Name: a simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3d spheroids
Uploaded: 2011-05-06T16:00:00
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著者は、技術支援のために博士は東軒家に感謝したいと思います。この記事に表示される画像の一部は、博士マルコムS.スタインバーグ、分子生物学科、プリンストン大学と共同でいました。著者はまた、彼らの寛大な支援のために国防前立腺癌研究プログラム（助成金のPC - 030482およびPC - 991552）とNCI / NIH（助成R01CA118755）の部門に感謝の意を表します。

1。単一の細胞懸濁液の調製<ol><li>接着細胞の培養は90％のコンフルエンスまで増殖されるべきである、whereupon単層をPBSで2回リンスする必要があります。よく排水後、0.05％トリプシン- 1mMのEDTAの2 MLSを（100 mmプレートの場合）追加し、37℃での細胞がデタッチされるまで。完全培地の2 MLSを追加することにより、トリプシン処理を停止し、静かに、細胞が懸濁液になるまで混合物を砕いて粉に...

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	<li>Cukierman, E., Pankov, R., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+interactions+with+three-dimensional+matrices.">Cell interactions with three-dimensional matrices.</a> Curr Opin Cell Biol. 14, 633-639 (2002).</li><li>Nelson, C. M., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+extracellular+matrix,+scaffolds,+and+signaling:+tissue+architecture+regulates+development,+homeostasis,+and+cancer.">Of extracellular matrix, scaffolds, and signaling: tissue architecture regulates development, homeostasis, and cancer.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 22, 287-309 (2006).</li><li>Davis, G. S., Phillips, H. M., Steinberg, M. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogels+as+extracellular+matrix+mimics+for+3D+cell+culture.">Hydrogels as extracellular matrix mimics for 3D cell culture.</a> Biotechnol Bioeng. 103, 655-663 (2009).</li></ol>

研究では、三次元コンテキスト（3D）での培養細胞が異なる細胞の形態とリジッド2次元（2D）文化系9と比較してシグナル伝達をもたらすことが示されている。例えば、線維芽細胞に移入コラーゲンゲルは、3Dでの線維芽細胞の形態は、2D 10,11で観察されたものとはかなり異なっていることを示しています。同様に、三次元培養では、乳腺上皮細胞の組織特異的分化を誘導する?...

<ul><li>自動セルカウンター（バイオラッドTC10） </li><li> CO 2切妻のカバーモデル3540（ラボライン）で水浴を揺るがす</li></ul>

a simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3d spheroids

細胞間の凝集と細胞 - 基質接着の研究は歴史的に硬質基材への付着性単層培養で行われている。組織内の細胞は、しかし、一般的に細胞は多くの近い隣人とし、細胞外マトリックス成分との親密な接続を確立した最密充填組織塊内に収められています。したがって、化学的環境と3次元組織内の細胞が経験する物理的な力は、単層培養で増殖させた細胞で経験したものよりも根本的に異なっています。これは、著しく細胞形態及びシグナル伝達に影響を与えることが示されている。いくつかのメソッドは、コラーゲンゲル1または生体材料足場2のセルのカプセル化を含む3次元細胞培養を生成するために考案されている。このような方法は、便利な一方、正常組織に見られる親密な直接細胞間接着のアーキテクチャを要約することはありません。単一の細胞が疎なECM製品の3次元網目構造内に分散されているのではなく、彼らがより密接に近似する培養システム。ここで、我々は、彼らは、細胞同士や細胞外マトリックス成分と直接接触している真の3D回転楕円体を形成するまで細胞がドロップ文化をハング内に配置し、生理的条件下でインキュベートされる、単純な方法を説明します。メソッドは特殊な装置を必要とせず、細胞間または細胞- ECM相互作用への影響を解明することに関心があると思われる非常に少量の任意の生物学的因子の付加を含むように適合させることができます。メソッドは、セル間の空間関係を指定するには、細胞間や細胞 - ECM間の相互作用の役割を解明するために共培養つ（以上）の異なる細胞集団にも使用できます。細胞間の凝集と細胞- ECMの接着は胚発生の研究の基礎、悪性浸潤における腫瘍間質細胞の相互作用、創傷治癒、及び組織工学への応用のためです。この簡単な方法は、生体力学的特性の測定のためのまたは生理学的に関連するモデルの分子的および生化学的解析のための細胞凝集のような組織を生成する手段を提供します。

