Name: a simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3d spheroids
Uploaded: 2011-05-06T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids at JoVE.com

लेखक के लिए तकनीकी सहायता के लिए डॉ. Dongxuan जिया धन्यवाद देना चाहूंगा. इस लेख में प्रदर्शित होने के कुछ छवियों डॉ. मैल्कम एस स्टाइनबर्ग, आण्विक जीवविज्ञान विभाग, प्रिंसटन विश्वविद्यालय के साथ सहयोग में थे. लेखक भी रक्षा प्रोस्टेट कैंसर रिसर्च प्रोग्राम (पीसी 030,482 अनुदान और पीसी 991,552) के विभाग और / NCI NIH (R01CA118755 अनुदान) अपने उदार सहायता के लिए धन्यवाद देना चाहूंगा.

1. एक सिंगल सेल सस्पेंशन की तैयारी <ol><li> पक्षपाती सेल संस्कृतियों 90% संगम हो जाना चाहिए, जिस monolayers पीबीएस के साथ दो बार rinsed चाहिए. अच्छी तरह से draining के बाद, 2 0.05% trypsin 1 मिमी EDTA के mls (100 मिमी प्लेटों के लिए) जोड़ने के लिए, औ?...

<ol>
	<li>Cukierman, E., Pankov, R., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+interactions+with+three-dimensional+matrices.">Cell interactions with three-dimensional matrices.</a> Curr Opin Cell Biol. 14, 633-639 (2002).</li><li>Nelson, C. M., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+extracellular+matrix,+scaffolds,+and+signaling:+tissue+architecture+regulates+development,+homeostasis,+and+cancer.">Of extracellular matrix, scaffolds, and signaling: tissue architecture regulates development, homeostasis, and cancer.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 22, 287-309 (2006).</li><li>Davis, G. S., Phillips, H. M., Steinberg, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ-layer+surface+tensions+and+&amp;quot;tissue+affinities&amp;quot;+in+Rana+pipiens+gastrulae:+quantitative+measurements.">Germ-layer surface tensions and &amp;quot;tissue affinities&amp;quot; in Rana pipiens gastrulae: quantitative measurements.</a> Dev Biol. 192, 630-644 (1997).</li><li>Schotz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+differences+in+tissue+surface+tension+influence+zebrafish+germ+layer+positioning.">Quantitative differences in tissue surface tension influence zebrafish germ layer positioning.</a> HFSP J. 2, 42-56 (2008).</li><li>Jia, D., Dajusta, D., Foty, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+surface+tensions+guide+in+vitro+self-assembly+of+rodent+pancreatic+islet+cells.">Tissue surface tensions guide in vitro self-assembly of rodent pancreatic islet cells.</a> Dev Dyn. 236, 2039-2049 (2007).</li><li>Foty, R. A., Steinberg, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+differential+adhesion+hypothesis:+a+direct+evaluation.">The differential adhesion hypothesis: a direct evaluation.</a> Dev Biol. 278, 255-263 (2005).</li><li>Li, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+casein+kinase+2+subunits+in+Chinese+hamster+ovary+and+3T3+L1+cells+provides+information+on+the+role+of+the+enzyme+in+cell+proliferation+and+the+cell+cycle.">Expression of the casein kinase 2 subunits in Chinese hamster ovary and 3T3 L1 cells provides information on the role of the enzyme in cell proliferation and the cell cycle.</a> J Biol Chem. 274, 32988-32996 (1999).</li><li>Foty, R. A., Pfleger, C. M., Forgacs, G., Steinberg, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+tensions+of+embryonic+tissues+predict+their+mutual+envelopment+behavior.">Surface tensions of embryonic tissues predict their mutual envelopment behavior.</a> Development. 122, 1611-1620 (1996).</li><li>Wendt, D., Riboldi, S. A., Cioffi, M., Martin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+and+bottlenecks+of+bioreactors+in+3D+cell+culture+and+tissue+manufacturing.">Potential and bottlenecks of bioreactors in 3D cell culture and tissue manufacturing.</a> Adv Mater. 21, 3352-3367 (2009).</li><li>Berry, D. P., Harding, K. G., Stanton, M. R., Jasani, B., Ehrlich, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+wound+contraction:+collagen+organization,+fibroblasts,+and+myofibroblasts.">Human wound contraction: collagen organization, fibroblasts, and myofibroblasts.</a> Plast Reconstr Surg. 102, 124-131 (1998).</li><li>Grinnell, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+biology+in+three-dimensional+collagen+matrices.">Fibroblast biology in three-dimensional collagen matrices.</a> Trends Cell Biol. 13, 264-269 (2003).</li><li>Wang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+interactions+between+beta1-integrin+and+epidermal+growth+factor+receptor+in+three-dimensional+basement+membrane+breast+cultures:+a+different+perspective+in+epithelial+biology.">Reciprocal interactions between beta1-integrin and epidermal growth factor receptor in three-dimensional basement membrane breast cultures: a different perspective in epithelial biology.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 14821-14826 (1998).</li><li>Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversion+of+the+malignant+phenotype+of+human+breast+cells+in+three-dimensional+culture+and+in+vivo+by+integrin+blocking+antibodies.">Reversion of the malignant phenotype of human breast cells in three-dimensional culture and in vivo by integrin blocking antibodies.</a> J Cell Biol. 137, 231-245 (1997).</li><li>Boudreau, N., Werb, Z., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+apoptosis+by+basement+membrane+requires+three-+dimensional+tissue+organization+and+withdrawal+from+the+cell+cycle.">Suppression of apoptosis by basement membrane requires three- dimensional tissue organization and withdrawal from the cell cycle.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 3509-3513 (1996).</li><li>Croix, B., Rak, J. W., Kapitain, S., Sheehan, C., Graham, C. H., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+by+hyaluronidase+of+adhesion-dependent+multicellular+drug+resistance+in+mammary+carcinoma+cells.">Reversal by hyaluronidase of adhesion-dependent multicellular drug resistance in mammary carcinoma cells.</a> J. Nat. Cancer Inst. 88, 1285-1296 (1996).</li><li>Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+structure,+nuclear+organization,+and+gene+expression+in+normal+and+malignant+breast.">Tissue structure, nuclear organization, and gene expression in normal and malignant breast.</a> Cancer Res. 59, 1757-1763 (1999).</li><li>Marrero, B., Messina, J. L., Heller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+tumor+spheroid+in+a+microgravity+environment+as+a+3D+model+of+melanoma.">Generation of a tumor spheroid in a microgravity environment as a 3D model of melanoma.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 45, 523-534 (2009).</li><li>Napolitano, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaffold-free+three-dimensional+cell+culture+utilizing+micromolded+nonadhesive+hydrogels.">Scaffold-free three-dimensional cell culture utilizing micromolded nonadhesive hydrogels.</a> Biotechniques. 43, 494-496 (2007).</li><li>Tibbitt, M. W., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogels+as+extracellular+matrix+mimics+for+3D+cell+culture.">Hydrogels as extracellular matrix mimics for 3D cell culture.</a> Biotechnol Bioeng. 103, 655-663 (2009).</li></ol>

