

Heterotópico cervical trasplante cardiaco en ratones

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...