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A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids

我々は、細胞 - 細胞相互作用の違いを定量化するために三次元組織のような回転楕円体とそれらの潜在的なアプリケーションを生成する単純な、急速な方法を説明します。

3D楕円体の生成のための簡単​​なハンギングドロップ細胞培養プロトコル

Studies of cell-cell cohesion and cell-substratum adhesion have historically been performed on monolayer cultures adherent to rigid substrates. Cells ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications

幹細胞培養アプリケーションのための3Dフィブリン足場の調製

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells ...

生物工学

Generation and Recovery of &beta;-cell Spheroids From Step-growth PEG-peptide Hydrogels

Generation and Recovery of &#946;-cell Spheroids From Step-growth PEG-peptide Hydrogels

ステップ成長PEG-ペプチドハイドロゲルからβ細胞のスフェロイドの発生と復旧

Hydrogels are hydrophilic crosslinked polymers that provide a three-dimensional  microenvironment with tissue-like elasticity and high permeability for  ...

3D Hydrogel Scaffolds for Articular Chondrocyte Culture and Cartilage Generation

関節軟骨細胞培養軟骨の生成のための3Dハイドロゲルの足場

Human articular cartilage is highly susceptible to damage and has limited self-repair and regeneration potential. Cell-based strategies to engineer ...

Tunable Hydrogels from Pulmonary Extracellular Matrix for 3D Cell Culture

3D細胞培養のための肺細胞外マトリックスから調整可能なヒドロゲル

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung ...

A Protocol for Real-time 3D Single Particle Tracking

リアルタイム 3 D 単一粒子追跡のためのプロトコル

Real-time three-dimensional single particle tracking (RT-3D-SPT) has the potential to shed light on fast, 3D processes in cellular systems. Although ...

Construction of a Multilayered Mesenchymal Stem Cell Sheet with a 3D Dynamic Culture System

3 D ダイナミック文化システムの多層間葉系幹細胞シートの構築

Stem cell therapy shows a promising future in regenerating injured organ and tissues, and the cell sheet technique has been developed to improve the low ...

A Human 3D Extracellular Matrix-Adipocyte Culture Model for Studying Matrix-Cell Metabolic Crosstalk

マトリックス細胞代謝クロストークを研究するためのヒト3D細胞外マトリックス-脂肪細胞培養モデル

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of ...

Large-Scale, Automated Production of Adipose-Derived Stem Cell Spheroids for 3D Bioprinting

3Dバイオプリンティングのための脂肪由来幹細胞スフェロイドの大規模自動生産

Adipose-derived stromal/stem cells (ASCs) are a subpopulation of cells found in the stromal vascular fraction of human subcutaneous adipose tissue ...

Generation of Multicue Cellular Microenvironments by UV-Photopatterning of Three-Dimensional Cell Culture Substrates

三次元細胞培養基材のUVフォトパターニングによるマルチキュー細胞微小環境の生成

The extracellular matrix is an important regulator of cell function. Environmental cues existing in the cellular microenvironment, such as ligand ...

Human Liver Spheroids from Peripheral Blood for Liver Disease Studies

肝疾患研究のための末梢血からのヒト肝スフェロイド

Human liver cells can form a three-dimensional (3D) structure capable of growing in culture for some weeks, preserving their functional capacity. Due to ...

3D楕円体の生成のための簡単​​なハンギングドロップ細胞培養プロトコル

3D楕円体の生成のための簡単なハンギングドロップ細胞培養プロトコル