अध्ययनों से पता चला है कि एक तीन आयामी (3 डी) संदर्भ में संवर्धन कोशिकाओं को अलग सेलुलर आकारिकी और संकेत है जब एक कठोर दो आयामी (2d) संस्कृति 9 प्रणाली की तुलना में उत्पादन. उदाहरण के लिए, fibroblast आबादी कोलेज?...

<ul><li> स्वत: सेल काउंटर (TC10 BioRad) </li><li> सीओ 2 मकान का कोना कवर 3540 मॉडल (लैब लाइन) के साथ पानी के स्नान मिलाते हुए </li></ul>

a simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3d spheroids

सेल सेल सामंजस्य और सेल बुनियाद आसंजन के अध्ययन ऐतिहासिक monolayer कठोर substrates के अनुयायी संस्कृतियों पर प्रदर्शन किया गया है. एक ऊतक के भीतर कक्ष, तथापि, आम तौर पर एक पैक निकट ऊतक मास में जो कोशिकाओं को बहुत निकट पड़ोसियों के साथ और बाह्य मैट्रिक्स घटकों के साथ अंतरंग कनेक्शन स्थापित के भीतर encased हैं. तदनुसार, रासायनिक परिवेश और शारीरिक एक 3D ऊतक के भीतर कोशिकाओं द्वारा अनुभवी बलों मौलिक monolayer संस्कृति में विकसित कोशिकाओं द्वारा अनुभवी उन से अलग हैं. यह स्पष्ट रूप से सेलुलर आकारिकी और संकेत प्रभाव दिखाया गया है. कई तरीकों कोलेजन 1 जैल में biomaterial scaffolds में 2 या कक्षों की encapsulation सहित 3 डी सेल संस्कृतियों उत्पन्न करने के लिए तैयार किया गया है. इस तरह के तरीकों, जबकि उपयोगी, अंतरंग प्रत्यक्ष आसंजन सेल सेल के सामान्य ऊतकों में पाया वास्तुकला नहीं पुनरावृत्ति करते हैं. बल्कि, वे और अधिक बारीकी से अनुमानित संस्कृति प्रणालियों में जो एकल कक्षों शिथिल ईसीएम उत्पादों की एक 3D meshwork के भीतर बिखरे हैं. यहाँ, हम एक सरल विधि है जिसमें कोशिकाओं को फांसी ड्रॉप संस्कृति में रखा जाता है और शारीरिक शर्तों के तहत incubated जब तक वे सच 3D spheroids में जो कोशिकाओं को एक दूसरे के साथ और बाह्य मैट्रिक्स घटकों के साथ सीधे संपर्क में रहे हैं के रूप में वर्णन. विधि कोई विशेष उपकरणों की आवश्यकता है और बहुत छोटी मात्रा में है कि ब्याज की सेल कोशिका या सेल ECM बातचीत पर प्रभाव elucidating में हो सकता है किसी भी जैविक एजेंट के अलावा शामिल करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है. विधि को भी दो सह संस्कृति (या अधिक) के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है अलग अलग सेल आबादी इतनी के रूप में कोशिकाओं के बीच स्थानिक रिश्तों निर्दिष्ट में सेल कोशिका या सेल ईसीएम बातचीत की भूमिका को स्पष्ट करने के लिए. सेल सेल सामंजस्य और सेल ECM आसंजन भ्रूण के विकास, ट्यूमर stromal घातक आक्रमण, घाव भरने, और ऊतक इंजीनियरिंग के लिए अनुप्रयोगों के लिए में सेल बातचीत के अध्ययन के cornerstones हैं. इस सरल विधि biomechanical गुणों की माप के लिए या एक physiologically प्रासंगिक मॉडल में आणविक और जैव रासायनिक विश्लेषण के लिए सेलुलर समुच्चय की तरह ऊतक पैदा करने के साधन प्रदान करेगा.

