Name: a simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3d spheroids
Uploaded: 2011-05-06T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids at JoVE.com

Yazar Dr. Dongxuan Jia teknik yardım için teşekkür etmek istiyorum. Bu makalede ortaya çıkan görüntülerin bazıları Dr Malcolm S. Steinberg, Moleküler Biyoloji Anabilim Dalı, Princeton Üniversitesi ile işbirliği içinde. Yazar ayrıca, Savunma Prostat Kanseri Araştırma Programı (hibe 030.482 PC ve PC-991.552) Bakanlığı ve NCI / NIH (hibe R01CA118755) cömert desteği için teşekkür etmek istiyorum.

1. Tek Bir Hücre Süspansiyon hazırlanması <ol><li> Bunun üzerine mono tabakaları yapışmış hücre kültürleri,% 90 izdiham büyüdü olmalıdır PBS ile iki kez durulanır olmalıdır. De boşalttıktan sonra, 2 ml% 0.05 tripsin-1 mM EDTA (100 mm plaka için) ekleyin ve 37 inkübe ° C hücreleri ayırmak kadar. 2 ml tam orta ekleme ve hücreleri süspansiyon kadar karışımı hafifçe çiğnemek için 5 ml pipet kullanın trypsinization Dur. 15 ml konik tüp hücreleri aktarın. </li><li> RT az 5 dakika i?...

<ol>
	<li>Cukierman, E., Pankov, R., Yamada, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+interactions+with+three-dimensional+matrices.">Cell interactions with three-dimensional matrices.</a> Curr Opin Cell Biol. 14, 633-639 (2002).</li><li>Nelson, C. M., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+extracellular+matrix,+scaffolds,+and+signaling:+tissue+architecture+regulates+development,+homeostasis,+and+cancer.">Of extracellular matrix, scaffolds, and signaling: tissue architecture regulates development, homeostasis, and cancer.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 22, 287-309 (2006).</li><li>Davis, G. S., Phillips, H. M., Steinberg, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germ-layer+surface+tensions+and+&amp;quot;tissue+affinities&amp;quot;+in+Rana+pipiens+gastrulae:+quantitative+measurements.">Germ-layer surface tensions and &amp;quot;tissue affinities&amp;quot; in Rana pipiens gastrulae: quantitative measurements.</a> Dev Biol. 192, 630-644 (1997).</li><li>Schotz, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+differences+in+tissue+surface+tension+influence+zebrafish+germ+layer+positioning.">Quantitative differences in tissue surface tension influence zebrafish germ layer positioning.</a> HFSP J. 2, 42-56 (2008).</li><li>Jia, D., Dajusta, D., Foty, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+surface+tensions+guide+in+vitro+self-assembly+of+rodent+pancreatic+islet+cells.">Tissue surface tensions guide in vitro self-assembly of rodent pancreatic islet cells.</a> Dev Dyn. 236, 2039-2049 (2007).</li><li>Foty, R. A., Steinberg, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+differential+adhesion+hypothesis:+a+direct+evaluation.">The differential adhesion hypothesis: a direct evaluation.</a> Dev Biol. 278, 255-263 (2005).</li><li>Li, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+casein+kinase+2+subunits+in+Chinese+hamster+ovary+and+3T3+L1+cells+provides+information+on+the+role+of+the+enzyme+in+cell+proliferation+and+the+cell+cycle.">Expression of the casein kinase 2 subunits in Chinese hamster ovary and 3T3 L1 cells provides information on the role of the enzyme in cell proliferation and the cell cycle.</a> J Biol Chem. 274, 32988-32996 (1999).</li><li>Foty, R. A., Pfleger, C. M., Forgacs, G., Steinberg, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surface+tensions+of+embryonic+tissues+predict+their+mutual+envelopment+behavior.">Surface tensions of embryonic tissues predict their mutual envelopment behavior.</a> Development. 122, 1611-1620 (1996).</li><li>Wendt, D., Riboldi, S. A., Cioffi, M., Martin, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+and+bottlenecks+of+bioreactors+in+3D+cell+culture+and+tissue+manufacturing.">Potential and bottlenecks of bioreactors in 3D cell culture and tissue manufacturing.</a> Adv Mater. 21, 3352-3367 (2009).</li><li>Berry, D. P., Harding, K. G., Stanton, M. R., Jasani, B., Ehrlich, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+wound+contraction:+collagen+organization,+fibroblasts,+and+myofibroblasts.">Human wound contraction: collagen organization, fibroblasts, and myofibroblasts.</a> Plast Reconstr Surg. 102, 124-131 (1998).</li><li>Grinnell, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+biology+in+three-dimensional+collagen+matrices.">Fibroblast biology in three-dimensional collagen matrices.</a> Trends Cell Biol. 13, 264-269 (2003).</li><li>Wang, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+interactions+between+beta1-integrin+and+epidermal+growth+factor+receptor+in+three-dimensional+basement+membrane+breast+cultures:+a+different+perspective+in+epithelial+biology.">Reciprocal interactions between beta1-integrin and epidermal growth factor receptor in three-dimensional basement membrane breast cultures: a different perspective in epithelial biology.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 95, 14821-14826 (1998).</li><li>Weaver, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversion+of+the+malignant+phenotype+of+human+breast+cells+in+three-dimensional+culture+and+in+vivo+by+integrin+blocking+antibodies.">Reversion of the malignant phenotype of human breast cells in three-dimensional culture and in vivo by integrin blocking antibodies.</a> J Cell Biol. 137, 231-245 (1997).</li><li>Boudreau, N., Werb, Z., Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+apoptosis+by+basement+membrane+requires+three-+dimensional+tissue+organization+and+withdrawal+from+the+cell+cycle.">Suppression of apoptosis by basement membrane requires three- dimensional tissue organization and withdrawal from the cell cycle.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 93, 3509-3513 (1996).</li><li>Croix, B., Rak, J. W., Kapitain, S., Sheehan, C., Graham, C. H., Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+by+hyaluronidase+of+adhesion-dependent+multicellular+drug+resistance+in+mammary+carcinoma+cells.">Reversal by hyaluronidase of adhesion-dependent multicellular drug resistance in mammary carcinoma cells.</a> J. Nat. Cancer Inst. 88, 1285-1296 (1996).</li><li>Bissell, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+structure,+nuclear+organization,+and+gene+expression+in+normal+and+malignant+breast.">Tissue structure, nuclear organization, and gene expression in normal and malignant breast.</a> Cancer Res. 59, 1757-1763 (1999).</li><li>Marrero, B., Messina, J. L., Heller, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+a+tumor+spheroid+in+a+microgravity+environment+as+a+3D+model+of+melanoma.">Generation of a tumor spheroid in a microgravity environment as a 3D model of melanoma.</a> In Vitro Cell Dev Biol Anim. 45, 523-534 (2009).</li><li>Napolitano, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaffold-free+three-dimensional+cell+culture+utilizing+micromolded+nonadhesive+hydrogels.">Scaffold-free three-dimensional cell culture utilizing micromolded nonadhesive hydrogels.</a> Biotechniques. 43, 494-496 (2007).</li><li>Tibbitt, M. W., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogels+as+extracellular+matrix+mimics+for+3D+cell+culture.">Hydrogels as extracellular matrix mimics for 3D cell culture.</a> Biotechnol Bioeng. 103, 655-663 (2009).</li></ol>