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids at JoVE.com

A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids

हम एक सरल, 3D ऊतक की तरह spheroids और उनके संभावित आवेदन पैदा करने के लिए सेल सेल बातचीत में मतभेद यों के तेजी से विधि का वर्णन.

3D spheroids की पीढ़ी के लिए एक सरल हैंगिंग ड्रॉप सेल संस्कृति प्रोटोकॉल

Studies of cell-cell cohesion and cell-substratum adhesion have historically been performed on monolayer cultures adherent to rigid substrates. Cells ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications

3 डी आतंच की तैयारी स्टेम सेल संस्कृति अनुप्रयोगों के लिए scaffolds

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells ...

Generation and Recovery of &beta;-cell Spheroids From Step-growth PEG-peptide Hydrogels

Generation and Recovery of &#946;-cell Spheroids From Step-growth PEG-peptide Hydrogels

और स्टेप - विकास खूंटी पेप्टाइड Hydrogels से β सेल spheroids का सृजन वसूली

Hydrogels are hydrophilic crosslinked polymers that provide a three-dimensional  microenvironment with tissue-like elasticity and high permeability for  ...

3D Hydrogel Scaffolds for Articular Chondrocyte Culture and Cartilage Generation

जोड़ उपास्थिकोशिका संस्कृति और उपास्थि पीढ़ी के लिए 3 डी हाइड्रोजेल Scaffolds

Human articular cartilage is highly susceptible to damage and has limited self-repair and regeneration potential. Cell-based strategies to engineer ...

Tunable Hydrogels from Pulmonary Extracellular Matrix for 3D Cell Culture

3 डी सेल संस्कृति के लिए पल्मोनरी बाह्य मैट्रिक्स से Tunable Hydrogels

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung ...

A Protocol for Real-time 3D Single Particle Tracking

रीयल-टाइम 3d एकल कण ट्रैकिंग के लिए एक प्रोटोकॉल

Real-time three-dimensional single particle tracking (RT-3D-SPT) has the potential to shed light on fast, 3D processes in cellular systems. Although ...

Construction of a Multilayered Mesenchymal Stem Cell Sheet with a 3D Dynamic Culture System

एक 3 डी गतिशील संस्कृति प्रणाली के साथ एक Multilayered Mesenchymal स्टेम सेल शीट का निर्माण

Stem cell therapy shows a promising future in regenerating injured organ and tissues, and the cell sheet technique has been developed to improve the low ...

A Human 3D Extracellular Matrix-Adipocyte Culture Model for Studying Matrix-Cell Metabolic Crosstalk

मैट्रिक्स-सेल मेटाबोलिक क्रॉसटॉक का अध्ययन करने के लिए एक मानव 3 डी एक्सट्रासेलुलर मैट्रिक्स-एडिपोसाइट संस्कृति मॉडल

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of ...

Large-Scale, Automated Production of Adipose-Derived Stem Cell Spheroids for 3D Bioprinting

3 डी बायोप्रिंटिंग के लिए वसा-व्युत्पन्न स्टेम सेल स्फेरॉइड का बड़े पैमाने पर, स्वचालित उत्पादन

Adipose-derived stromal/stem cells (ASCs) are a subpopulation of cells found in the stromal vascular fraction of human subcutaneous adipose tissue ...

Generation of Multicue Cellular Microenvironments by UV-Photopatterning of Three-Dimensional Cell Culture Substrates

त्रि-आयामी सेल संस्कृति सब्सट्रेट के यूवी-फोटोपैटर्निंग द्वारा मल्टीक्यू सेलुलर माइक्रोएन्वायरमेंट की पीढ़ी

The extracellular matrix is an important regulator of cell function. Environmental cues existing in the cellular microenvironment, such as ligand ...

Human Liver Spheroids from Peripheral Blood for Liver Disease Studies

लिवर रोग अध्ययन के लिए परिधीय रक्त से मानव यकृत स्फेरॉइड

Human liver cells can form a three-dimensional (3D) structure capable of growing in culture for some weeks, preserving their functional capacity. Due to ...