Çalışmalar, üç boyutlu bir bağlamda (3D) hücreleri kültür farklı hücresel morfoloji ve katı bir iki boyutlu (2D) kültür sistemi, 9 kıyasla sinyalizasyon ürettiğini göstermiştir . Örneğin, fibroblast nüfuslu kollajen jeller 3D fibroblast morfolojisi 2D 10,11 gözlenen oldukça farklı olduğunu göstermektedir. Benzer şekilde, 3D kültürü meme epitel hücrelerinin doku-spesifik farklılaşma neden olabilir. 3D kültür sistemleri, normal ve malign hücrelerin ayırt etmek i?...

<ul><li> otomatik hücre sayıcı (BioRad TC10) </li><li> CO 2 beşik örtüsü Model 3540 (Lab-line) ile su banyosunda sallayarak </li></ul>

a simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3d spheroids

Katı yüzeye yapışık tek tabaka kültürler, hücre-hücre uyum ve hücre alt tabaka yapışma çalışmalar tarihsel yapılmamıştır. Ancak, Hücreler, doku içinde hücrelerin çok yakın komşuları ile ve ekstrasellüler matriks bileşenleri ile yakın bağlantıları kurmak yakından paketlenmiş bir doku kitlesi içinde genellikle kaplı bulunmaktadır. Buna göre, kimyasal ortam ve 3D doku hücreleri içinde yaşadığı fiziksel kuvvetlerin tek tabaka kültüründe yetişen hücreleri tarafından deneyimli dışında temelde farklı. Bu hücresel morfoloji ve sinyalizasyon belirgin etkisi gösterilmiştir. Kollajen jeller 1 veya biyomalzeme iskelelerde 2 hücre de dahil olmak üzere kapsülleme 3D hücre kültürleri oluşturmak için çeşitli yöntemler geliştirilmiştir. Bu tür yöntemler, yararlı olmakla beraber, normal dokularda bulunan samimi doğrudan hücre-hücre adezyon mimarisi özetlemek değil. Aksine, onlar daha yakından yaklaşık kültür sistemleri tek hücre, gevşek bir 3D ECM ürünleri ağ örgüsü içinde dağılmış bulunmaktadır. Burada, basit bir yöntem hücreleri açılan kültür asılı olarak yerleştirilir ve hücrelerin birbirleri ile ve ekstrasellüler matriks bileşenleri ile doğrudan temas halinde olan gerçek 3D parçacıklarının oluşana kadar fizyolojik şartlar altında inkübe olduğu açıklanmaktadır. Bu yöntem hiçbir özel ekipman gerektirir ve hücre-hücre veya hücre-ECM etkileşimi üzerindeki etkileri nedenlerine açıklık ilgi olabilir çok küçük miktarlarda herhangi bir biyolojik ajan eklenmesi için adapte edilebilir. Yöntemi de ko-kültür iki (veya daha fazla) farklı hücre popülasyonlarının hücreleri arasındaki mekansal ilişkileri belirterek, hücre-hücre veya hücre-ECM etkileşimleri rolünü aydınlatmak için kullanılabilir. , Hücre-hücre uyum ve hücre-ECM yapışma malign invazyon, yara iyileşmesi, doku mühendisliği uygulamaları için embriyonik gelişim, stromal tümör hücre etkileşimi çalışmaları temel taşlarından. Bu basit bir yöntem gibi doku biyomekanik özellikleri ölçümü veya hücresel, fizyolojik ilgili bir model moleküler ve biyokimyasal analiz için agrega üreten bir araç sağlayacaktır.

Watch this Scientific Journal Video about A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids at JoVE.com

A Simple Hanging Drop Cell Culture Protocol for Generation of 3D Spheroids

Biz 3D doku parçacıklarının ve potansiyel uygulama üreten hücre-hücre etkileşimleri farklılıkları ölçmek için basit ve hızlı bir yöntem açıklanmaktadır.

3D parçacıklarının Üretimi için Basit Asma Bırak Hücre Kültürü Protokolü

Studies of cell-cell cohesion and cell-substratum adhesion have historically been performed on monolayer cultures adherent to rigid substrates. Cells ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications

3D Fibrin hazırlanması Kök Hücre Kültürü Uygulamaları için iskeleleri

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells ...

3D Hydrogel Scaffolds for Articular Chondrocyte Culture and Cartilage Generation

Eklem Kondrosit Kültür ve Kıkırdak Üretimi için 3D hidrojel iskeleleri

Human articular cartilage is highly susceptible to damage and has limited self-repair and regeneration potential. Cell-based strategies to engineer ...

Micropatterning and Assembly of 3D Microvessels

Micropatterning ve 3D mikrodamarlar Meclisi

In vitro platforms to study endothelial cells and vascular biology are largely limited to 2D endothelial cell culture, flow chambers with polymer or glass ...

Tunable Hydrogels from Pulmonary Extracellular Matrix for 3D Cell Culture

3D Hücre Kültürü için Pulmoner Ekstrasellüler Matrix Ayarlanabilir Hidrojellerinin

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung ...

A Protocol for Real-time 3D Single Particle Tracking

Gerçek zamanlı 3D tek parçacık izleme için bir iletişim kuralı

Real-time three-dimensional single particle tracking (RT-3D-SPT) has the potential to shed light on fast, 3D processes in cellular systems. Although ...

Construction of a Multilayered Mesenchymal Stem Cell Sheet with a 3D Dynamic Culture System

3D dinamik kültür sistemi ile bir çok katmanlı mezenkimal kök hücre levha inşaatı

Stem cell therapy shows a promising future in regenerating injured organ and tissues, and the cell sheet technique has been developed to improve the low ...

A Human 3D Extracellular Matrix-Adipocyte Culture Model for Studying Matrix-Cell Metabolic Crosstalk

Bir İnsan 3D Ekstrasellüler Matrix-Adiposit Kültür Modeli Matrix-Hücre Metabolik Crosstalk Çalışma için

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of ...

Large-Scale, Automated Production of Adipose-Derived Stem Cell Spheroids for 3D Bioprinting

3D Biyobaskı için Adipoz Türevi Kök Hücre Sferoidlerinin Büyük Ölçekli, Otomatik Üretimi

Adipose-derived stromal/stem cells (ASCs) are a subpopulation of cells found in the stromal vascular fraction of human subcutaneous adipose tissue ...

Generation of Multicue Cellular Microenvironments by UV-Photopatterning of Three-Dimensional Cell Culture Substrates

Üç Boyutlu Hücre Kültürü Substratlarının UV-Fotodesenlenmesi ile Multicue Hücresel Mikro Ortamların Oluşturulması

The extracellular matrix is an important regulator of cell function. Environmental cues existing in the cellular microenvironment, such as ligand ...

Human Liver Spheroids from Peripheral Blood for Liver Disease Studies

Karaciğer Hastalığı Çalışmaları için Periferik Kandan İnsan Karaciğer Sferoidleri

Human liver cells can form a three-dimensional (3D) structure capable of growing in culture for some weeks, preserving their functional capacity. Due to ...